Способ консервирования микроорганизмов Советский патент 1992 года по МПК C12N1/04 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам хранения микроорганизмов в обезвоженном состоянии, и может быть использовано в микробиологической промышленности.

Поставленная цель достигается тем, что консервирование микроорганизмов осуществляют путем суспендирования культуры в защитной среде с последующим контактно- сорбционным обезвоживанием и досушиванием при комнатной температуре, причем в качестве защитной среды используют смесь, содержащую, мас.%: сахароза 25-30: глутамат натрия 2,5-3; тиомочевина 0,8-1,2- пептон 0,8-1,3 и дистиллированную воду, контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта проводят охлажденной до -18-(-22)°С смолой КБ-4П-2 при массовом соотношении 6,5-7,5:1 соответственно, а досушивание осуществляют в течение 65- 72ч.

П р и м е р 1. Защитную среду следующего состава, мас.%: сахароза 25: глутамат

натрия 2,5; тиомочевина 0,8; пептон 0,8, готовят путем последовательного растворения компонентов в дистиллированной воде (рН 7.2) и стерилизуют автоклавированием при 120°С в течение 20 мин. Расфасованный во флаконы обезвоженный при 105 ±2°С катионит КБ-4П-2 (№+-форма) охлаждают до -18°С.

Используемые культуры микроорганизмов, выросшие на соответствующей плотной питательной среде преимущественно до стационарной фазы роста, смывают 5,0- сантиметровой средой. Стабилизированную культуру вносят по 0,2 CMJ во флаконы, содержащие сорбент в соотношении 1:6,5. Флаконы после внесения культуры выдерживают при температуре внешней среды (20 ± 2)°С в течение 65 ч. Подготовку контактно-обезвоженных культур проводят в стерильных условиях. Через два года хранения контактно-обезвоженные препараты регид- ратируют 15,0 см3 охлажденного до 4°С бульоном на основе серно-кислотного гидс/

С

XI OJ

о со

00

ролизата рыбокостной муки. Высевом десятикратных разведений регидратированной культуры определяют процент жизнеспособных клеток.

В таблице показано влияние различных соотношений катионита КБ-4П-2 (Na -форма) и суспензий клеток на их выживаемость при хранении в течение двух лет.

Из данных, представленных в таблице, видно, что изменение соотношения суспензии клеток и сорбента влаги приводит к ухудшению качества сушки и снижению выживаемости микроорганизмов.

П р и м е р 2. Процесс контактно-сорб- ционного обезвоживания культуры вакцинного штамма туляремийного микроба осуществляют аналогично примеру 1, но в опытах используют защитную среду следующего состава, мас.%: сахароза 30: тлута- мат натрия 3,0; тиомочевина 1,2: пептон 1,3; вода остальное, и варьируют температурой сорбента от плюс 22 ±3°С до минус 30 ±2°С.

Суспению клеток вносят на охлажденную до -22°С смолу КБ-4П-2 лри массовом соотношении 1:7,5, и для досушивания выдерживают при комнатной температуре 72 ч.

Результаты опытов свидетельствуют о том, что использование предлагаемого состава защитной среды и температуры охлаждения сорбента до минус 20 ± 2°С существенно повышает выживаемость клеток в процессе контактногсорбционного обезвоживания.

П р и м е р 3. Культуру S.cuteritidis var.lssatehenko выращивают на плотной питательной среде в чашках Петри до стационарной фазы. Смывают 5,0 см3 защитной среды, содержащей, мас.%: сахароза 30,0: глутамат натрия 3,0; тиомочевина 1,2; пептон 1,3, вода остальное. Высушенный до постоянного веса катионит КБ-4П-2 (Na+- форма) расфасовывают по 1,4 г в пеницил- линовые флаконы. Флаконы с сорбентом стерилизуют и досушивают в течение четырех часов в сухожаровом шкафу при (110 ±2)°С. Силикагель, расфасованный по 4,0 г в пенициллиновые флаконы, обезвоживают при 180°С в течение 2 ч. Перед использованием флаконы с сорбентом влаги охлаждают до температуры минус (20 ± 2)°С в камере бытового холодильника. Стерильной пипеткой стабилизированную защитной средой культуру клеток по 0,2 см вносят на поверхность сорбента.

Флаконы закрывают резиновыми пробками и фиксируют путем закатки алюминиевыми колпачками.

Для досушивания клеток до оптималь- ной остаточной влажности образцы препаратов выдерживают при комнатной температуре в течение Зсут, Препараты хранят при температуре 4 или -20°С. Через 24 мес хранения проводят контроль жизнеспо- 0 собности культур. Для этого препарат ре- гидратируют 15,0 см3 мясопептонного бульона и встряхивают в течение 1-2 мин, поле чего делают посев десорбцированных клеток на плотную питательную среду в 5 чашках Петри. После инкубирования подсчитывают число колоний.Через 24 мес хранения выживаемость культур, хранящихся на катионите КБ-4П-2 (№+-форма) составляет 16,8% живых микробных клеток для температуры -20°С, и 9,3% - для температуры 4-6°С. Выживаемость культур, хранящихся на силикагеле (известный способ, при температуре-20°С менее 1 %, а при температуре 4-б°С жизнеспособность культур потеряна.

Преимущество предлагаемого способа заключается в том. что она обеспечивает высокий уровень жизнеспособности культур в процессе хранения и позволяет хранить штаммы с различными плазмидами, так как в-процессе хранения стабильно сохраняются селективные маркеры устойчивости к антибиотикам. Кроме того, предлагаемый способ по сравнению с известными характеризуется простотой и доступностью осуществления, расширением спектра микробных культур, подлежащих хранению.

Формула изобретения

Способ консервирования микроорганизмов путем суспендирования культуры в защитной среде с последующим контактно- сорбционным обезвоживанием и досушиванием при комнатной температуре, отличающийся тем, что, с целью повышения сохраняемости микроорганизмов, в качестве защитной среды используют смесь, содержащую. мас.%: сахароза 25-30; глутамат натрия 2,5-3; тиомочевина 0,8-1,2; пептон 0,8-1.3 и дистиллированная вода, контакт- но-сорбционное обезвоживание целевого продукта проводят охлажденной до -18- (-22)°С смолой КБ-4П-2 при массовом соотношении 6,5-7,5:1 соответственно, а 5 досушивание осуществляют в течение 65- 72ч.

0

5

0

5

0

5

0

Сущность изобретения: культуру микроорганизмов суспендируют в защитной среде, содержащей, мас.%: сахароза 25-30; глутамат натрия 2,5-3; тиомочевина 0,8-1,2; пептон 0,8-1,3; дистиллированная вода. Взвесь смешивают в массовом соотношении 6,5-7,5:1 с охлажденной до -18-(-22)°С смолой КБ-4П-2, досушивают в течение 65- 72 ч. В процессе хранения повышается жизнеспособность культур.1 табл.