Способ определения индивидуальной чувствительности к альфа-адреноблокаторам при артериальной гипертензии Советский патент 1991 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к медицине, в частности, к кардиологии, и может быть применено при лечении и вторичной профилактике артериальных гипертензий,

Цель изобретения - повышение терапевтического эффекта.

Способ осуществляют следующим образом.

12,0 мл венозной крови, взятой у больного артериальной гипертензией в силико- нированные пробирки, стабилизируют 3,0 мл 3%-ного раствора этилендиаминтетраа- цетат (ЭДТА). Обогащенную тромбоцитами плазму получают центрифугированием крови при 1000 об/мин в течение 20 мин,-затем отобранную верхнюю фазу центрифугируют еще 5-6 мин при 1500 об/мин для осаждения примеси лейкоцитов. Чистую фракцию тромбоцитов получают из обогащенной тромбоцитами плазмы, центрифугируя ее 30 мин при 3000 об/мин. Полученный осадок клеток ресуспендируют в 4-6 мл 2,7%-ного раствора ЭДТА для снятия агрегации, чтобы количество клеток в суспензии было не менее 1-107/мл.

В четыре пробирки (2 контрольные и 2 опытные) вносят по 0,4 мл полученной суспензии тромбоцитов. В контрольные добавсх

4 СЛ V4 XI 00

ляют по 0,2 мл физиологического раствора, в опытные - по 0,2 мл раствора адреналина (как адреностимулятора) в конечной концентрации 1 10 М и инкубируют в термостате при 37°С в течение 15 мин,

Определение концентрации общих ли- пидов.

Первую серию пробирок (контроль и опыт) центрифугируют при 3000 об/мин для получения осадка тромбоцитов, После удаления надосадочной жидкости к осадку клеток добавляют по 0,3 мл концентрированной серной кислоты, нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин, затем охлаждают, добавляют по 3,0 мл фосфорно- ванилинового реактива, встряхивают и оставляют в темном месте в течение 40 мин. Экстинцию раствора определяют на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 530 нм против холостой пробы: 0,3 мл концент- рированной серной кислоты и 3,0 мл фос- форнованилинового реактива. Расчет количества лилидов производят по калибровочной кривой. Степень изменения концентрации общих липидов рассчитывают по формуле

Кф - Кр

Кф

где Кф - концентрация липидов в контрольной пробе (фон);

К0 - концентрация липидов в опытной пробе (после стимуляции),

Определение циклических нуклеоти- дов.

Вторую серию пробирок (контроль и опыт) центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин для получения осадка клеток. Над- осадочную жидкость сливают, к осадку тромбоцитов добавляют 10%-ный раствор трихпоруксусной кислоты, составляют в те- чение 10 мин при +4°С, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин для осаждения лизи- рованных мембран, а надосадочную жидкость, содержащую экстракт циклических нуклеотидов, сливают а пластиковые про- бирки и замораживают при -18°С, Определение циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) проводят радиоиммунологическим методом, используют радиоиммунные наборы. Степень изменения концентрации цик- лических нуклеотидов рассчитызают по формуле

JkrJk.. 10о%,

100%

Цф

где Цф- концентрация циклических нуклеотидов в контрольной пробе (фон);

Цо - концентрация ЦН после стимуляции.

По изменению концентрации общих липидов и приросту цГМФ более чем на 10% от исходного уровня определяют показания к назначению альфа-адреноблокаторов при артериальных гипертензиях.

П р и м е р 1. Больной С.. 63 лет. В течение 17 лет страдает гипертонической болезнью Н стадии с медленно прогрессирующим течением. При биохимическом исследовании в тромбоцитах больного выявлена следующая динамика адренозависимых процессов:

Фон После стимуляции Общие липиды

мкг/108кл20,8 24,8 (+19%)

цГМФ, пМ/10а , 4,57 5,64 (+23%)

Однократный прием пирроксана в дозе 0,03 г подтверждает наличие альфа-адрено- зависимоста артериальной гипертензии, так как приводит к значительному снижению артериального давления (184/94 - 144/86 мм рт.ст.). Курсовое лечение пиррок- саном в дозе 0,09 г/сут привело к существенному снижению артериального давления в течение 2 недель (до 146/82 мм рт.ст.}, что подтверждает наличие у больного индивидуальной чувствительности к аль- фа-адре-юблокаторам.

