Ассоциация микроорганизмов для скармливания молодняку крупного рогатого скота Советский патент 1991 года по МПК C12P39/00 A23K1/165 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой новую ассоциацию цел- люлозолитических микроорганизмов.

Целью изобретения является повышение прироста живой массы молодняка крупного рогатого скота за счет увеличения потребления грубого корма и повышения перевариваемости клетчатки в пищеварительном тракте животных.

Ассоциация состоит из смеси штаммов бактерий Clostridium thermocellu- loliticus ВКПМВ-4291, Rurainococcus albus ВКПМВ-4292 и Clostridium loch- headii ВКПМ В-4290 в соотношении, равном (38-50):(19-25) : (31-40) соответ- ственно .

Ассоциация выделена из рубца телят, в рационе которых использовано 40% грубых кормов.

Селекцию1 ассоциации осуществляют на питательных средах с соломой, сеном и травяной мукой в качестве единственного источника углерода. Основным критерием для отбора ассоциации является ее способность быстро и наиболее полно расщеплять целлюлозу названных источников углерода в питательной среде. В in vitro эксперимен- .тах оценивают целлюлозолитическую активность ассоциации, убыль клетчатки, уровень белкового азота, концентрацию редуцирующих Сахаров и летучие жирные кислоты (ЛЖК) в культуральной жидкости.

0

1

3

со со

Общую целлкхпозолитическую активность определяют по гидролизу Фильтровальной бумаги марки Ленинградская хроматограЛнчсская по методу Или- дельс-Вебера с последующим опреде- лени ем редуцирующих Сахаров по Нельсону и Сомоджн. За единицу активности принимают 1 мг редуцирующих Сахаров, образующихся под действием 1 мл куль- туралыюн жидкости при рН 6,9 и температуре 39 С в течение 1 ч. Убыль клетчатки устанавливают весовым методом по Чюрлпсу. Эндоглюканазную активность определяют-вискозиметрическим методом по степени разжижения карбок- симетилцеллюлозы (КМЦ) и по действию на 1%-ного раствора с последующим определением редуцирующих веществ в .пересчете на глюкозу.

Белковый азот определяют по Къель- далю, общий уровень ЛЖК - методом паровой дистилляции в аппарате Маркг,ама а их с отношения - с помощью газожидкостной хроматографии.

Ассоциацию выращивают на стерильной модифицированной питательной среде Хангейта, содержащей, г/л: KH2POq. 0,2; К2НР04 0,5; .I; СаС12 0,01; NaCl 1; ( 0,5; соляно- кислый цистеин 0,2; NaHCOj 5; пептон 1; дрожжевой экстракт 1; фильтровальная бумага или другой источник целлюлозы 10; фильтрат содержимого рубца 200 мл; дистиллированная вода - до 1 л, рН среды 6,8 - 7,2. Для создания анаэробиоза среду перед посевом насыщают СО,, затем осуществляют засев среды ассоциацией и культивируют в пробирках, закрытых резиновыми npoG ками, при 38 - 39°С в течение 4 - 5 сут до полного расщепления полоски фильтровальной бумаги.

Для выделения чистых культур из накопительной используют метод предель- ных разведений с последующим рассевом на агаризованные среды такого же состава, но с разными источниками клетчатки, методом roll tube culture.

Для инактивации неспоровых микроор ганизмов ассоциацию прогревают при 100°С в течение 10 мин, а затем выделяют термофильные целлюлозолитические микроорганизмы по Снежко.

Чистоту выделенных культур проверяют микроскопически и высевами на плотные питательные среды с КМЦ, 0,5% целлобиозы и жидкую среду Хангейта с полосками Фильтровальной бумаги.

5

При изучении биологических свойств у чистых культур бактерий, выделенных из ассоциации, используют обычно применяемые для идентификации тесты, а количественные соотношения видов в ассоциации определяют по морфологическим, различиям путем прямого подсчета клеток под микроскопом по методу Брида.

