Способ прогнозирования течения острого вирусного гепатита Советский патент 1993 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита (ОВГ).

Целью настоящего изобретения является повышение точности способа прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита, включающем биохимическое исследование крови, с огласно изобретению, определяют содержание восстановленного глутатиона (ВГ) и активность глюкозо-6-фосфатдегид- рогеназы (Г-6-ФДГ) в эритроцитах и их соотношение и при значениях соотношения, равном и более 1,0, диагностируют тяжелую форму заболевания..

При обследовании 70 больных легкой, среднетяжелрй и тяжелой формами острого вирусного гепатита было установлено, что

величина отношения содержания В Г - ведущего компонента антиоксидантной системы клетки - к активности Г-6-ФДГ, фермента, участвующего в метаболизме антиоксидан- тов, уже в ранние сроки отражает степень тяжести заболевания и может быть использована для прогноза тяжелой формы вирусного гепатита.

Указанные выше признаки в доступной литературе не обнаружены, что свидетельствует о соответствии предлагаемого решения критерию существенные отличия.

Способ может быть осуществлен следующим образом.

Венозную кровь забирали утром натощак в силиконированные пробирки содержащие 1 мл раствора состава: трехза- мещенный цитрат натрия 1,9%, хлорид натрия 0,9%; желатина 3%. Кровь перемешивали с указанным раствором и центрифугировали (3000 оборотов/мин, 4°С, 7 минут). Плазму и лейкоцитарный слой отсасывали и удаляли. Эритроциты троек(Л

С

00

о ел N о

ратно отмывали в 0,9% растворе хлорида натрия (3000 оборотов/мин, 4°С, 5 минут). Надосадочную жидкость удаляли, а в эритроцитах определяли содержание В Г и активность Г-б-ФДГ,

Уровень ВГ определяли по модифицированному методу,, основанному на восстановлении нитро пру сеид а натрия глутатионом в щелочной среде с образованием окрашенного соединения. 0,5 мл гемо- лизата, полученного при разведении взвеси эритроцитов дистиллированной водой (1:1), смешивали с 1 мл 10% раствора трихлорук- сусной кислоты. После перемешивания и 10- минутной инкубации на ледяной бане пробы центрифугировали 5 минут при 3000 оборотов/мин. 1 мл надосэдочной жидкости вносили в пробирку, содержащую 2 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Затем к смеси добавляли 0,5 мл 0,08 М раствора нитропруссида натрия и 0,5 мл 20% раствора углекислого натрия. Через 15 сек после быстрого тщательного перемешивания пробы фотометрировали при длине волны 540 нм. Содержание ВГ определяли по калибровочному графику. Результаты выражали в мкмоль ВГ на 1 г гемоглобина, содержание которого определяли стандарт- ным гемиглобинцианидным методом.

Принцип метода заключается в том, что гемоглобин при взаимодействии с же- лезосинеродистым калием окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциан- гидрином окрашенный гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна количеству гемоглобина, 0,02 мл гемолизата приливали к 5,0 мл трансформирующего раствора в пробирке, хорошо перемешивали и через 10 мин измеряли на спектрофотометре при длине волны 540 нм против холостой пробы (воды). Расчет содержания гемоглобина производили по калибровочному графику.

Определение активности Г-б-ФДГ в эритроцитах производили по динамике уровня НАДФН спектрофотометрическим методом, основанным на определении количества восстановленного НАДФ, образующегося при окислении глюкозо-6-фосфата в 6-фосфоглюкозолактон. Измерение содержания НАДФН регистрируется по возрастанию оптической плотности раствора при длине волны 340 нм. Инкубационная среда содержала 0,05 М триэтаноламиновый буфер, рН - 7,5-2,9 мл; 10 мМ раствор НАДФ - 0,1 мл; гемолизат, полученный при разведении взвеси эритроцитов дистиллированной водой (1:5) - 0,04 мл; 30 мМ раствор глюко- зо-6-фосфата натрия (Серва) - 0,05 мл. Оптическую плотность раствора определяли

через 10 с и через 5 минут после внесения в среду глюкозо-6-фосфата натрия. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре. Активность фермента рассчитывали на

основе миллимолярного поглощения НАДФН, равного 6,22 мМ см 1, и выражали в мкмоль НАДФН/г гемоглобина в мин. Содержание гемоглобина оценивали приведенным выше гемоглобинцианидным

методом.

