Способ приготовления сухого бактериального препарата для производства молочнокислых продуктов Советский патент 1992 года по МПК A23C9/12 

сл

с

Область использования: в молочной промышленности, в частности в микробиологической, при приготовлении сухого бактериального препарата для производства молочно-кислых продуктов. Сущность изобретения: культ ивируют Lactobaclllus acldophilus 317/402, замораживают в течение 2-2.5 ч при (-40Н 50)°С, высушивают в течение 22-24 ч при конечной температуре 37-39°С. 9 табл.

Изобретение относится к микробиологической и пищевой промышленности и может быть использовано в медицине при лечении дисбактериозов и других желудочно-кишечных заболеваний, а также при производстве кисло-молочных продуктов.

Известны различные сухие бактериальные закваски и способы их приготовления с использованием ацидофильных молочнокислых бактерий.

Влажность известных сухих заквасок 10% и ниже, их можно хранить 5-6 мес. при температуре не выше 10°С.

Известный стандартный сухой препарат лактобактерин выпускается Горько- вским заводом в виде таблеток и широко применяется для профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. В состав сухого

лактобактерина входят штаммы молочнокислых бактерий L. ferment 90Г-54 и L. plantarum 8R-A3. лактобактерин готовится из микробной суспензии путем лиофи- лизации из замороженного состояния. Замораживание осуществляется при -40°С в течение 5-6 ч. Конечная температура высушивания 42°С, Известный препарат разработан в Горьковском НИИЭМ (Тарасова, 1969) и в Пермском НИИВС (Красик, 1972). Срок годности препарата 6-12 мес. Количество живых клеток в 1 г препарата через 6 мес. хранения составляет 3,3-3,5 млн., а через 12 мес. 2,1-2,2 млн.

Таким образом, лактобактерин не подлежит длительному хранению, причем активность клеток в результате хранения

V

4 СЛ

о

Ю

о

CJ

значительно падает и снижаются антагонистические свойства препарата.

Цель изобретения - удлинение срока хранения и повышение качества препарата.

Сущность предлагаемого способа заключается в следующем. Для приготовления сухого препарата молоко заквашивают молочно-кислыми бактериями L. acldophllus шт. 317/402 Наринэ. замораживают жидкий препарат в течение 2-2,5 ч при ()0С и высушивают в течение 22-24 ч при конечной температуре 37-39°С.

Пример 1. Приготовление жидкого препарата. Молоко жирностью 3,0±0,2% стерилизуют 15 мин при 1 эти, остужают до 39°С. заквашивают 1,5-2%-ной свежей маточной закваской чистых культур молочнокислых бактерий L. acldophllus и выдерживают в термостате при 37°С в течение 6-7 ч. Сквашенное молоко выдерживают 2-3 ч в холодильнике при 5-8°С.

Молочно-кислые бактерии L. acldophllus шт. 317/402 по морфологическим, биохимическим и культуральным свойствам отличаются от известных L. acldophllus. Это граммположительные бактерии, обладающие высокой ферментативной активностью, устойчивые к высоким концентрациям фенола, антибиотическим и химиотерапевтическим препаратам, восстанавливающие молоко, содержащее до 0,3% метиленовой сини, обладающие высокими антимикробными, высоковитаминсин- тезирующими и кислотообразующими способностями. Высокоактивные ацидофильные палочки обладают высокими лечебно-профилактическимииорганолептическими свойствами.

Пример 2. Приготовление сухого препарата. Жидкую закваску перемешивают, в стерильных условиях разливают в стеклянные склянки, которые закрывают резиновыми пробками, а сверху металлическими колпачками для соблюдения стерильности, и замораживают при -50°С в течение 2-2,5 ч. После замораживания снимают металлические колпачки и резиновые пробки, склянки закрывают стерильными ватными пробками и под вакуумом жидкий замороженный препарат высушивают в течение 22-24 ч при начальной температуре сушки -30°С и окончательной 37-39°С.

Влажность сухого препарата 2-2,5%, 1 г сухого препарата содержит 3-3,2 млрд. живых клеток. Сухой препарат хранится в холодильнике при 6-8°С. Срок хранения 2 года.

Обоснование технологических параметров получения сухого препарата приведено в табл. 1-4.

Влияние продолжительности замораживания жидкого препарата при температуре -50°С на выживаемость клеток в сухом препарате показано в табл. 1.

Из данных табл. 1 видно, что оптимальное время замораживания 2-2,5 ч. Время замораживания, указанное в прототипе, губительно влияет на выживаемость клеток. Влияние температуры замораживания

0 на выживаемость клеток в сухом препарате (продолжительность замораживания 2 ч) показано в табл. 2.

Из данных табл. 2 видно, что оптимальная температура замораживания -50°С.

