Способ анализа левомицетина в пищевых продуктах Советский патент 1991 года по МПК G01N30/90 A23L3/00 

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения левомицетина в пищевых продуктах.

Цель изобретения - повышение достоверности анализа и упрощение процесса.

Способ осуществляется следующим образом.

Из пробы пищевого продукта выделяют образец левомицетина одним из известных способов. Одновременно готовят стандартный раствор левомицетина. Стандартный раствор и аликвоту образца последовательно вводят в высокоэффективный жидкостной хроматограф, используя систему растворителей ацетонитрил - вода - деци- ламин 40:60:0,08-0,12 (преимущественно

0,1) и УФ-детектор с А 278 нм. Наблюдают на хроматограмме образца пик с временем удерживания, равным времени удерживания пика стандарта левомицетина (п/5,9 мин), и измеряют его площадь. Аликвоту второго образца обрабатывают 10%-ным раствором щелочи втечение 15- 20 мин при температуре 60-80°С и вновь вводят в хроматограф в тех же условиях. Отсутствие пика левомицетина на полученной хромэтограмме подтверждает правильность его идентификации в об- разце (наличие пика левомицетина свидетельствует о ложноположительной идентификации).

Количественное определение левомицетина проводят сравнением площадей пих| О

Ю

ы о

ков левомицетмна - стандарта и левомицетина в образце, Содержание левомицетина в образце вычисляют по формуле:

г - Son ,, V мкг

С Г СстЖ Г где Son - площадь пика левомицетина на хроматограмме опыта, усл.ед.;

SCT - площадь пика левомицетина на хроматограмме стандарта, усл.ед.

Сет - концентрация левомицетина в стандартном растворе, мкг/мкл,

V - объем образца, мкл;

М - масса пробы продукта, кг.

В табл. 1 приведены значения времени удерживания левомицетина (30 нг) в системе растворителей ацетонитрил - вода 40:60, содержащей различные количества децила- ммна. Как видно из экспериментально полученных результатов, введение 0,08-0,12, (преимущественно 0,1) об.ч. дециламина эффективно сдвигает пик левомицетина. Введение меньшего количества амина не обеспечивает отделения его от примесных веществ, а большие количества снижают чувствительность определения за счет увеличения фона (увеличение оптической плотности самого элюента), что проявляется в снижении площади пика левомицетина.

В табл. 2 приведены результаты гидролиза левомицетина 10%-ным раствором щелочи (КОН) при различных температурах и экспозиции.

Как видно из табл. 2, оптимальными с- ловиями обработки левомицетина являются 60-80°С в течение 15-20 мин.

П р и м е р 1. Определение левомицетина в молоке,

50 мл молока встряхивают с 25 г безводного сульфата натрия и экстрагируют 3 х 30 мл этилацетата. Полученную смесь центрируют 15 мин при 4000 об/мин и декантируют. Этилацетатный слой концентрируют до 60 мл на ротационном испарителе (v 50°C), промывают последовательно 5 мл насыщенного раствора NaCI + 0,2 мл 10% N32C03, 5 мл насыщенного раствора NaCI + 0,2 мл 10% СНзСООН и 5 мл насыщенного раствора NaGl. Органический слой отбирают и упаривают на ротационном испарителе (0°С) до минимального объема, отдувают азотом до исчезновения запаха органических растворителей, добавляют 3 мл смеем ацетонитрил - вода 1:4 и экстрагируют 3 х 5 мл петролейного эфира. Петролейный эфир отбрасывают и извлекают левомицетин этилацетатом 3 х 5 мл. Этилацетатный

слой упаривают досуха, растворяют в 100 мкл метанола, Готовят стандарт левомицетина в метаноле 10 нг/мкл.

Вводят 3 мкл стандартного раствора в

жидкостной хроматограф Бекман 334 (США) с колонкой ультрасфер ОД5, 5 мкм (250 х 4,6 мм), УФ-детектором (Кратос SP- 757) при 278 нм, используя систему растворителей ацетонитрил - вода - дециламин

40:60:0,1. Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,87 мин - левомицетин. В тех же условиях вводят 3 мкл метанольно- го экстракта образца молока. Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,90 мин

совпадает с временем удерживания стандарта левомицетина.

Для подтверждения наличия левомицетина к 50 мкл метанольного экстракта приливают 50 мкл 10%-ного раствора КОН и

нагревают 20 мин при 70°С. 6 мкл раствора вводят в тех же условиях в жидкостной хроматограф. На полученной хроматограмме пик с временем удерживания 5,9 мин отсутствует. Это подтверждает наличие левомицетина в образце.

