Способ оценки неспецифической иммунофлуоресценции Советский патент 1990 года по МПК G01N33/533 

Изобретение относится к биологии, в частности к иммунохимии, и может быть использовано как тест для определения наличия исследуемого антигена на гистологическом препарате.

Целью изобретения является повышение точности локализации исследуемого антигена и выявление несп-ецифи- ческой флуоресценции на гистологических препаратах в методе непрямой им- мунофлуоресценции.

Способ выполняется следующим образом.

Испытуемые гистологические препараты инкубируют с антителами к исследуемому антигену, для элюции этих первичных антител с антигенного

субстрата используют 3-молярный раствор роданистого натрия. Препараты отмывают фосфатным буфером, обрабатывают вторичными антителами к иммуноглобулинам кролика, мечеными флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ), Специфическая флуоресценция при этоу исчезает, а неспецифическая фоновая флуоресценция остается такой же, как на контрольных препаратах, обработанных только фосфатным буфером, или препаратах, обработанных только ФИТЦ - конъюгированными антитепами. Пример. Исследовали локализацию ганглиозидов () на поверхности ранних доимштантационных зародышей мыши методом непрямой иммуносл

00 СП

б

шуоресценции. Яйцеклетки и ранних зародьшей фиксировали, помещая в 4%-ный формалин на 2 ч. Затем зародышей переносили в капле на обезжиренные предметные стекла, предварительно обработанные в течение 30 мин 0,1%-ным раствором- протамин-сульфата и.подсушивали на гистологическом столике при 40°С. Перед процедурой иммунофлюоресцентного окрашивания препараты отмывали в ФБ (0,1М; рН 7,2), содержащем 0,01% тритон-х-100.

Препараты обрабатывали 60 мин раствором первичных антител к G ,

Ml

отмывали 30 мин фосфатным буфером с 0,01%-ным тритоном-х-100 (0,01 М, рН 7,2; этот буфер использовали во всех других случаях), затем наносили раствор ЗМ роданистого натрия, инкубировали 30 мин, отмывали препараты и наносили ФИТЦ-кон7 югированные вторичные антитела к иммуноглобулинам кролика. Далее следовала обычная процедура отмывки и заключения препа ратов в глицерин. В препаратах, обработанных таким образом, специфическая флюоресценция на поверхности зародьшей не наблюдалась. Процесс элю- ирования антител с антигенного субстрата занимает 30 мин.

Предложенный способ позволяет точно дифференцировать специфическую и неспецифическую флюоресценцию за

счет полного гашения специфической

флюоресценции после элюирования связанных первичных антител ЗМ раствором роданистого натрия; при иммуно- флюоресцентном исследовании локализации антигена, слабо экспрессирован- препарате, и наличии фонового неспецифического свечения введение дополнительной контрольной тестсисте- мы позволит избежать неправильной оценки данных; исключается необходимость применения в каждом случае сложного по выполнению и длительного иммуно-адсорбированного контрольного теста; более того, при использований дефицитных препаратов антител соответствующий антиген не всегда доступен.

Формула изобретения

Способ оценки неспецифической иммунофлуоресценции на гистологическом препарате, содержащем специфический антиген, путем добавления антител и флуоресцеинизотиоцианат - меченой антисыворотки, отличающийся тем, что, с целью повышения точности локализации исследуемого антигена, в качестве антител используют специфические антитела к исследуемому антигену и дополнительно применяют элюцию первичных антител с антигенного субстрата 3-молярным раствором роданистого натрия.

Изобретение относится к биологии, в частности к иммунохимии. Цель изобретения - повышение точности локализации исследуемого антигена и выявление неспецифической флуоресценции на гистологических препаратах в методе непрямой флуоресценции. Способ заключается в инкубации гистологических препаратов с антителами к исследуемому антигену и последующей элюции этих первичных антител с антигенного субстрата 3-молярным раствором роданистого натрия. После отмывания фосфатным буфером препараты обрабатывают вторичными антителами к иммуноглобулинам кролика, меченными флюоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ). Специфическая флюоресценция при такой обработке полностью исчезает, а неспецифическая фоновая флюоресценция остается такой же, как в контрольных препаратах, обработанных только фосфатным буфером (аутофлюоресценция), или препаратах, обработанных только ФИТЦ-конъюгированными антителами.