Затем определяли соотношение

ВГ, - г... и при значениях, равных и более I -Ь-ФДГ

1,0, диагностировали тяжелую форму заболевания.

Выбор данной величины соотношения в качестве прогностического критерия обусловлен ретроспективным анализом результатов обследования 70 больных острым

вирусным гепатитом, у 14 из которых была легкая форма заболевания, у 32 - форма средней тяжести, у 24 - тяжелая. Оказалось, что у всех больных легкой и средней тяжести формами ОВГ величина соотношения

ВГ

в первые дни желтушного перио- i

да была ниже 1,0 и составила соответственно 0,62 ± 0,06 и 0,41 ± 0,02. При тяжелой форме вирусного гепатита, не осложненно

го острой печеночной недостаточностью,

величина показателя превысила 1.0 (в среднем 1,04 ± 0,09), а в случаях с развитием печеночной энцефалопатии составила 1,31 ±0,13. При этом важно отметить, что у 5 большинства больных (16 из 24) тяжелой формой вирусного гепатита соотношение

ВГ

ебыло выше 1.0, а у 5 больных I

значения показателя были близкими к 1,0

0 (0,87-0,98).

Способ иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Больной С., 21 года, история болезни 5552, поступив в стацио:.

5 нар на 8 день болезни с жалобами на слабость, боль в коленных суставах. Начало заболевания постепенное, нарастала слабость, на 6 день болезни было зарегистрировано повышение температуры до 38°, был

0 однократно жидкий стул. При поступлении состояние расценено как удовлетворитель- ное, отмечалась субиктеричность склер, печень на 1 см выступала из-под реберной дуги, пальпировалась селезенка. Пульс 68

5 у/мин, артериальное давление 150/80 мм. рт.ст. Лабораторные показатели: АлАТ - 58,0 ммоль/ч л, билирубин - 30 мкмоль/л, сулемовый титр - 2,0 Мл, тимоловая проба - 1,6 ед. Обнаружен Нв, Ад. Соотношение

вг

л .составило 1,01, что позволило

предположить возможность развития у брльного тяжелой формы ОВГ В. И действительно, состояние больного постепенно ухудшалось, сохранялась слабость, появились боли в правом подреберье, снижение аппетита вплоть до анорексии, прожилки крови в отделяемом из носа, субфибрильная температура, нарушение сна, стала нарастать желтуха, увеличились размеры печени (+2 см), сохранялась гиперферментемия, На 68 день болезни АлАТ - 60,0 ммоль/ч л, билирубин - 302 мкмоль/л, сулемовый титр - 1,3 мл, тимоловая проба - 6,5 ед., протром- биновый индекс - 72%. Проводилась стандартная терапия тяжелой формы вирусного гепатита. Лишь на 98 день болезни больной был выписан из стационара с остаточной гипербилирубинемией и гиперферменте- мией.

Пример 2. Больной Ш., 17 лет, история болезни 24484, поступил в клинику на 5 день болезни, 2 день желтухи с жалобами на слабость, снижение аппетита, тошноту, однократно рвоту, боль в эпигаст- ральной области. Заболел остро, в течение 2 дней регистрировалось повышение температуры до 38-39°С, отмечались слабость, снижение аппетита, тошнота, боли в суставах. При поступлении состояние расценивалось как относительноудовлетворительное. Умеренная желтуха кожи и слизистых . Печень на 2 см выступала из-под реберной дуги, селезенка не пальпировалась. Пульс 72 у/мин, АД - 110/60 мм рт.ст. Лабораторные показатели: АлАТ - 53,8 ммоль/ч л, билирубин 167 мкмоль/л, сулемовый титр - 1,64 мл, тимоловая проба - 6,3 ед. Обнаружен Нв, Ад. Соотношение