5 Влияние продолжительности высушивания на антимикробные свойства и выживаемость клеток сухого препарата (окончательная температура высушивания 37-39°С)показано в табл. 3.

Как видно из приведенных данных, оп0 тимальное время высушивания 22-24 ч.

Влияние окончательной температуры

высушивания на влажность и количество

клеток сухого препарата показано в табл. 4.

Из данных табл 4 видно, что оптималь5 ная температура высушивания 37-39°С, когда выживаемость клеток максимальная. При конечной температуре высушивания, указанной в прототипе, наблюдается значительная гибель клеток.

0 Исследование сухого препарата.

Для определения качества сухого препарата изучались следующие основные при- знаки: бактериальная чистота (по микроскопическому препарату); продолжи5 тельность свертывания молока в зависимости от количества сухого препарата и сроков его хранения; характер сгустка; кислотность сквашиваемого молока; количество живых клеток; антимикробные свойства.

0 При изучении микроскопической картины сухого препарата в поле зрения обнаруживались короткие и длинные палочки молочно-кислых бактерий L acldophllus. Повторные микроорганизмы не обнаружены.

5 В табл. 5 приводятся данные по свертыванию молока, заквашенного сухой культурой при разных сроках хранения.

В результате заквашивания во всех вариантах получается однородный сгусток с

50 тягучей консистенцией, с приятным кисломолочным вкусом и ароматом.

Кислотность сгустка, полученного в результате сквашивания молока сухой культурой, колеблется в пределах от 110. до 180°Т

5 в зависимости от свежести сухого препарата. Так, сухая закваска сразу после изготовления свертывает молоко за 8-9 ч, а кислотность сгустка составляет 110-120°Т.

Сухая культура через 2 года хранения свертывает молоко в течение 22-24 ч и поднимает кислотность до 180°Т. С возрастом сухая закваска становится менее активной, в результате чего продолжительность свертывания увеличивается, а кислотность сгустка повышается.

Одним из основных признаков качества сухого препарата является количество живых клеток в нем. Количество живых клеток в 1 г препарата при хранении в течение 0,3, 6,9,12 и 24 мес. составляет 3,0-3,2; 2,4-2,5: 2,1-2,2; 1.9-2.0; 1,7-1,8 и 1.0-1,1 млрд. соответственно.

Антимикробная активность сухого препарата по отношению к тест-культурам Е. coll, Staph. aureus. Klebslella, Salmonella typhlminlum весьма высока (см. табл. 6).

Сравнительное изучение всех основных признаков известного (лактобактерин) и предложенного препаратов показывает, что количество живых клеток в лактобактерине значительно ниже, чем в предложенном сухом препарате (см. табл. 7).

Кроме того, выживаемость клеток в предложенном препарате значительно выше (почти в 600-800 раз), чем в известном.

При исследовании антимикробных свойств известного и предложенного препаратов обнаружено, что лактобактерин по отношению к Staph. aureus антимикробных свойств не проявляет, а по отношению к Е -coll значительно менее активен чем предложенный препарат.

В табл. 8 приведены полученные результаты.

Испытания жидкого и сухого препарата Наринэ при лечении дисбактериоза кишечника у лиц, подвергшихся воздействию малых доз ионизирующей радиации, проводились на базе Института медицинской радиологии МЗ Армении.

Под наблюдением находились 74 мужчины с дисбактериозом кишечника, принимавших участие в тиквидации последствий аварии на ЧАЭС, в возрасте от 28 до 50 лет, постоянно проживающих на территории республики Армения, которые были распределены на три группы.

Iгруппа - 44 ликвидатора с дисбактериозом I и II степени, получавшие в качестве лечения кисло-молочный продукт Наринэ по 1,0-1,5 л в день за 4-6 приемов.

IIгруппа - 10 ликвидаторов с дисбактериозом I и II степени, получавшие 15-20 раз в сутки сухой лактобактерин производства Горьковского НИИЭМ МЗ РСФСР.

ill группа - 20 ликвидаторов с дисбактериозом I и II степени, получавшие сухую лиофилизированную микробную массу живых антагонистически активных молочнокислых бактерий штамма 317/402 Наринэ. Во флакон с сухой массой добавляют стакан кипяченой остуженной воды и перемешивают. Препарат принимают внутрь 4 раза по 5 5,0 г в сутки по назначению врача.

Изучение кишечной микрофлоры больных производили до и после лечения, а также в процессе лечения на 15- и 20-е сутки с учетом методических рекомендаций.