В результате исследований было установлено, что активно разлагающая целлюлозу ассоциация бактерий состоит из Clostridium thermocelluloliticus, штамм № ВКПМ В-4291 (17), Ruminococ- cus albus № ВКПМ В-4292 (37) и Clostridium lochheadii № ВКПМ В-4290 (8), количественные соотношения между которыми варьируют в пределах (38-50) : :(19-25) : (31-40) соответственно.

Штамм бактерий Clostridium thermocellulolit icus № 17 идентифицирован по Берги, депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под номером В-4291.

Клетки имеют форму тонких, прямых или слегка изогнутых палочек. Размеры варьируют в пределах (0,3-0,4)х х(4-12) .мкм, а в культурах 12 - 15-су- точного возраста длина клеток достигает нескольких десятков микрон. Окраска по Граму вариабельна. Образуют овальной формы терминальные споры размером от 0,5 до 0,8х(1 - 1,2) мкм. При развитии культурЬ на плотных средах может наблюдаться полиморфизм: палочки длинные, нитевидные и короткие, по форме напоминающие кокки.

Факультативный анаэроб. На поверхности МПА с целлобиозой в твердой среде Хангейта с 10% КМЦ образует мелкие, округлые с ровными краями колонии, в глубине среды они имеют форму чечевички. На скошенных агаризованных средах культура может расти сплошным штрихом. В жидкой питательной среде с Фильтровальной бумагой расщепление целлюлозы наблюдается визуально уже через 72 ч после посева. Бумага разрыхляется, слегка окрашивается в желтый цвет пигментами бактерий и через 4-5 дней брожение обычно заканчивается. На дне пробирки остается небольшой, рыхлый осадок из остатков неразрушенной целлюлозы.

Штамм хорошо растет в диапазоне температур от 38 до , а споры выдерживают кипячение в течение 10 - 15 мин.

Бактерии сбртчшш г образовтнирм кислоты цел THXTOIV, кгилан, мальтозу, oaxaposv, KCHMOIV, арлПинозу, целлобиозу и не бермен ntpViOT маннит, сорбит, инозит, инулин, пульпит, гпице- рии, мелибиозу, галактозу, трегалозу, рлс хЬинозу, лактозу, рамнозу, Фруктозу и салицин. Крахмал не расщепляют. Молоко свертывают медленно. Образуют сероводород, но не продуцируют индол. Нитраты восстанавливают.

Расцепление штаммом целпюлозы (Ъильтровальной бумаги за 24 ч культивирования составляет 35 - 40%, а общая цеплюлозолитическая и яндоглюка- назная активности достигают 0,36 и 0,24 ед/мл соответственно. При этом в среде накапливается 12 - 20 мг/ /100 мл среды редуцирующих Сахаров и 6,7 - 7,8 ммоль/100 мл ЛЖК, в составе которых доля уксусной, пропионо- вой и масляной кислот обычно варьирует в пределах 75-80, 4-12и2,8- 9% соответственно. Штамм не патогенен

Штамм Ruminococcus albus N 37.

Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под номером В-4292.

Клетки сАерические или слегка овальные от 0,9 до 2 мкм в диаметре, в мазках располагаются одиночно и короткими цепочками. Окраска по Граму вариабельна. Перед делением клетки незначительно удлиняются.

Для культивирования требует строго анаэробные условия. Питательные среды перед посевом насыщают бескислородной газовой смесью из СО и N2 (1:1).

На поверхности агара, содержащего 0,5% целлобиозы и рубцовую жидкость, образует мелкие, круглые и выпуклые колонии, а в глубине среды колонии имеют (Ьорму линзы и окрашены в белый или светло-желтый цвет.

Ферментирует целлобиозу, целлюлозу глюкозу, лактозу, маннозу и не сбраживает арабинозу, декстрин, галактозу, мальтозу, расЪАинозу, сахарозу и трегалозу. Индол и сероводород не образует.

