Способ культивирования молочнокислых или пропионовокислых бактерий Советский патент 1992 года по МПК A23K3/00 C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается способа культивирования молочнокислых или пропионовокислых бактерий, используемых для приготовления заквасок для силосоваг ния кормов;

Целью изобретения является повышение выхода биомассы бактерий.

Способ культивирования молочнокис- пыхили пропионовокислых бактерий заключается втом, что готовят питательную среду, содержащую источники углерода, азота, минеральные соли и 1-2% водного остатка ацетоновой вытяжки из мицелия Actlnomyces roseoflavus var. roseofunglrri, являющегося отходом производства розеофунгина. засевают среду одним из штаммов молочнокислых бактерий АМБ, ПМБ или пропионовокислых ПКБ и выращивают их,

П Р и м е р 1. Культуру Actinomyces roseoflavus var. roseofungini Nlkitina выращивают на питательной среде следующего состава, г/л:

Рыбная мука10,0

Пептон5,0

Глюкоза20,0

Лактоза20,0

(NH S042,0

Крахмал н/раств10,0

СаСОз5,0

NaCI. 5,0

Водадо 1 л.

Биомассу отделяют от культуральной жидкости до влажности 60-70%, антибиотическое вещество из биомассы экстрагируют 5-кратным объемом ацетона. Ацетоновый экстракт отфильтровывают от биомассы и упаривают на водяной бане в вакууме при

VI

00 00

34-40°С до полного удаления ацетона. Антибиотическое вещество экстрагируют из выпаренного остатка бутанолом, после отслаивания бутанольный экстракт отделяют от водного остатка и используют для извлечения антибиотика. Водный остаток стерилизуют и используют в качестве добавки в питательные среды для культивирования молочнокислых АМС, ПМБ и пропионово- кислых бактерий (ПКБ).

Питательные среды стерилизуют при 0,8 эти 40 мин, вносят в них 0,5-2.0 об.% стерильного водного остатка ацетоновой вытяжки из мицелия после извлечения из него антибиотика.

Выращивание культур проводят в течение 24 ч в термостате при температуре: АМС - 37°С. ПКБ - 28°С, ПМБ - 32°С.

Контролем служат питательные среды бездобавок.

Результаты опытов представлены в табл. 1,2,3.

Как видно из таблиц, введение в состав питательной среды 1-2% водного остатка ацетоновой вытяжки из мицелия повышает выход бактериальных клеток.

Таким образом, культивирование каждого штамма на средах с добавлением водного остатка ацетоновой вытяжки из мицелия повышает выход продукта и снижает его себестоимость.

Приме р 2. Готовят питательную среду на основе фугатов бактерий АМС, ПКБ и ПМБ.;

Для получения фугатов бактериальные культуры АМС, ПКБ и ПМБ выращивают на жидких питательных средах, состав которых приведен в табл. 4.

Условия выращивания культур.

АМС - количество посевного материала 3,0%, культивирование при температуре 37°С, ПКБ - количество посевного материа- . ла 5-7%; культивирование при температуре 28-30°С, ПМБ - количество посевного материала 5-7%, культивирование при 30-32°С.

После выращивания в покое в течение 24 часов при оптимальной температуре, бактериальные клетки отделяют от культу- ральной жидкости центрифугированием, а фугаты используют для приготовления питательных сред. При этом после внесения со- ответетвунэщих добавок (табл. 5-7) и нейтрализации фугаты стерилизуют при 105-110°С в течение 30 мин. Затем вносят посевной материал соответствующей культуры и выращивают при оптимальных режимах, указанных выше. Через 24 ч

культивирования определяют содержание бактериальных клеток путем высева из соответствующего разведения в чашки Петри с твердой питательной средой. б) Приготовление питательных сред с

добавлением отхода розеофунгина. Для этого продуцент розеофунгина выращивают на питательной среде следующего состава, г/л:.. Рыбная мука 10.0 Пептон 5,0 Глюкоза 20,0 Лактоза 20,0 (МНфЗСм 2,0 Крахмал н/раств 10,0 СаСОз 5,0 Nad 5,0

Биомассу отделяют от культуральной

жидкости до влажности 60-70%. антибиотическое вещество из биомассы экстрагируют 5-крэтным объемом ацетона. Ацетоновый экстракт отделяют от биомассы и упаривают на водяной бане в вакууме при 35-40°С до

полного удаления ацетона. Антибиотическое вещество экстрагируют из выпаренного остатка бутанолом, после отслаивания бутанольный экстракт отделяют от водного остатка и используют для извлечения антибиотика, водный остаток стерилизуют и используют в.качестве добавки в питательные среды для АМС, ПКБ и ПМБ.

Контролем служат исходные питательные среды.

Сравнительные данные по использованию предложенного способа и известного представлены в табл. 8.

Как видно из табл. 8. добавление водного остатка ацетоновой вытяжки из мицелия

продуцента розеофунгина повышает выход биомассы по сравнению с исходной средой; и средой, приготовленной на основе фугатов.

Формула изобретен и я

Способ культивирования молочнокислых или пропионовокислых бактерий на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, минеральные соли и отходы производства, отличающийся тем,

что, с целью повышения выхода биомассы, из отходов производства используют отходы производства антибиотика розеофунгина в виде водного остатка ацетоновой вытяжки из мицелия Actinom.yces

roseoflavus var. roseofungln i в количестве 1-2об.%.

Таблица 1

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается способа культивирования молочнокислых и пропионовокислых бактерий, используемых для приготовления заквасок для силосования кормов. Целью изобретения является повышение выхода биомассы бактерий. Способ заключается в том, что готовят питательную среду, содержащую источники углерода, азота, минеральные соли и 1-2% водного остатка ацетоновой вытяжки из ми- целия Actlnomyces roseoflavus var. roseofungini, являющегося отходом производства розеофунгина. засевают среду одним из штаммов молочнокислых бактерий АМС или ПМБ, или пропионовокислых ПКБ и выращивают их. Введение в состав среды отхода производства розеофунгина повышает титр клеток бактерий АМС с 1,3-2,2-109 до 3,5-4,8109, ПКБ с 1,3-1. до 3,0-5,9 109,ПМБ с 1,0-1,1-Ю9до 1,6-2,М09.8табл. 5 Ё

Выращивание культуры AM С на питательной среде с добавками водного остатка аце- .тоновой вытяжки из мицелия

Выращивание культуры ПКБ на питательной среде с добавками водного остатка ацетоновой вытяжки из мицелия

. Т а б л и ц а 3

Выращивание культуры ПМБ на питательной среде с добавками водного остатка ацетоновой вытяжки из мицелия.

Та бл и ц а 2

/ . .- Т а блица 4

Состав сред для культивирования молочнокислых и пропионовокислых бактерий

Добавки к фугату ПМБ

Добавки к фугату ПКБ

Добавки к фугатам АМС

Таблица 5

Таблица 6

Т а б л и ц а 7

1Таблица 8

Титр клеток молочнокислых и пропионовокислых бактерий при выращивании на разных по составу средах