Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам Советский патент 1991 года по МПК G01N33/483 A61B5/05 

Изобретение относится к медицине, а именно к методам экспресс-определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, что дает возможность быстрого определения эффективной дозы антибиотиков для проведения больным с заболеваниями инфекционной природы ранней, целенаправленной антибактериальной терапии.

Цель изобретения - ускорение способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Для достижения цели пробы, содержащие взвеси микроорганизмов с различными концентрациями антибиотиков, инкубируют в течение 20-30 мин, после чего в течение 10-20 с облучают лазером непрерывного излучения с мощностью 30-50 мВт и лучистой экспозицией 3-Ю7- 8107 Дж/м, под углом 7-11° относительно оси возбуждающего луча регистрируют полуширину спек- тра рассеянного света, определяют

изменения полуширины спектра рассеянного света по формуле

СО

с

дг

Гт - Г0

100%,

где Г0 и ft- полуширина спектра рассеянного света соответственно до и после инкубации, регистрируют минимально и подавляющую концентрацию антибиотика в пробе, для которой А Г составляет более 30-90%.

Пример 1. Для определения чувствительности культуры золотистого стафилококка (штамм N 340) к антибиотику-аминогликозиду неомицину готовили серию двукратных разведений этого антибиотика в мясопептонном бульоне, разлитом по пробиркам в обьэме 2 мл. Диапазон конечных концентраций нео- мицина составлял 0,25 - 128 мкг/мл. Взвесь культуры стафилококка готовили в изотоническом растворе хлорида натрия с содеожаOs

ю о о X

XI

нием 1 млрд микробных тел по стандарту мутности 1,0. Далее микробную взвесь тем же раствором разводили в 100 раз, т.е. до концентрации бактериальных клеток до 10 млн/мл.

В каждую пробирку с антибиотиком вносили по 0,1 мл культуры (по 500 тыс. микробных тел на 1 мл мясопептонного бульона). Контролями служили пробирки с питательной средой и антибиотиком в различных концентрациях (контроль сред) и пробирка с засеянной питательной средой без антибиотика (контроль роста культуры). Контрольные и опытные пробирки помещали в термостат при 37°С и инкубировали в течение 20 мин. До и после инкубации пробирки подвергали облучению при помощи гелий-неонового лазера ЛГ-38 (параметры см. в табл. 1). Параметры рассеянного света (табл. 1) регистрировали с использованием фотоэлектронного умножителя ФЭУ-79 и, анализатора спектра СКА-72 с полосой обзора 50 Гц. Чувствительность устройства составляла 4-6%.

После регистрации и определения параметров рассеянного света рассчитывают прирост его интенсивности (А I) в % относительно исходного уровня, а также прирост полуширины (Д Г) в %. также относительно исходного уровня. В результате 24 опытов Д I для пробирок с исследуемой культурой стафилококка с неомицином в концентрации 0,12 мкг/мл составила 46,2 ±5,2%; 0,25 мкг/мл-5,02,3%;0,5мкг/мл2,1 ±0,3%; 1,0 мкг/мл-1,2 ±0,2%ит.д.Д Г соответственно составила при концентрации неомицина 0,12 мкг/мл 12,33,2%; 0,25 мкг/мл-30 4,2%; 0.5 мкг/мл-91,0±5,1%; Омкг/мл-96,,8% и т.д. Для пробирок с контролем среды и

0

ДГ составляла 0%, для пробирок с контролем роста культуры - соответственно 72.3 ± 0,9. Граница видимого роста в опыте отчетливо появилась только через 48 ч и находилась на уровне пробирок с неомицином в концентрации 0,25 мкг/мл. Таким образом, МПК неомицина для штамма N 340 золотистого стафилококка составляла 0,25 мкг/мл.

В пробах с Д Г от 30% и не менее содержалась концентрация антибиотика менее МПК, в пробах сД Г от 91 % и более-кон- центрация антибиотика более МПК.

Пример 2. Определение чувствительности золотистого стафилококка (штамм № 5 340) к тетрациклина гидрохлориду проводилась аналогично описанному в примере 1.

В пробах культур с Д Г менее 30% (7- 29,5%) концентрация тетрациклина меньше МПК, в пробах с Д Г больше 90% (91-112%) - выше МПК.

Формула изобретения

Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем инкубации взвеси микроорганизмов в жидкой питательной среде с различными концентрациями антибиотиков, облучения лазером непрерывного излучения и регистрации параметра рассеянного света с последующим определением минимально подавляющей концентрации, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, инкубацию проводят в течение 20-30 мин, облучают лазером с мощностью 30-50 мВт и лучистой экспозицией 3-Ю7 - 8-Ю7 Дж/м2, под углом 7-11° относительно оси возбуждающего луча, и рассчитывают полуширину спектра рассеянного света и при изменении ее отно- (;ительно контроля на 30-90% регистрируют минимально подавляющую концентрацию.

Т а 6 л и ц а 1

0

5

0

5

Таблица2

Изобретение относится к медицине, а именно к методам экспресс-определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Цель изобретения - ускорение способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам - достигается тем, что пробы, содержащиегвзвеси микроорганизмов с различными концентрациями антибиотиков, инкубируют в течение 20-30 мин, после чего в течение 10-20 с облучают лазером непрерывного излучения с мощностью 30-50 мВт и лучистой экспозицией 3.107 - 8107 Дж/м2, под углом 7-11° относительно оси возбуждающего луча регистрируют полуширину спектра рассеяния света, определяют изменения полуширины спектра рассеяния света. 2 табл

Параметр

Мощность гелий-неонового лазера, мВт10,0

Лучистая экспозиция, Дж/м2„ 1,5 «Ю

Время инкубации культур с антибиотиками4 ч МПК антибиотика, мкг/мл0,12 Время облучения и регистрации параметров рассеянного света 3 мин Прирост интенсивности рассеянного света 4-У после инкубации в культуре с МПК антибиотика10% Прирост полуширины спектра рассеянного света Л Г после инкубации в культуре с МПК антибиотика

Конечная концентрация микробов,

клет/л6 10

.Значение параметров по способу

,J

jпрототип предлагаемый

5° % 8-10

30 мин 0,12

20 с

90% 10