Расщепление штаммом целлюлозы фильтровальной бумаги за 24 ч культивирования составляет 12 - 15%, а общая целлюлозолитическая и эндоглкжа- назная активности достигают 0,12 и 0,23 ед/мл соответственно. Конечными продуктами ферментации целлюлозы являются уксусная, пропионовая, масля

нчя и на 1ррн1нонт.я кигючп, л газ .

Штамм Ruminococсич al bus N 37 сбраживает целлюлозу значительно медленнее, ЧРМ ассоциация, из которой он выделен. Обычно его чисггсмпюп ь в ассоциации взры пч от п преде чах 19 - 25%, по чаще составляет . При выращивании руминококков в составе ассоциации при 45 - 50 С они те5

0

5

0

5

0

5

0

5

ряют активность и на 3 - 4-е гутки погибают. Оптима ьноч средой тчч выращивания этого штамма являете ч среда с 1% (Ьильтровальной бумаги и 30% рубцовой жидкости. Штамм не патогенен.

Штамм Clostridium lochheadii N 8 идентифицирован по монографии te R. Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под № В-4290.

Грамположительные палочки от 0,8 до 1,0 мкм шириной и 7 - 9 мкм длиной. Могут образовывать гигантские клетки, внутри которых распотагаются споры. Размер спор колеблется в пределах (1,0 - 1,5)х(2 - 3) мкм. Строгий анаэроб.

На поверхности плотной среды с целлюлозой образует колонии с неровными краями и пальцеобразными выпячиваниями. При длительном кучьтивировании (10 - 12 сут) вокруг колоний наблюдается зона расщепления целлюлозы шириной 1 - 2 мм. На жидкой среде дает рыхлый осадок на дне пробирки. Штамм может расти на питательных средах без рубцовой жидкости, но при условии замены ее экстрактами из сена или смеси кормов для жвачных животных.

Ферментирует целлюлозу, глюкозу, целлобиозу, мальтозу, сахарозу, крахмал и салицин. Лакмусовое молоко пептонизирует за 48 ч.

Штамм Clostridium lochheadii № 8 является активным разрушителем клетчатки. Его численность в ассоциации варьирует от 31 до 40%, но чаце составляет 35%. Растепление клетчатки травяной муки достигает 62,5 - 65,7%, а основными конечными продуктами брожения являются уксусная, масляная кислоты и газ. Гидролиз целлюлозы (Ъильт- ровальной бумаги за 1 сут составляет 45 - 52%, а общая целлюлозолитическая активность 0,2 - 0,25 ец/мл. Штамм не патогенен.

Ассоциация трех видов целлюлозо- литических бактерий хранится в музее

культур лаборатории биотехнологии микроорганизмов пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных BHVfH Лимнологии, биохимии и питания сель- г скохозяйственных животных. Она обладает высокой целлюлозолитической активностью. После 72-часового культивирования общая целлюпозолитическая активность составляет 0,3 ед/мл, эн- ю доглюканазная активность достигает 0,5 - 0,6 ед/мл, а в среде накапливается до 58 - 70 мг/100 мл редуцирующих Сахаров. Кроме целлюлозы ассоциация сбраживает ксилан, крахмал, кси- лозу, глюкозу, мальтозу, арабинозу, целлобиозу, маннозу, лактозу, сахарозу и фруктозу, а ма ннит, сорбит,, инозит, дулыщт, глицерин, инулин, мели- ,биозу, трегалозу, раффинозу и рамнозу 2о не ферментирует.

Интенсивность роста ассоации и ее ферментативная активность в значительной степени зависят от условий культивирования .2

Оптимальные условия для роста создаются при внесении в свежую среду 10% маточной культуры, ассоциации и дальнейшее увеличение ее количества существенно разрушение целлюлозы не 3 улучшает. При внесении меньшего объема инокулята развитие ассоциации за- медляется и процесс расщепления целлюлозы удлиняется до 8 - 9 сут.

Культивирование ассоциации прово- , дят в анаэробных условиях, поскольку в условиях аэрации рост бактерий и разложение клетчатки сильно замедляются.

