Способ определения токсичности кормового продукта Советский патент 1991 года по МПК G01N33/02 

Изобретение относится к биотехнологии, к микробиологической промышленности, к способам обработки биомассы продукта с последующим использованием ее в качестве объекта для определения токсичности.

Цель изобретения - повышение чувствительности при определении малотоксичных продуктов.

Биомасса продукта подвергается экстракции водноорганическими растворителями с последующим разделением проэкстрагированной биомассы на жидкую и твердую фазы. Затем жидкую фазу используют в качестве объекта для исследования на токсичность.

Экстракцию биомассы микроорганизмов проводят горячей водой при 65- 95 С водой в соотношении биомасса:вода (1:10)-(3:8), в течение 20-60 мин. Разделение проэкстрагированной биомас- JW3 сы осуществляют центрифугированием с фактором разделения 1000-10000 g. Полученный экстракт смешивают с биомассой в соотношении соответственно экстракт:биомасса (3:1)-(6:1) и гомогенизируют в течение 10-40 мин с градиентом скорости 200-1500 c. Интенсификацию процесса экстракции и повы- шение точности исследования объекта на токсичность достигают путем предварительного разрушения биомассы, например, в слое инертной псевдоожи- женной насадки.

Гомогенизированная смесь вводится животным, в частности белым мышам - самцам, в количестве 1 мл на одно животное массой 18-22 г.

Проводят химико-технологические | наблюдения за животными и по степени изменений внутренних органов делают заключение о степени токсичности исследуемого объекта (биомассы микроорганизмов) .

Пример 1. Биомассу дрожжей (масса 100 г), выращенную на п-параПример 3. Обработку биомасс дрожжей ВСБ-899-УМПМ-У-262 в количе ве 100 г проводят как в примере 1, за исключением того, что соотношени биомасса:вода 3:8, температура воды 95°С, время обработки 60 мин. Разде ние проэкстрагированной биомассы пр водят при факторе разделения 10000

финах (БВК), помещают в колбу, разме-jO соотношение экстракт:биомасса 3:1,

15

шивают в 400 мл горячей воды, соотношение 1:4, с температурой 80°С в течение 40 мин. Проэкстрагированную массу разделяют центрифугированием с фактором разделения 4500 g. Экстракт в количестве 200 мл смешивают с 40 г БВК, что соответствует соотношению экстракт:биомасса 5:1, и гомогенизируют в течение 25 мин с продуктом при скорости 850

Затем гомогенизированную смесь через емкость 1-2 см3 зондом вводят в желудок белой мыши по 1 см3 (5-8 животных) . Контрольным животным вводят дистиллированную воду в том же объеме 25 Далее проводят клинико-токсикологичес- кие исследования на токсичность биомассы. Результаты приведены в таблице. Достоверность опыта 95% относительная погрешность 5%.

Пример 2. Обработку биомассы дрожжей ВШ-779-ЦМПМ-У-196 в количестве 100 г проводят как в примере 1, только соотношение биомасса:вода составляет Is 10, температура воды 65°С, время обработки 20 мин. Разделение проэкстрагированной биомассы проводят при факторе разделения 1000 g; соотношение экстракт:биомасса 5:1, интенсив30

35

интенсивность гомогенизации, оценив мая градиентом скорости, равна 1500 Достоверность опыта 85% погрешность 5,5%, В контроле погрешность 12,5% (таблица).

I

П р и м е р 4. Обработку биомас бактерий ВСБ-874-ЦМПМ-В-1743 прово дят как в примере 2, однако соотно шение биомасса:вода составило 1:6, а экстракт:биомасса 5:1. Достоверность опыта 95%, погрешность 2,9%. В контроле погрешность 11,6%.

Формула изобретени

Способ определения токсичности кормового продукта, включающий отб навески образца, его водную экстра цию с последующим разделением на твердую и жидкую фазы и введением следней животному, отличающийся тем, что, с целью повыш ния чувствительности при определен малотоксичных продуктов, экстракцию проводят при 65-95°С в течение 20- 60 мин при соотношении навеска:вод (1-3):(10-8), а перед введением животному к полученной жидкой фазе

Пример 3. Обработку биомассы дрожжей ВСБ-899-УМПМ-У-262 в количестве 100 г проводят как в примере 1, за исключением того, что соотношение биомасса:вода 3:8, температура воды 95°С, время обработки 60 мин. Разделение проэкстрагированной биомассы проводят при факторе разделения 10000 g;

интенсивность гомогенизации, оцениваемая градиентом скорости, равна 1500с . Достоверность опыта 85% погрешность 5,5%, В контроле погрешность 12,5% (таблица).

I

П р и м е р 4. Обработку биомассы бактерий ВСБ-874-ЦМПМ-В-1743 прово- дят как в примере 2, однако соотношение биомасса:вода составило 1:6, а экстракт:биомасса 5:1. Достоверность опыта 95%, погрешность 2,9%. В контроле погрешность 11,6%.

