Способ определения устойчивости терморегуляционной системы экспериментального животного Советский патент 1992 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к физиологии.

Цель изобретения - повышение точности определения.

Способ осуществляют следующим образом.

Получают ацетоновый порошок из мозга животного - донора. Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживают в жидком азоте сразу же после убоя животного. В лаборатории навеску ткани мозга 20 г заливают 200 мл обезвоженного охлажденного ацетона (не выше-20°С). Растирают кусочки ткани в предварительно охлажденной ступке, затем взвесь переносят в стакан размельчителя тканей. После гомогенизации центрифугируют 10 мин при 2000д. Ацетон сливают. Осадок снова заливают ацетоном. Гомогенизируют. Эту операцию повторяют 3 раза. Осадок после последнего осаждения высушивают в вакууме.

Навеску ацетонового порошка заливают охлажденной (до 0°С) 1 молярной уксусной кислотой в соотношении 1:20, т.е. на 1 г порошка берут 20 мл раствора уксусной кислоты. Затем гомогенизируют на холоде в тонком гомогенизаторе, после этого прогревают в кипящей бане в течение 30 мин. Охлаждают, Гомогенат центрифугируют при 40000д в течение 60 мин. Супернатант переносят в ультрафильтрационную ячейку с фильтром, отсекающим соединения с массой выше . Затем фильтрат пропускают через фильтр, отсекающий соединения с массой ниже 1,0 кД. Осадок смывают с последнего фильтра бидистиллированной водой. Высушивают на лиофилизаторе, расфасовывают и хранят при -20°С без доступа воздуха. В итоге получают пептидную фракцию мозга от 1 до 10 кД.

Определяют температуру тела мышей путем введения в ободочную кишку на глубину 3 см ректального датчика электротермометра.

Препарат вводят внутрибрюшинной инъекцией, так как это наиболее простой и всем доступный способ. Шприц, - объемом 1 мл, инъекционные иглы наименьшего размера. Доза препарата 0,5-1,0 мг/л. Определяют температуру через 30 мин после введения и в случае, если она по сравнению с исходной снижается менее чем на 10% определяют устойчивость терморегуляционной системы.

Пример 1. Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживали в жидком азоте сразу же после убоя животного. В лаборатории навеску ткани мозга 20 г заливали 200 мл обезвоженного ацетона (охлажденного не выше -20°С). Растирали кусочки ткани в предварительно охлажденной ступке, затем взвесь переносили в стакан размельчителя тканей. После гомогенизации центрифугировали 10 мин при 2000д. Ацетон сливали. Осадок снова заливали ацетоном. Гомогенизировали. Эту операцию повторяли 3 раза. Осадок после последнего осаждения высушивали в вакууме.

Навеску ацетонового порошка заливали охлажденной (до 0°С) 1 молярной уксусной кислотой в соотношении 1:20, т.е. на 1 г порошка брали 20 мл раствора уксусной кислоты. Затем гомогенизировали на холоде в тонком гомогенизаторе, после этого прогревали в кипящей бане в течение 30 мин. Охлаждали Гомогенат центрифугировали при 40000д в течение 60 мин. Супернатант переносили в ультрафильтрационную ячейку с фильтром, отсекающим соединения с массой выше 10 кД. Затем фильтрат пропускали через фильтр, отсекающий соединения с массой ниже 1,0 кД. Осадок смывали с последнего фильтра бидистиллированной водой. Высушивали на лиофилизаторе и хранили при -20°С без доступа воздуха.

Температура в ободочной кишке составила 38,7°С. Затем животному ввели 0,5 мг/кг экстракта внутрибрюшйнно. Через 30 мин после введения температура животного составила 35,1°С, что на 9% ниже исходной. У животного определили устойчивость терморегуляционной системы. Подопытное животное помещали в камеру, имеющую свободное сообщение с атмосферой. Через камеру создавали поток воздуха с помощью насоса, создавающего разрежение. Скорость потока воздуха контролировали по газовому счетчику. Пробы воздуха проходящего через камеру с животным отбирали аспираторами, а сам анализ проводили на химическом анализаторе. Измерение потребления кислорода проводили при следующих температурах внутри камеры: 5; 10; 15; 20°С. При каждой температуре животное выдерживали в течение 30 мин. Затем отбирали пробы воздуха. С каждым животным проводили трехкратное измерение и брали среднее.

П р и м е р 2, Источником материала

служила ткань головного мозга холодоадаптированного животного (якутской лошади). Материал собирают во время зимнего забоя лошадей. Сразу же после убоя лошади ткань мозга замораживают в жидком азоте.

Навеску ткани заливают охлажденным обезвоженным ацетоном (до -20°С). Гомогенизируют 3-5 раз в соотношении 10-20 мл ацетона на 1 г ткани. Гомогенат центрифугируют 10 мин при 2000д, осадок высушивают под вакуумом. Порошок заливают 1 М СИзСООН в соотношении 1:20. Гомогенизируют на холоде, центрифугируют при 40000д в течение 1 ч. Супернатант переносят в ультрафильтрационную ячейку с фильтром, отсекающим соединения с массой выше 10000 Д. Затем фильтрат пропускают через фильтр, отсекающий соединения с массой ниже 1000 Д. Смывают фракцию с последнего фильтра и лиофилизуют. Хранят

в холоде без доступа возду);са.

Перед опытом экстракт разводится в бидистиллированной воде в расчете 0,5-1,0 мг/г массы животного. У подопытного животного измеряют температуру ядра тела электротермометром. После внутрибрюшинной инъекции 1,0 мг/кг экстракта температуру тела измеряют через 30 мин. Манипуляции с животным проводят при стандартных температурах, а именно 18-22°С. Через 30 мин

температура понизилась по сравнению с исходной на 21 %. Определяется отсутствие устойчивости терморегуляционной системы животного. Использование способа непрямой колориметрии с оценкой зависимости

уровня потребления кислорода от температуры среды подтвердило полученные результаты.

Применение способа позволяет повысить по сравнению с прототипом точность

определения устойчивости терморегуляционной системы животного.

Формула изобретения Способ определения устойчивости терморегуляционной системы экспериментального животного, включающий оценку его температуры, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, температуру измеряют до и через 30 мин после введения экстракта мозга холодоа5,17129566

даптированного животного 1-10 кД в дозе температура после введения экстракта сни0,5-1,0 мг/г, а устойчивость терморегуляци- жается по сравнению с исходной менее, чем онной системы определяют в случае, если на 10%.

Изобретение относится к медицине и может применяться при определении устойчивости терморегуляционной системы животного. Цель - повышение точности определения. Ткань мозга холодоадаптиро- ванного животного замораживают в жидком азоте, готовят экстракт мозга 1-10 кД. У подопытного животного измеряют температуру "ядра" тела. Далее с животным проводят манипуляции при 18-22°С, предварительно введя зкстракт в дозе 0,5-1,0 мг/г Устойчивость терморегуляционной системы животного определяют в случае, если температура после выделения экстракта снижается менее, чем на 10%.