0 У обследованных больных до начала лечения были выявлены следующие изменения в кишечной микрофлоре: отсутствие анаэробной микрофлоры бифидо- и лакто- бактерий (менее 10 в 1 г кала) в 100% слу5 чаев, уменьшение количества кишечных палочек до 104-103 у 39 больных (52,7%), увеличение условно-патогенной микрофлоры, в частности энтеробактерий, у 30 больных (40,5%), патогенного стафилококка у 32

0 больных (43,2%). Из энтеробактерий высеивались энтеробактер, клебсиелла, лактозо- отрицательные и гемолитические эшерихии. В группе I к концу лечения в 70,45% (31 человек) случаев наблюдалась нормализа5 ция в составе микрофлоры. У 16 (36,4%) больных Дг перешел в Дч. При этом отмечено уменьшение концентрации условно-патогенной микрофлоры (клебсиелла, энтеробактер, лактозоотрицательные и ге0 молитические эшерихии) до 10 -10 и увеличение концентрации полноценных кишечных палочек. Восстановление количества бифидо- и лактобактерий не отмечалось,

5 Как показали исследования, в подавляющем большинстве случаев коррекция дисбактериоза с помощью кисло-молочного продукта Наринэ достигалась в течение 15- 20 дней. Так, у 23 (52.2%) больных с Дт

0 положительный эффект нас гупил на 15-20-й день, а у 16 (36,3%) больных, имевших Д2, - на 25-30-й день.

У подавляющего большинства больных положительные изменения в состоянии ки5 шечной микрофлоры и коррекции дисбакте- риозов совпадали с положительной динамикой клинических данных. У пяти (11,3 %) больных с Д1 степень дисбактериоза в процессе лечения не изменилась.

0 В группе II у семи (70%) больных было выявлено Д1, а у трех (30%) - Д2. Положительная динамика у больных этой группы отмечена на 30-е сутки, у трех(30%) больных с Д1 и у одного (10%) больного с Д2. У остал ь5 ных шести (60%) больных коррекция не наблюдалась.

Таким образом, кисло-молочный продукт Наринэ восстанавливает анаэробную защитную флору (бифидо- и лактобактерий) в укороченные сроки, подавляет рост энтеробактерий и патогенного стафилококка, повышает активность нормальной кишечной палочки.

Основываясь на положительном эффекте воздействия кисло-молочного продукта Наринэ на микрофлору кишечника у лиц, подвергшихся воздействию малых доз ионизирующей радиации, задались целью получить лиофилизированный препарат данного продукта и изучить его корректирующие свойства.

В группе III у 10 (50%) больных с Д2 на 15-й день исследования наблюдалось уменьшение условно-патогенной микро- Флоры, в частности протеуса мирабилис, эн- теробактера, клебсиеллы, до 103-10 , увеличение числа полноценных кишечных палочек до 105-106, но восстановления би- фидо- и лактобактерий йе отмечалось, т.е. Да перешел в Дч. У этих больных коррекция дисбактериоза выявлена на 20-й день исследования. У восьми (40%) больных с Д1 положительный эффект наступил на 15-20-й день, а у двух (10%) больных с Д1 степень дисбактериоза в процессе лечения не изменилась. У большинства больных положительные изменения в состоянии кишечной микрофлоры и коррекция дисбактериозов совпадали с положительной динамикой клинических испытаний.

Таким образом, на микрофлору кишечника лиц, подвергшихся воздействию малых доз ионизирующей радиации, в

одинаковой степени положительно воздействуют на кисло-молочный продукт Наринэ, так и его лиофилизированный препарат (см. табл. 9).

При сравнительном изучении молочнокислых бактерий штамм 317/402 и лактобак- терина установлена эффективность штамма для коррекции дисбиотических изменений в микрофлоре кишечника. Срок коррекции

дисбактериоза с помощью молочно-кислых бактерий штамма 317/402 зависел от степени тяжести дисбиотических изменений.

Предлагаемый сухой препарат может храниться до двух лет, по сравнению с лактебактерином он обладает более высокими антимикробными свойствами, при его использовании выживаемость клеток лучше и молоко свертывается быстрее.

Формула изобретения

Способ приготовления сухого бактериального препарата для производства молочно-кислых продуктов, предусматривающий культивирование молочно-кислых бактерий

Lactobaclllus acldophilus, замораживание и высушивание, отличающийся тем, что, с целью удлинения срока хранения и повышения качества препарата из Lactobaclllus acidophllus, используют

штамм 317/402, замораживание осуществляют в течение 2-2.5 ч при (-40)-(50)0С, высушивание проводят в течение 22-24 ч при конечной температуре 37-39°С.

35

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5

Таблица 6

Таблица 7

Примечание -10 (степень разве/уния)

Редактор М.Бандура

Техред М.Моргентал

Заказ 2203ТиражПодписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Таблица 8

Таблица 9

Корректор Э.Лончакова