Способ подготовки тканей полукружных каналов вестибулярного аппарата для изучения в сканирующем электронном микроскопе Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к функциональной морфологии вестибулярного аппарата.

Цель изобретения - сохранение целостности структур полукружных каналов при подготовке их для исследования в сканирующем электронном микроскопе.

Способ реализуется следующим образом.

Наркотизированное животное перед декапитацией транскардиально перфузируют вначале физиологическим раствором при 36-37°С, а затем холодным (4°С) 1,5% глю- таральдегидом на фосфатном буфере с добавлением 5% сахарозы. Время перфузии 40-45 мин. После декапитации выделяют пирамиды височных костей, проводят постфиксацию в 1 % растворе четырехокиси осмия и дегидратацию в спиртах восходящей концентрации и лишь после обезвоживания извлекают полукружные каналы из полости вестибулярного лабиринта. Сушат, напыляют золотом и изучают в сканирующем электронном микроскопе.

Пример. Морскую свинку массой 320 г под нембуталовым наркозом из расчета 40 мг/кг транскардиально перфузируют вначале физиологическим раствором с добавлением гепарина 25000 ед./л в объеме 300 мл при 37°С, а затем 1,5% глютаральде- гидом на фосфатном буфере рН 7,4 с добавлением 5% сахарозы (4°С). Время перфузии 45 мин. После декапитации выделяют пирамиды височных костей, перфорируют преддверие и круглое окно, постфиксируют в 1 % растворе осмиевой кислоты на фосфатном буфере - 1 ч, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации от 30-100°. После

О 00

ю ел о

дегидротации извлекают полукружные каналы из вестибулярного лабиринта, монтируют на предметном столике, сушат в камере при критической точке в С02, напыляют золотом и изучают в сканирующем электронном микроскопе.

Предлагаемый способ приготовления препаратов оказывается продуктивным не только при анализе тонких структур полукружных каналов, но и позволяет изучить особенности рельефа тела утри кул юса, области перехода его в полукружные каналы, исследовать рельеф и распределение отоко- ний на утрикулярных и саккулярных мембранах, позволяет получить нативную структуру базилярной мембраны и волокнистых клеток слухового анализатора - улитки, выявить стереологические особенности слуховых косточек - стремячка и др.

Формула изобретения

Способ подготовки тканей полукружных каналов вестибулярного аппарата для

изучения в сканирующем электронном микроскопе, включающий извлечение исследуемого материала, фиксацию, постфиксацию, обезвоживание, сушку и напыление препаратов, отличающийся

тем, что, с целью сохранения активности исследуемого материала, производят предварительно перед декапитацией фиксацию всех тканей животного, в том числе структур внутреннего уха, путем транскардиальной

перфузии гепариниэированным физиологическим раствором, а затем глютаральдеги- дом и извлекают структуры внутреннего уха лишь после постфиксацйи и обезвоживания пирамид височных костей.

Изобретение относится к области медицины, в частности гистологии, а более конкретно - к функциональной морфологии вестибулярного аппарата. Цель изобретения - сохранение активности полукружных каналов при подготовке их для исследования в сканирующем электронном микроскопе. Указанная цель достигается тем, что наркотизированное животное перед декапита- цией в течение 40-45 мин транскардиально перфузируют вначале физиологическим раствором с добавлением гепарина, а затем 1,5%-ным раствором глютарзльдегида с добавлением 5% сахарозы на фосфатном буфере (0,1 моль/л, рН 7,4) и извлекают структуру внутреннего уха лишь после постфиксации и обезвоживания пирамид височных костей. Ё