Концентрация целлюлозы в среде не д должна превышать 1 -2%, так как увеличение уровня этого полимера приводит к уменьшению ферментации сухого вещества, сырой клетчатки и снижению концентрацией ЛЖК.4

Оптимальная температура для роста ассоциации и образования целлюлозоли- тических ферментов находится в диапазоне 38 - 40°С. Снижение температуры инкубации до 30°С удлиняет процесс C расщепления целлюлозы фильтровальной бумаги в среде до 8 - 10 сут вместо 3-4 сут при 39°С, а повышение температуры до 45 - 50°С прнподит к гибели руминококка.,Наилучшее развитие ассоциации и гидролиз целлюлозы наблюдаются при начальном рН среды в пределах 6,8 - 7,2. При этом рН среды в 6-суточной культуре снижается до 5,5, концентрация ЛЖК достигает 12,6 - 14,5 ммоль/ /100 мл, а молярная доля уксусной, пропионовой и масляной кислот варьирует в пределах 75-79, 10 - 12 и 8 - 16% соответственно. При рН 5 и 9 роста .ассоциации не наблюдается.

Ассоциация удовлетворительно переносит 12-часовой кочтакт с воздухом и сохраняет жизнеспособность после высушивания при 55 - 60°С. Способность к разрушрцию целлюлозы у сухой ассоциации сохраняется после ее хранения при комнатной температуре или в холодильнике при 5 С в течение 8 - 10 мес. При высушивании ассоциации на воздухе происходит гибель румино- кокков, что снижает целлюлозолитичес- кую активность сухого препарата на 20 - 25%.

Пример 1. Приготовление ассоциации целлюлозолитических бактерий.

Готовят питательную среду следующего состава, г/л: КНгРО Э,2; К.ИРОф J,5; MgS04 J,1; СаС1гО,01; NaCl 1; (MH4) солянокислый цистеин 0,2; НаНСО 5; пептон 1;.дрожжевой экстракт 1; фильтровальная бумага или другой источник целлюлозы (размолотое злаковое сено, солома, травяная мука или свекловичный жом) 1%; содержимое рубца 200 мл; дистиллированная вода - до 1 л. В качестве заменителя рубцовой жидкости в среду целесообразно вводить соли ЛЖК в количестве 5 мг уксуснокислого натрия, 80 мг изо масляного натрия и по 90 .мг валериано вокислого и изовалериановокислого натрия. рН среды устанавливают 6,8 - 7,2 закрывают резиновыми пробками с дефлегматорами и стерилизуют при 1 атм

в течение 30 мин. I

В готовую среду вносят 10 об.% ассоциации целлюлозолитических бактерий с соотношениями Cl.thermocellu- loliticus; R.albus; Cl.lochheadii, равными (38-50):(19-25):(31-40) соответственно, концентрация клеток в которой варьирует в пред ел ах (3,7 -4,5) ьЮ /мл. Посевы инкубируют в термостате при 38 - 39QC в течение 4-5 сут. При нормальном развитии культуры энергичное расщепление клетчатки начинается спустя сутки после посева. Через 4-5 дн,брожение заканчивается и на дне сосуда остается небольшой, рыхлый аморЛнын осадок. Готовую ассоциацию

(harvior n

i

11

i- MTponi 1C ГП ТЫ П.П

ЗЛ К VlIOpltlMim II - .рЛНЯ 1 ЦП ЬТОПЛ v.

J

ПНЯ Itpl 1 II p ii м e p 2 . Влияние соотношении отдельных видов цо л л ю по-эолитических бактерии в ассоциации и источника клетчатки на ее переваримость изучают в серии исследовании in vitro. Для этого по прописи, представленной в примере 1, готовят питательные среды с одним из источников углерода, в качестве которого используют фильтровальную бумагу, размолотое сено злаковых, пшеничную солому, травяную муку или свекловичный жом. В стерильные среды вносят 10 об.% маточной ассоциации с разными количественными соотношениями клеток целлкшозолитических бактерий и после 6-суточной инкубации при 39°С определяют коэффициенты разрушения клетчатки, которые представлены в табл . 1 .