R Г

составило 1,29, указывая на вероятность развития тяжелой формы ОВГ, что и подтвердилось при дальнейшем наблюдении за больным. Состояние прогрессивно ухудшалось и на 8 день болезни уже расценивалось как тяжелое, нарастала слабость, отмечались тошнота, анорексия, появились прожилки крови в отделяемом из носа, сократились размеры печени. АлАТ - 39,4 ммоль/ч л, билирубин - 190 мкмоль/л. протромбиновый индекс 51 %. Больной был переведен в отделение реанимаций и интенсивной терапии. Проводимое лечение позволило купировать синдром интоксикации, однако желтуха неуклонно нарастала и к 25 дню болезни содержание билирубина составляло 364 мкмоль/л. Постепенно самочувствие больного улучшалось, стала угасать желтуха. Больной выписан на 56 день

болезни в удовлетворительном состоянии с остаточной гипербилирубинемией.

П р и м е р 3. Больной К,, 55 лет, история болезни 115, поступил в стационар на 7 день

5 болезни, 1 день желтухи с жалобами на слабость, снижение аппетита, тошноту, боль в правом подреберье, эпигастрии, кожный зуд. Заболел остро, в течение 3 дней отмечалось повышение температуры (38-38,4°),

0 затем температура субфибрильная, беспокоили слабость, снижение аппетита, боль в правом подреберье, боль в суставах, При поступлении состояние средней тяжести, температура 38,2°, умеренная желтуха кожи

5 и слизистых, гепатомегалйя, пальпировалась селезенка. Пульс90у/мин, АД- 120/80 мм рт.ст. Лабораторные показатели: АлАТ - 33 ммоль/ч л, билирубин - 146 мкмоль/л, сулемовый титр- 1,78 мл, тимоловая проба 0

4,0 ед. Соотношение

ВГ

составило

Г-6-ФДГ

1,18, свидетельствуя о возможном развитии тяжелой формы заболевания. Дальнейшее наблюдение подтвердило такой прогноз.

5 Состояние больного прогрессивно ухудшалось, на 9 день болезни - резкая слабость, тошнота, рвота, головокружение, черный стул. Состояние расценивалось как тяжелое, желтуха нарастала. На 10 день болезни

0 протромбиновый индекс снизился до 51%. Больной переведен в отделение реанимации и интенсивной терапии. В результате проведенного лечения самочувствие улучшилось. В удовлетворительном состоянии

5 на 56 день болезни больной выписан из стационара с остаточной гипербилирубинемией....

Приведенные примеры демонстрируют преимущества предлагаемого нами способа

0 (повышение точности диагностики, возможность прогнозирования тяжелой формы ОВГ уже в ранние сроки заболевания) по сравнению с прототипом.

Использование изобретения позволяет

5 достичь следующего:

1. Обеспечить прогнозирование тя же- лой формы ОЕГ уже в ранние сроки заболевания.

2. Повысить точность диагностики фор- 0 мы тяжести ОВГ.

3. Обеспечить назначение своевременной и адекватной терапии в соответствии с формой тяжести заболевания.

Формула изобретения 5 Способ прогнозирования течения острого вирусного гепатита, включающий клиническое обследование больного и лабораторный анализ крови, отличающий с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет более раннего про

гноза, в эритроцитах определяют уровеньтеля к второму и при значении этого отновосстановленного глутатиона и активностьшения равном единице и более прогнозируглюкозо-6-фосфатдегидрогеназы с последу-ют осложненное течение заболевания в

ющим расчетом отношения первого показа-виде тяжелой формы.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита. Цель, достигаемая изобретением, заключается в повышении точности прогноза развития тяжелой формы вирусного гепатита. Сущность изобретения: осуществляют определение уровня восстановленного глута- тиона и активности глюкозо-6-фосфатде- гидрогеназы в эритроцитах и при соотношении между этими показателями, равном и превышающем 1,0, диагностируют тяжелую форму острого вирусного гепатита. Способ позволяет в ранние сроки прогнозировать тяжесть течения вирусного гепатита.