Формула изобретения

Способ определения токсичности кормового продукта, включающий отбор навески образца, его водную экстракцию с последующим разделением на твердую и жидкую фазы и введением последней животному, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности при определении малотоксичных продуктов, экстракцию проводят при 65-95°С в течение 20- 60 мин при соотношении навеска:вода (1-3):(10-8), а перед введением животному к полученной жидкой фазе

Изобретение относится к биотехнологии, к микробиологической промышленности, к способам обработки биомассы продукта с последующим использованием ее в качестве объекта для определения токсичности. Цель изобретения - повысить чувствительность при определении малотоксичных продуктов. Для этого биомассу разрушают, экстрагируют водой при 65-95°С в течение 20-60 мин, разделяют центрифугированием при факторе разделения 1000-10000 g, затем экстракт смешивают с биомассой в соотношении от 1:3 до 1:6 и гомогенизируют, оценивая по градиенту скорости в пределах 200- О 1500 с 1. 1 табл. Ш

ность гомогенизации с градиентом ско- 40 добавляют вторую навеску образца в

рости 200 . Достоверность опыта 95%, погрешность 5,8%. В контроле (известный способ) 13% (таблица).

соотношении 1:(3-6), после чего обр батывают в псевдоожиженном слое и гомогенизируют,

Дрожжевая биомасса Предлагаемый из н-парафинов (пример 1), ,95

То же

Известный Водный экстракт

соотношении 1:(3-6), после чего обрабатывают в псевдоожиженном слое и гомогенизируют,

Продукт токсичен, В эксперименте выявлена гибель 1 жив. и изменения в органах у осталвных гиперемия, геморрегическое воспаление слизистой желудка и тонкого кишечника, ,0%

Продукт слаботоксичен, у животных выявлены воспалительные явления в слизистой желудка и кишечника

Ацетоновые экстракты

Предлагаемый

Известный

- -Ацетоновый экстракт

Дрожжевая биомасса Предлагаемый

из гидролизатов

древесины

Дрожжевая биомасса Известный из гидролиэатов древесины

То жеАцетоновый экстракт

Дрожжевая биомасса Предлагаемый

из гидролизатов

древесины

То жеИзвестный

- -Ацетоновый экстракт

Гидролизные дрож- Предлагаемый жи

То же

Известный

- -Ацетоновый экстракт

Биомасса дрожжей Предлагаемый ВСБ-899-ЦМПМ-Д-262 (пример 3),,95

То же

Известный

Биомасса дрожжей Ацетоновый -экст- ВСБ-899-ПМПМ-Д-262 ракт (пример 3), ,95

Продолжение таблицы

tO Продукт слаботоксичен, выявлены воспалительные явления в органах желудочно-кишечного тракта,

10 Продукт слаботоксичен, у большинства животных выявлены воспаления внутренних органов, дегенеративные изменения в печени, ,

10 Продукт не токсичен, изменения обнаруживаются у 1-2 животных,

10 Продукт не токсичен, изменения наблюдаются у 2-3 животных из группы,

0 Продукт токсичен, выявлен падеж всех животных, на вскрытии вздутия органов желудочно-кишечного тракта, отмечены клинические признаки интоксикации небелковым азотом

0 Продукт токсичен, падеж 1 животного, у всех мышей клиническая интоксикация небелковым азотом

6 Продукт токсичен, падеж 2 животных, клинические признаки интоксикации у всех животных

6 Продукт токсичен, выявлен падеж всех животных, клинические признаки интоксикации у всех животных

6 Продукт токсичен, падеж 2 животных, клинические признаки интоксикации у всех животных

5 Продукт токсичен, падеж 2 мышей, у остальных - клинические признаки интоксикации

8 Продукт токсичен, выявлен падеж 1 животного, у остальных животных дегенеративные изменения в печени и почках

8 Продукт слаботоксичен, падежа нет, у 3-4 животных выявлены изменения

8 Продукт слаботоксичен, падежа нет, у 3-4 животных выявлены изменения 0 Продукт слаботоксичен, у 4-5 животных выявлены в печени и почках изменения дегенеративные, падежа кет, ,5%

0 Продукт не токсичен, падежа и из- менений в органах не выявлено, ,5%.

0 Продукт слаботоксичен, у 4 животных выявлены дегенеративные изменения в печени и почках, ,0%

1651206

Биомасса бактерий Предлагаемый

ВСБ-874-ЦМПМ-В1743 (пример 4),

,95

То жеИзвестный

- -Ацетоновый экстракт

Примечание. П- число повторностей; количество животных в группе

5-10 об - надежность.

8 Продолжение таблицы

Продукт не -токсичен, падежа и изменений в органах нет, ,9% 3,0%

Продукт не токсичен, изменений и падежа нет, ,6% лИ2%

Продукт не токсичен, падежа и изменений в органах нет,