Из представленных в табл. 1 данных видно, что лучшим источником целлюлозы для ассоциации целлюлозолитических бактерий является фильтровальная бумага, затем следуют травяная мука, свекловичный жом,злаковое сено и на последнем месте находится пшеничная солома. Кроме того, переваривание клетчатки соломы и сена не остается постоянным, а существенно меняется в зависимости от соотношения видов бактерий в ассоциации и максимальных значений достигает при соотношении Cl.thermocelluloI iticus, R.albus и Cl. lochhcadii, равном 40:25:35.

В другом опыте переваривание клетчатки микрорациона, состоящего из 0,8 г комбикорма и 1,2 г сенажа, ассоциацией с соотношением видов С1. thernocelluloliticus, R.albus и Cl. lochheaclii, равным 38:22:40, также было высоким и составило 58,4%.

Высокая целлюлозолитическая активность ассоциации обеспечивается при соотношении видов 01.thermocelluloli- ticus, R.albus и Cl.lochheadii в пределах (38Г50):(19-25):(31-40) соответственно, а максимальная переваримость клетчатки соломы и сена достига ется при отношении, равном 40:25:35.

Пример 3. В серии опытов in vitro с применением различных источни ков клетчатки в питательной среде - сена тимофеечного, соломы, травяной муки и сухого свекловичного жома, проведена сравнительная оценка образова0

0

5

0

5

0

5

0

5

ПИЯ ПРОДУКТОМ Hvp li Hr.l IIIII И I IP л 1 М КЛеТЧЛТКИ ЛССРИИЛШ гм Ч Г Щ.пто ГНТ чсг кпх бактерии и члнпгпмостп от про - до пкительности кч лгуппшронл ния .

- , г сухого рлтмолотого субстрат, добавляют к 250 мл тпгглтечьноп среды, зле о и лют 10Z цеплюлочолитпчгскон лг- соцплцпи, закрывают резиновыми клмн с дефлегматорами и инкубируют при 38 С. Спустя 3, и 6 сут в куль- турллыюй среде определяют убыть сухого вещества и сырой клетчатки, концентрации белкового азота, раствори- мьп углеводов и ЛЖК, а также их молярные соотношения. Результаты представлены в табл. 2 и 3.

Как видно из табл. 2 и 3, наибольшая убыль клетчатки наблюдается на 4-е и 6-е сутки культивирования, но концентрация редуцирующих Сахаров и белкового лзотл в питательной среде на 6-е сутки имеет тенденцию к снижению. Снижается также доля уксусной кислоты и общий уровень ЛЖК в культу- ральной жидкости.

Все это свидетельствует о том, что максимальная метаболическая активность ассоциации проявляется при культивировании в течение 4 - 5 дн. П р и м е р 4. Исследуют влияние различных температур культивирования (30, 38 - 39 и 50°С) на целлюлозоли- тическую активность штаммов, входящих в ассоциацию, образование ЛЖК и их соотношение в 4-суточной культуре. Культивирование проводят в пробирках под резиновыми пробками, а начальная величина рН среды во всех вариантах 6,8.

Оптимальной для роста и целлкшозо- литической активности у всех штаммов является температура 38 - 39°С (табл. 4). Как понижение температуры культивирования, так и ее повышение приводит к снижению целлюлозолити- ческой активности. При этом уменьшается валовое образование ЛЖК (табл.5).

П р и м е р 5. Изучают влияние начального значения рН среды на общую целлюлозолитическую, экзоглкжозндаз- ную и эндоглюканазную активности, а также продукцию ЛЖК отдельными штаммами бактерий, составляющих ассоциацию; проводят серии опытов in vitro. Для этого штаммы выращивают на среде с целлюлозой (состав приведен в примере 1) при различных значениях рН

от 5 до 9. Культивирование ведут при 38 С в течение 96 ч.

Оптимальные условия для образования целлюпозолитических ферментов и ЛЖК обеспечивает среда с начальным значением р, равным 7,0 (табл.6).

