Способ определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и касается способов определения, аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа.

Пример конкретного осуществления способа.

На стеклянную пластинку наливают прозрачный 1%-ный агар (фирма Диф-i ко) или 1%-ный бактоагар (фирма Фе- рок), приготовленный на натрий-аце- тат-барбиталовом буфере рН 8,1-8,6. Для приготовления 1 л буфера требуется 8,14 гр барбитала натрия (меди- нал), 6,48 г уксусно-кислого натрия, 90 мл 0,1 мо нормального раствора соляной кислоты.

После застывания агара в нем делают лунки на расстоянии 6 мм друг от друга. Со стороны катода-в лунки помещают испытуемые сыворотки, а со стороны анода детергент (0,5-1%-ный; раствор тритон Х-100 или твин-8(/, или сульфанола в дистиллированной води) . Затем стекло помещают в прибор

для электрофореза. В электродные сосуды наливают натрий-ацетат-барбита- ловый буфер рН 8,1 - 8,6, разведенный 1s10 дистиллированной водой. Электрофорез проводят при силе тока 15-20 ма, напряжении 300-400 В и градиенте потенциала 15-20 ма, напряжении 3 в/см в течение 50-60 мин.

Для учета результата пластинку просматривает в косом проходящем свете. При наличии аномального липопротеида в сыворотке крови между лунками обнаруживается, четкая полоса преципитации, не исчезающая после обра ботки пластины 10%-ным раствором КС1, эта полоса преципитации принадлежит аномальному лупопротеиду (АЛЛ).

При изучении морфологических и физико-химических свойств миланского антигена было выявлено, что он является липопротеидом низкой плотности, плавучая плотность которого в градиенте сахарозы 1,06, не окрашивается Суданом черным, но окрашивается жировым красным 7 В и нафталиновым черным, при электронной микроскопии

О

со оо i о

00

представляет собой дископодобные частицы величиной 40-50 нм. Однако в сы- воротке больных и перейесших гепатит А из-за его слабых антигенных свойств

Таким образом при упрощении и ускорении способа обнаружена довольно высокая частота обнаружения АЛЛ в сыворотках больных гепатитом.

В табл. 1 и 2, 3 представлены дан- ные по частоте обнаружения АЛЛ при различных гепатитах в зависимости от тяжести заболевания, а также в зависимости от положительной реакции ала- ниновой аминотрансферазы.. Из пред- ставленных данных следует,, что имеется положительная корреляция на обнаружение АЛЛ и тяжестью заболевания, данные табл. 3 свидетельствуют о бо-, лее высокой чувствительности обнару- жения АЛЛ по сравнению с тестом А и AT. При этом упрощение способа дости-

гается за счет исключения использования специфической антисыворотки, также значительно ускоряется и время . , проведения реакции с 18-24 ч до 1 ч (времени.проведения встречного электрофореза) .

Формула изобретения

Способ определения аномального ли- попротеида в сыворотке крови больных гепатитом путем исследования сыворотки больных в реакции преципитации, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, преципитацию осуществляют встречным электрофорезом в присутствии детергента тритона х-100.или твина-80, или сульфанола в концентрации 0,5-1% в градиенте потенциала 15-20 в/см в течение 50-60 мин.

Изобретение относится к медицине и касается способов определения аномального липопротеида в сыворотке( крови больных гепатитом. Целью изобретения является упрощение и ускорение способа. Способ осуществляется посредством проведения встречного электрофореза сыворотки больных в присутствии детергента тритона Х-100 или Твина-80, или сульфанола в концентрации 0,5-1% в градиенте потенциала 15-20 в/см в течение 50-60 мин.

Таблица 1 Частота обнаружения АЛЛ при различных заболеваниях

. . . ,, .- ,.. Т а б.я и ц а 3 Частота обнаружения АЛЛ и повышенная активность АлАТ у. детей и взрослых в организованных детских коллективах.

А Учреждения, где наблюдались случаи гепатита А/42/

Таблица 2