Способ определения билирубина в капиллярной крови Советский патент 1990 года по МПК G01N33/72 

Изобретение относится к биологии и медицине, в частности к способам исследования биохимического состава крови,

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

С помощью калибровочной кривой, построенной по стандартным образцам с различным содержанием билирубина, разведенным в 10 раз физиологическим раствором хлорида натрия, в исследуемом образце капиллярной крови, разведенном в 10 раз физиологическим раствором хлорида натрия, определяют содержание билирубина (С,), параллельно определяют коэффициент К в исследуемой крови и с его учетом высчитывают истинное содержание билирубина в сыворотке исследуемой крови (С) по формуле:

К.

Коэффициент К определяют следующим образом.

Пусть взят объем капиллярной крови равный X, относительный объем плазмы в котором равен V. Для разведения крови в 10 раз необходимо взять объем физиологического раствора хлорида натрия, равный 9Х, Поскольку при разведении капиллярной крови раствором хлорида натрия эритроциты не смешиваются с растворителем и выпадают в осадок, истинный объем жидкой части разведенной крови, Тое, фактически разведенной плазмы, составит 9-t-V| . : Таким образом при десятикратном разввде ош объема К капиллярной крови раЭд Прн раз ее рззвздетея s ведекин cTaHAapTioiix растворов билирубина испольэуемьт для построения калибровочной кривой, физиологическим раствором хлорида натрия в 10 ра истинное разведение объема, равного X, составит -s- 0s Поскольку раз .Л ведения плазмы капиллярной крови и стандартных растворов билирубина неоднозначныу.при расчете содержания билирубина в плазме исследуемого образца крови (с ) следует значение кон центрации билирубина, полученное по калибровочной кривой (С,), умножить на величину соотношения между разведением плазмы исследуемой крови и разведением стандарта, т,ео на вели „л йд-Ю.л- О 4.П I tf и , I , паО Q К i .0,, а ,-(2Z +0,1). V ПА Л Микропипетку объемом О,1 мл промывают гепарином и после прокола копьем кожи пальца пациента набирают в нее до метки 0,1 мл капиллярную кровь, которую сразу же выливают в пробирку с 0,9 мл 0,9% раствора хлорида натрияо Содержимое пробирки тща тельно перемешивают, центрифугируют при 3000 об/мин 20 мин и супернатан аккуратно сливают в другую чистую пробирку. Параллельно в тонкий капил ляр набирают кровь для определения .величины К. Определяют оптическую плотность супернатанта на спектрофот метре в кювете с рабочим расстоянием 1 см при двух длинах волн 450 нм (,) и 575 нм () Вычитывают разность оптических плотностей Е 4Se Е g-j5 и по калибровочному графику определяют содержание билирубина в про бе (С.,), Высчитывают содержание били рубина в плазме исследуемой крови по формуле ,-К, где С - содержание билирубина в плаз ме исследуемой крови; , С - содержание билирубина в супе натанте; К - коэффициент. Для построения калибровочнсзго графика используют готовые наборы 54 Билирубин-эталон фирмы Лахема (ЧССР). Из каждого стандартного раствора билирубина, приготовленного согласно инструкции, берут по 0,1 мл, добавляют в пробирку с 0,9 мл 0,9%-ноо раствора хлорида натрия, тщаельно перемешивают и фотометрируют на спектрофотометре точно так же, как и опытные пробы По результатам исследования строят калибровочньй график, на оси абсцисс которого откладывают концентрации стандартных растворов билирубина в мкМоль/л, На оси ординат - разности оптических плотностей 5-75 Д каждого стан- . дартного раствора билирубина; по соответствующим точкам пересечений вычеркивают калибровочную кривую В таблице 1 приведены данные сравнительного анализа определения билирубина в капиллярной крови тремя способами способом-прототипом; предлагаемым способом; путем определения содержания билирубина непосредственно в плазме капиллярной крови методом прямой фотометриио Как свидетельствуют приведенные в таблице данные, результаты исследования по предлагаемому способу значительно превышают результаты,полученные с помощью способа-прототипа, причем тем в большей степени, чем вьШ1е величина К В то же время они достоверно не отличаются от результатов, полученных при исследовании непосредственно плазмы капиллярной крови П р и м е р. Микропипетками объемом 0,1 мл, промытыми