В этих условиях штаммы продуцируют наибольшее количество ЛЖК ,01 с максимально молярной, долей ацетата (табл. 7) .

П р и м е р 6. Изучают использование полученной ассоциации для скармливания бычкам.

Формирую две-группы животных по 6 голов в каждой. 5 - 7-месячных бычков кормят в соответствии с существующими нормами.

В сухом веществе рациона концент .раты составляют 26%, сочные корма 29% и грубые корма 45%. Первая группа служит контролем, а бычки второй группы ежедневно в смеси с концентратами в утреннее кормление получают по 50 мл ассоциации целлюлоэолитических бакте- рий, содержащей 180 - 200 млрд. микробных клеток. За подопытными животными ведут клинические наблюдения, в течение 55 дн. следят за функцией же- лудочно-кишечного тракта и его микро- флорой, учитывают поедаемость кормов, определяют перевариваемость питательных веществ и использование азота.

Скармливание ассоциации целлюлозо- литических бактерий бычкам не оказывает неблагоприятного действия на функции желудочно-кишечного тракта, общее состояние животных и стимулирует потребление ими грубого корма. Так, бычки опытной группы съедают по 1,,02 кг тимофеечного сена, а контрольной - по 1,3810,05 кг или на 18% меньше (,05) .

В содержимом рубца у животных, получавших микробную добавку, количест- во целлюлозолитических бактерий и активность целлюлозолитических ферментов максимальные, что свидетельствует о функционировании в преджелудках вводимой с кормом микробной добавки (табл. 8). Создающаяся при этом метаболическая ситуация обеспечивает повышение перевариваемости питательных веществ кормов и лучшее использование азота (табл. 9).

Прирост живой массы у подопытных бычков увеличивается на 26% (,001) а затраты кормовых единиц и перевариваемого протеина на 1 кг прироста

j

0

о

5 ,.

5

5

уменьшаются на 20,8 и 21,2% соответственно (табл. 10).

Пример 7.

Определение максимально эффективных доз скармливания ассоциации целлюлозолитических бактерий проведено методом групп и периодов на телятах с 6- до 9-месячного возраста.

По принципу парных аналогов формируют 3 группы по 1j голов в каждой (5 телочек и 10 бычков). Средняя живая масса телят при постановке на опыт составляет 169-171,5 кг. Кормление животных проводят в соответствии с нормами ВПЖа три раза в день. Рацион состоит из 1,5 - 2 кг тимофеечного сена, 8 кг кукурузного силоса (I период) или 8 кг разнотравного сенажа (II период), 1,5 - 2 кг комбикорма, 0,2 кг подсолнечникового шрота (II период), 20 - 25 г поваренной соли и 30 г монокальцийАосфата.

Первая группа в обоих периодах опыта служит контролем. Вторая группа в I периоде (31 день) дополнительно к основному рациону получает ежедневно в дневное кормление в смеси с концентратами по 30 мл ассоциации целлюлозолитических бактерий, а во II периоде (60 дней) - по 100 мл. Телята третьей группы на протяжении всего опыта ежедневно получают по 60 мл ассоциации.

Скармливание разных доз микробной добавки не оказывает отрицательного влияния на функции желудочно-кищечно- го тракта и состояние здоровья животных, а наоборот, стимулирует микрофлору и ее метаболическую активность. В рубце у животных, получавших микробную добавку, достоверно увеличивается количество бактерий, гидро- лизующих целлюлозу и гемицеллюлозы, причем существенно возрастает целлю- лазная активность микрофлоры (табл.11 и 12) . При этом коэффициенты переваримости сухого вещества и клетчатки рационов рубцовой жидкостью телят in vitro повышается с 64 и 48,8% в контроле до 66,7; 68,7; 64 и 60,2; 62,4 и 53,9% у животных, получавших 30,60 и 100 мл микробной добавки соответственно. Более интенсивный гидролиз клетчатки в рубце сопровождается увеличением концентрации Сахаров в содержимом рубца. Уровень ЛЖК у животных подопытных групп или не изменяется, или несколько повышается, тогда

клк направленность Оро/мчгпя п I периоде опыта смещается и сторону повышс1- ния образования ацетата за счгт снижения проппоната (табл.11). При Полос продолжительном скармпивании добавки в дозе 60 мл наблюдавшиеся различия непелировались, а дача 100 мл культуры увеличивает накопление в со- ;ер;шмом рубца проппоната и бутнрата за счет снижения ацетата (табл.12).

