Способ приготовления актинолизата Советский патент 1990 года по МПК A61K35/66 

Пример 2. В сравнении с про т|отипом проверяют терапевтическую эффективность низко- (с мол.м. до 1J5000 D) и высокомолекулярной (с мол.м. 15000-25000 D) фракций ак- Тинолизата. Испытание эффективности Действия препаратов проводят следу- кИцим образом. Морским свцнкам маетой 200,0-220,0 г с экспериментальным актиномикозом правого бедра на / сут после заражения вводят в одном случае цельный актинолизат, а в дру

гом - низкомолекулярную фракцию (I фракция), в третьем - высокомолекулярную фракцию (фракция II) в мышцы левого бедра в дозе по U,1 см3. После четырех инъекций с интервалами в 3 дня измеряют величину очага поражения, патоморфологическим способом изучают картину воспаления и подсчитывают фагоцитирующие клетки в очаге воспаления. Результаты испытания эффективности действия актинолизата представлены в табл. 1.

Таблица 1

Изобретение относится к микологии и может быть использовано для получения лечебных препаратов при актиномикозе. Целью изобретения является повышение активности продукта.Цельный актинолизат получают путем двухмесячного культивирования аэробных лизирующихся актиномицетов на мясопептонном бульоне. Фильтруют через мембраны, задерживающие продукты с мол.м.более 15000 Д. Удаляют таким образом из препарата наиболее высокомолекулярные балластные компоненты и снижают общее содержание белка после фильтрации на 30%. Животным с экспериментальной актиномикотической инжекцией на высоте развития процесса вводят в течение двух недель низкомолекулярную фракцию актинолизата с последующим изучением величины очага поражения, характера воспалительной реакции, числа фагоцитирующих клеток. Параллельно аналогичные исследования проводят на контрольной группе животных, получающих цельный актинолизат. Уменьшение размеров воспалительного очага, регрессивный характер воспаления и повышение количества фагоцитирующих лучистые грибы клеток подтверждают стимулирование фагоцитоза при использовании препарата. Это может быть использовано для повышения терапевтической эффективности актинолизата при лечении больных актиномикозом - тяжелого, хронического нагноительного процесса, длительно текущего и трудно поддающегося лечению. 2 табл.

Интенсивность патологического процесса (в баллах) при лечении

4,0 + 0,41

42,63t 0,47

1,10±0,29 3,46+0,63

Интенсивность патологического процесса оценивают по баллам.

6 баллов. Прогрессирующая стадия развития процесса. Многокамерная гранулема, активно развивающиеся друзы, гигантские клетки отсутствуют.

5 баллов. Прогрессирующая стадия развития процесса.Множественные гранулемы с жизнеспособными друзами, появление гигантских клеток на периферии очага.

4 балла. Прогрессирующая стадия развития процесса. Единичные гранулемы с

жизнеспособными друзами актиномицетов, единичные гигантские клетки на периферии.

3 балла. Пограничная стадия между прогрессирующим процессом и регрессом

гранулем. Множественные гранулемы с начинающейся гибелью возбудителя, на периферии гигантские клетки с начальной стадией фагоцитоза, появление клеток с завершенным фагоцитозом.

2 балла. Регрессивная стадия развития гранулем. Единичные гранулемы с погибшим возбудителем, гигантские клетки проникают в центр гранулем, фагоцитоз завершенный.

1 балл. Регресс гранулем. Гранулемы состоят из гигантских клеток, друзы

фрагментированы, полностью фагоцитированы многоядерными гигантскими клетками.

О баллов. Отсутствие патологии. Соединительнотканный рубец на месте бывшей гранулемы или полное отсутствие воспалительного процесса.

Представленные . 1 данные патоморфологических изменений в очаге воспаления показывают, что наиболее активный фагоцитоз в гранулеме достигается при использовании низко- JQ молекулярной фракции I. У всех животных этой группы отсутствует активный актиномикотический воспалительный процесс и наблюдается регресс и рубцевание гранулемы.ее

Отличие в терапевтической эффективности I фракции по отношению к цельному актинолизату достоверно значимо (Р 0,05). У группы животных,

леченных фракцией II, обогащенной высокомолекулярными компонентами с мол.м. 15000-25000 D, воспалительный процесс близок по характеру к процессу у животных контрольный, нелеченной группы (Р 0,05). Эти данные свидетельствуют о том, что высокомолекулярные компоненты актинолизата не только не стимулируют фагоцитоз в актиномикотической гранулеме, но и тормозят этот процесс.

Пример 3, Проведена сравнительная оценка эффективности действия цельного актинолизата и его низкомолекулярной фракции, полученной по примеру 1. Данные получены на лабораторных животных (морских свинках)s зараженных смесью двух культур аэробных лучистых грибов - возбудителей актиномикоза, выделенных из патологического материала от больных актино- микозом. Через 7 дней после заражения на высоте развития актиномикоти- ческой инфекции одной группе животных вводят цельный актинолизат (контроль), другой - низкомолекулярную фракцию актинолизата.

Через 7 дней после начала введения препарата проверяют наличие и величиПараметры процесса

Цельный актинолизат, 14 сут после начала лечения

Величина инфильтрата 0,8x1,0-0,5x0,7 см Прогрессирующий характер воспаления Регрессирующий характ воспаления Выздоровление Количество гигантских клеток, участвующих в фагоцитозе лучистых грибов

Из данных табл. 2 следует, что применение низкомолекулярной фракции актинолиэата (мол.м. более 15000 D), полученной при фильтрации цельного актинолизата через мембранные фильтры стимулирует фагоцитоз, что выражается в изменении количества фагоцитирующих клеток 80-120 по сравнению с 2-40 в прототипе, уменьшает процесс инфильтрации и ускоряет выздоровление.

5

ну инфильтрата и через 2 недепи животных усыпляют эфиром. Патологический материал помещают в 10%-ный раствор формалина, заливают в парафин и изготовляют серию срезов, которые окрашивают гематоксилином и эозином.

В табл. 2 представлены сравнительные данные изучения патоморфологичес- ких изменений в очаге воспаления, а также приведены сравнительные результаты фагоцитарной активности препарата -по способу-прототипу и по предлагаемому способу.

Таблица 2

Ниэкомолекулярная фракция актинолизата, 14 сут после начала лечения

0,5x0,6-0,2x0,3 см

20 животных 16 - 20-40

80-120

Формула изобретения Способ приготовления актинолизата, включающий культивирование аэробных лизирующихся актиномицетов на мясопеп- тонном бульоне в течение двух месяцев, отделение культуральной жидкости и последующую стерилизацию, отличающийся тем, что, с целью повышения активности продукта,после стерилизации культуральную жидкость дополнительно очищают от высокомолекулярных фракций с мол.м. 15000-25000 D.