П р и м е р 2. Больной С., 48 лет, в течение 8 лет лечится по поводу хронического циелонефрита с гипертензивным синдромом, Артериальная гипертензия развилась в течение последних трех лет.

Медикаментозная проба с пирроксаном выявила у больного альфа-адренозависи- мость артериальной гипертензии (до пробы - 170/100, после пробы 140/100 мм рт.ст., 18%), Назначение пирроксзнэ по 0,09 г/сут оказалось неэффективным. Биохимическое исследование крови выявило незначительную активацию адренозависимых процессов под влиянием адреналина:

Фон После стимуляции Общие липиды,

мкг/108кл

82,2

74,2 (-9%)

цГМФ,пМ/108кл 8,13 7,81(+4%)

Незначительное снижение концентрации липидов (-9%) и увеличение концентрации цГМФ (4%) свидетельствуют об отсутствии зльфа-адренозависимости артериальной гипертензии. Назначение обзида- на в дозе 120 мг/сут привело к стойкому снижению артериального давления (до 140/96 мм рт.ст.), что подтверждает полученные данные о незаинтересованности альфа-адренорецепторов у конкретного больного, а также свидетельствует о возможности ложноположительного результата при проведении пирроксановой пробы.

Клинические испытания на 42 больных показали, что у 28 больных АГ отмечается прирост концентрации общих липидов в среднем на 29% от 49,4 ± 5,4 мкг/108 кл до 63,5 ± 6,8 мкг/108 кл после стимуляции адреналином (,01 по Вилкоксону). У 12 больных отмечается снижение концентрации общих липидов также в среднем на 20% от44,5 ±9,4 до 31,5± 6,6 мкг/10а кл (р 0,01). Динамика изменения концентрации цГМФ у больных АГ составила в среднем 30%: от 10,5 ± 1.1 - фон до 13,6 ± 1,5 пМ/10 кл после стимуляции (,05).

Клиническое обследование и лечение 40 больных с выявленной повышенной чувствительностью альфа-адренорецепторов в 98% случаев (39 из 40) показало эффективность использования Б терапии препаратов, обладающих альфа-блокирующим эффектом. У этих больных исходный уровень АД до лечения составил 184,9/112,7 ±4,6/2,7 мм рт.ст., через 2 недели лечения альфа- блокатором пирроксаном (или празозином) АД снизилось до 164,1/99,4 ±3,9/2.1 мм рт.ст.

Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет точно (95% случаев) определять индивидуальную чувствитель0

5

0

5

ностькальфа-адреноблокаторам, в результате чего повышается результативность лечения больных артериальной гипертен- зией.

Формула изобретения Способ определения индивидуальной чувствительности к апьфа-адреноблокато- рзм при артериальной гипертензии путем клинического исследование пациента, о т- личающийся тем, что, с целью повышения терапевтической эффективности, у пациента берут кровь из вены, добавляют в нее 3%-ный раствор этилендиаминтетраа- цетата {ЭДТА), трижды центрифугируют, полученный осадок тромбоцитов суспендируют в 2,7%-ном растворе ЭДТА, суспензию инкубируют в растворе адреналина с концентрацией 1 М при 37°С в течение 15 ми, центрифугируют, в осадке определяют концентрацию общих липидов и циклическое гуанозинмонофосфата (цГМФ) и при повышении концентрации цГМФ и общих липидов более чем на 10% по сравнению с контролем, не содержащим адреналин, и снижении концентрации общих липидов более чем на 10% от контрольного уровня определяют чувствительность к альфа-адре- нобяокаторем.

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано при лечении и вторичной профилактике артериальных гипертензий. Цель изобретения - повышение терапевтического эффекта. Поставленная цель достигается тем, что у пациента берут кровь из вены, добавляют в нее 3%-ный раствор этйленди- еминтетраэцетата (ЭДТА), трижды центрифугируют, полученный осадок тромбоцитов суспендируют в 2,7%-ном растворе ЭДТА, суспензию инкубируют в растворе адреналина с концентрацией 1 М при 37°С в течение 15 мин, центрифугируют, в осадке определяют концентрацию общих липидов и циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) и при повышении концентрации цгМФ и общих липидов елее чем на 10% по сравнению с контролем, не содержащим адреналин, и снижении концентрации общих ляпидов более чем на 10% от контрольного уровня определяют чувствительность к аль- фа-адреноблокаторам. Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет точно