Анализ зоотехнических данных показывает, что максимальный прирост дают животные, получавшие ежедневно по 60 мл ассоциации целлюлозолитических бактерий (табл.13). При этом затраты кормовых единиц и перевариваемого протеина на 1 кг прироста живой массы уменьшаются в среднем на 10,8 и 10,9% соответственно.

Снижение суточной дозы микробной добавки до 30 мл или ее повышение до 100 мл существенно продуктивность телят не изменяет.

Таким образом, для стимуляции пере варивания питательных веществ кормов и роста молодняка крупного рогатого скота ассоциацию целлкшоэолитических бактерий целесообразно скармливать в дозе 50 - 6U мл на голову в день.

П р и м е р 8. Производственная проверка эффективности применения ассоциации целлюлоэолитических бактерий в кормлении молодняка крупного рогатого скота проведена в ОПХ Ермолино и колхозе им. Маршала Жукова.

В ОПХ Ермолино из бычков 10 - 11-месячного возраста по принципу парных аналогов сЬормируют контрольную и опытную группы по 24 животных в каждой группе. Кормление проводят в соответствии с существующими нормами.

В I периоде опыта (62 дня) рацион по питательности состоит из сенажа и разнотравного силоса (55%), комбикорма (45%) и кормовой патоки (5,0%). Общая питательность 6,3 корм.ед., сухого вещества 6,7 кг, 700 г переваримого протеина и 1,6 кг сырой клетчатки. Во II периоде опыта (58 дней) долю концентратов уменьшают до 22,7%, а сочных увеличивают до 67,5%, вместо патоки вводят кормовую свеклу. Рацион содержит 6,6 корм.ед., 7,9 кг сухого вещества, 766 г перевариваемого протеина, 1850 г сырой клетчатки. На протяжении всего опыта бычки опытной группы ежедневно, дополнительно к ос

JQ

j 2Q

5 зо

Q

45

50

5

MOHIIOMV рЛЦИОНу, НО Г . Ч.ЧИ Т НО Т 1 МЛ

ассоциации цочлючо-т. штпчег кнх б а к- терий . Микробную добавку смеши ватт с комбикормом и задают в кормушку индивидуально каждому животному. Взвешивают бычков ежемесячно.

В колхозе им. Маршала Жукова производственную проверку проводят в течение 3 мес. Опытные группы сЬормиру- ют из 8 - 9-месяччых бычков по 25 голов в каждой группе. Рацион кормления животных рассчитывают на 600 г суточного прироста и состоит из 10 кг силоса многолетних трав, 10 кг разнотравного сенажа и 1,5 кг комбикорма. Обе группы кормят одинаково, но опытные бычки дополнительно к основному рациону ежедневно в смеси с комбикормом получают по 50 мл ассоциации цел- люлозолитических бактерий. Взвешивание животных проводят при постановке на опыт и при его окончании.

В обоих опытах осуществляют контроль за состоянием здоровья животных.

Производственная проверка подтверждает полученные ранее данные о том, что скармливание ассоциации целлкглозо- литических бактерий бычкам при низком и умеренном уровне концентратов в рационе не оказывает неблагоприятного действия на Функции желудочно- кишечного тракта, общее состояние животных и стимулирует потребление ими грубого корма.