Площадь пика левомицетина на хроматограмме стандарта (30 нг) равна 42350 (усл. ед,), образца - (усл. ед.). Расчет по формуле

С 139043 0,01 100

42350 0,05 дает содержание левомицетина в образце 65,7 мкг/л.

П р и м е р 2, Определение левомицетина в мясе.

10 г мяса гомогенизируют с 15 мл фосфатного буфера (0,025 М: 0,025 М KHaPO-q + + 0,025 М N32HP04, рН 6,88) и экстрагируют 3 х 30 мл этилацетата. Полученную взвесь

центрифугируют 15 мин при 4000 об./мин и декантируют Этилацетатный слой, промывают последовательно 5 мл насыщенного раствора NaCI + 0,2 мл 10% ЫааСОз. 5 мл насыщенного раствора NaCI + 0,2 мл 10%

СНзСООН и 5 мл насыщенного раствора NaCI. Органический слой отбирают и упаривают на ротационном испарителе (50°С) до минимального объема, отдувают азотом до исчезновения запаха органических растворителей. добавляют 3 мл смеси ацетонитрил - вода 1:4 и экстрагируют 3 х 5 мл летролейного эфира, Петролейный эфир отбрасывают и извлекают левомицетин этилацетатом 3x5 мл, Этилацетатный слой

упаривают досуха, растворяют в 100 мкл метанола. Готовят стандарт/чевомицетина в метаноле в 10 нг/мкл.

Вводят 3 мел стандартного раствора в жидкостной хроматограф Бекман 334

(США) с колонкой ультрасфер ОД5, 5 мкм

(250 х 4,6 мм), УФ-детектором (Кратос SP- 757) при 278 нм, используя систему растворителей ацетонитрил - вода - дециламин 40:60:0,1. Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,9 мин - левомицетин. В тех же условиях вводят 3 мкл метанольного экстракта образца мяса, Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,95 мин совпадает с временем удерживания стандарта левомицетина,

Для подтверждения наличия левомицетина к 50 мкл метанольного экстракта приливают 50 мкл 10%-ного раствора КОН и нагревают 20 мин при 70°С. 6 мкл раствора , вводят в тех же условиях в жидкостной хроматограф. На полученной хроматограмме пик с временем удерживания 5,95 мин сохраняется. Это свидетельствует об отсутствии левомицетина в исследуемом образце мяса.

Надежная идентификация и определение левомицетина в предлагаемом способе достигаются при содержании его 10 мкг/кг продукта. Относительное стандартное отклонение 0,10-0,15, что находится на уровне требований к современным методам анализа пищевых продуктов.

Формула изобретения Способ анализа левомицетина в

пищевых продуктах, включающий приготовление образца и стандарта, разделение аликвот образца и стандарта методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в системе растворителей, включающей ацетонитрил и воду, облучение хроматограмм УФ-светом при А 278 нм, подтверждение наличия левомицетина в образце и его количественное определение сравнением со стандартом пиков

УФ-спектров, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности анализа и упрощения процесса, для высокоэффективной жидкостной хроматографии используют систему растворителей ацетонитрил вода - дециламин 40:60:(0,08-0,12), а для подтверждения наличия левомицетина готовят второй образец, обрабатывают его раствором щелочи при 60-80°С в течение 15-20 мин, затем подвергают хроматографии и УФ-облучению в указанных условиях и по отсутствию пика при А 278 нм судят о наличии левомицетина в образце.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения левомицетина в пищевых продуктах. Цель изобретения - повышение достоверности анализа и упрощение процесса. Готовят два образца и стандарт, аликвоты одного образца и стандарта разделяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в системе растворителей ацетонитрил - вода - деци- ламин 40:60:(0,08-0,12) и хроматограммы облучают в УФ-свете при А 278 нм Для подтверждения наличия левомицетина в продукте второй образец обрабатывают 10%-ной щелочью при 60-80°С в течение 15-20 мин, затем проводят указанные выше процедуры. По отсутствию на спектре пика при А 278 нм судят о наличии в образце левомицетина. Количество левомицетина определяют, сравнивая площади пиков первого образца и стандарта. 2 1абл.

Зависимость времени удерживания левомицетина от количества дециламина

30

Таблица 1

Влияние температуры и продолжительности щелочной обработки на гидролиз 1 мкг левомицетина

+ - наличие левомицетина, - - отсутствие левомицетина.

Таблица 2