гепарином, вно-. сили по 0,1 мл три различных образца капиллярной крови и выпивали в пробирки, содержащие 0,9 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Содержимое пробирок тщательно перемешивали, пробирки центрифугировали 20 мин при 3000 об/мин и супернатанты из каждой пробирки переносили в чистые пробирки« Параллельно определяли величину К каждого исследуемого образца капилляр09ной крови К +0,1, Оптическую пл плотность супернатанта исследуемых образцов капиллярной крови определяли на I спектрофотометре в кювете с рабо-. чим расстоянием 1 см при двух дпинах волн: 450 нм (450) 575 нм (Е ), . против 0,9%-ного раствора хлорида натрияо Высчитывали разность оптичес-. ких плотностей Е , по калибро вочному графику определяли содержание билирубина в пробе (С,). Для построения калибровочного графика использовали готовые наборы Билируби эталон фирмы Лахема (ЧССР), Для этого из каждого стандартного раств ра билирубина, изготовленного согла но инструкции, брали по 0,1 мп, доб :и в пробирку с 0,9 мп 6,9%-;;о о раствора хлорида натрия, тщательно перемешивали и фотометрировали на спектрофотометре точно так же, как и опытные пробыJ По результатам исследования строили калибровочный график, на оси абсцисс которого откладывали концентрации стандартных растворов билирубина в мкмоль/л, на Оси орданат - разности оптических плотностей для каждого стандартного раствора билирубина, по соответствующим точкам пересечений вычерчивали калибровочную кривую. Содержание билирубина в плазме исследуемой капиллярной крови высчитывают по формуле ,-к, где С - содержание билирубина в плаз ме исследуемой капиллярной крови, мкмоль/л; С - содержание билирубина в супернатанте, мкмоль/л; К - величина коэффициента. Получены следующие практические результаты Образец капиллярной крови 1, , 0,100; Е 0,0308; У„,60 C,(,),,062, По калибровочной кривой оптической пло ности 0,062 соответствует 11,4 мкмол О 9 билирубина. Коэффициент К g +0,1 1,6„ Следовательно содержание били бйна в плазме исследуемой капиллярной крови равно С-П,4-1,6«18,24 мкмоль/л. Образец капиллярной крови 2, ,255; .,0,045; ,48 С ,(Е,о-Е,)-0,255-0,045-0,210. По .: калибровочной кривой оптической плотности 0,210 соответствует 38,6 мкмоль/л - . v .л билирубина. Коэффициент К 0,,0о Следовательно, содержание в плазме исследуемой капиллярной крови равно: ,6-2,,2 мкмоль/л. Образец капиллярной крови 3 0,365; Еу-, ,33 С/E45c-Es-,ff)-0,365-0,,313. По калибровочной кривой стандартного раствора билирубина, по соотв.етству о щим точкам пересечений вычерчивали калибровочную кривую. Содержание билирубина в плазме исследуемой капиллярной крови высчитывали по формуле ,8 мкмоль/л, Формула изобретения Способ опредетения билирубина в капиллярной крови путем прямой фотометрии образца крови, разведенного изотоническим раствором хлористого натрия, с последующим определением концентрации билирубина по калибровочной кривой, отличающийс я тем, что, с целью повыщения точности в пробе крови дополнительно определяют относительный объем плазмы, рассчитывают коэффициент по формуле К 0 где К - коэффициент; V - относительный объем плазмы, и значение концентрации билирубина, определенное по калибровочной кривой. умножают на величину коэффициента

0,41 10,,63 .17,310,94 18,8+0,98

0,50 ,3±0,44 4,5tO,87 13,8+0,96

0,62 . 12,7±0,67 3,2tO,96 29,7+1,13

0,68 26,5+0,94 76,9+0,89 78,ltl,04 П p и M e 4i a tt и ёо

Р.,001 Р#.,0,001 ,1 ,001 Р.,00.1

, 1

P.#,,001 .001

1 V 0.001

Статистическая обработка проведена по { езультатам исследования пяти параллельных проб каждого образца:,;

Изобретение относится к области биологии и медицины, в частности к способам исследования биохимического состава крови. Цель изобретения - повышение точности способа. Способ состоит в том, что капиллярную кровь разводят изотоническим раствором хлористого натрия в 10 раз и определяют концентрацию билирубина по калибровочной кривой путем прямой фотометрии. Дополнительно определяют относительный объем плазмы и рассчитывают коэффициент по формуле К=0,9/V пл+0,1, где V пл - относительный объем плазмы. Значение концентрации билирубина, определенное по калибровочной кривой, умножают на величину коэффициента. Изобретение повышает точность определения билирубина. 1 табл.