Дача микробного препарата увеличивает в преджелудке общее количество микроорганизмов и особенно бактерий, гидролизующих целлюлозу и гемицеллю- лозу, а отмеченные в микрофлоре изменения существенно повышают ее гидролитические функции. Так, активность целлобиогидролаз в содержимом рубца у подопытных бычков возрастает на 21,5% (,01), а целлюлозолитическая активность суммарной микрофлоры - на 74,2% (,05). При этом переваримость сухого вещества и клетчатки увеличивается до 55,8 и 33,2 против 51,,4 и 27,2% в контроле соответственно.

Общая концентрация энергетических метаболитов в содержимом рубца бычков, получавших микробную добавку, значительно выше, что обеспечивает более полное удовлетворение потребностей животного в энергии.

Вызываемая скармливанием ассоциации целлюлозолитических бактерий метаболическая ситуация в преджелудке обеспечивает лучшее использование животными питательных веществ и повышг- ет оплату корма (табл. 14).

Как видно иэ табл. 14, прирост живой массы бычков, получавших микробную добавку, увеличивается в среднем на 10%, а затраты кормов (кормовых единиц и переваримого протеина) на 1 кг прироста снижаются на 9 - 9,4%. Формула изобретения

Ассоциация микроорганизмов для скармливания молодняку крупного рога

того скота, содержащая целлюлозорач- рушающие микроорганизмы, отличающаяся тем, что, с целью повышения прироста живой массы, в качестве целлюлозоразрушаюнгих микроорганизмов используют смесь штаммов бактерий Clostridium thermocelluloliti- cus ВКПМВ-4291, Ruminococcus albus ВКПМВ-4292 и Clostrldium lochheadii ВКПМВ-4290 в соотношении (38-50): :(19-25):(31-40) соответственно.

Таблица 1

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой новую ассоциацию целлюлозоразрушающих микроорганизмов. Целью изобретения является повышение прироста живой массы молодняка крупного рогатого скота за счет увеличения потребления грубого корма и повышения перевариваемости клетчатки в пищеварительном тракте животных. Ассоциация состоит из смеси штаммов бактерий CLOSTRIDIUM THERMOCELLULOLITICUS ВКПМ В - 4291, KUMINOCOCCUS ALBUS ВКПМ В - 4292 и CLOSTRIDIUM LOCHHEADII ВКПМ В - 4290 в соотношении 38 - 50:19 - 25:31 - 40 соответственно. Ассоциация позволяет увеличить привес животных на 10 - 26%, улучшить микробиологические и биохимические показатели желудочно-кишечного тракта. 14 табл.

Источник клетчатки в среде

о-

ч

О 3 4 6

О 3 4 6

О 3 4 6

О 3 4 6

12,0±0,134,5±0,3

40+0,6 25,0±0,242,6+0,2

47±0,9 26,0±0,243,4±0,2

49+0,8 20,0+0,141,7±0,3

8,0±0,126,7±0,09

25,0+0,5 15,0+0,1233,4±0,11

30,0±0,5 16,0±0,1242,8+0,12

30,5+0,9 15,0+0,242,5±0,12

15,0+0,142,4+0,21

59,8+4,9 38,0+0,243,2+0,16

62,2±6,8 39,0+0,244,9+0,18

64,4+7,3 35,0±0,345,3±0,12

17,0+0, 12 34,НО,11 58,2+4,4 40,,23 39,3±0,16 63,/±4,5 42,04--),25 44,9+0,2 64,1+4,5 38,0+0,11 44,8±0,15

Коэффициент гидролиза клетчатки при соотношении Cl . thermocellu- loliticus, R.albus и Cl. lochheadii в ассоциации

Таблица2

ТаблицаЗ

Т а б л и ц а -

Таблицаб

Т а б л и ц а 7

Примечание. .Достоверность разницы показана в сравнении

с 1 группой: а - ,05; б - ,02; в - ,01; г - ,001.

Таблица II

Таблица 12

Примечание. Достоверность разницы показана в сравнении с 1 группой: а - ,05; б - ,02; в - ,01; г - ,001.

Доза получаемой до- банкя, мл

Продолжение табл.12

Таблица 13

100

60

,05.

167169330

Продолжение табл.13

Таблица 14