СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И САНАЦИИ РЯДА ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У НОВОРОЖДЕННЫХ И ИХ МАТЕРЕЙ Российский патент 1997 года по МПК A23C9/12 A61K35/74 

Изобретение относится к способам получения бактериального препарата для лечения и санации носителей золотистых стафилококков, послеродового мастита, обработки молочных желез, трещин сосков молочных желез, пупочного ложа новорожденных, заживления ран, санации половых путей, гнойно-септических заболеваний у новорожденных и их матерей.

Известен способ санации профилактики и лечения беременных рожениц, гинекологических больных (омфалитом, вульвовагенитом), парадонта, санации носа, уретры, обработки молочных желез и т.д. с использованием кисломолочного продукта "Наринэ", приготовленного на чистых культурах молочнокислых бактерий Lactobacillus acidophilus 317/402, который обладает выраженной антогонистической активностью, благотворно влияет на бактериальную флору при перечисленных заболеваниях, способствует исчезновению патогенной микрофлоры, физиологически восстанавливает естественную среду с нормализацией биоценоза [1]
Недостатком способа является невозможность длительного хранения продукта в холодильнике, т.к. происходит увеличение кислотности, следствием чего является уничтожение клеток молочнокислых бактерий.

Известен способ получения бактериального препарата на основе штамма 317/402, заключающийся в механической фильтрации продукта "Наринэ" через фильтр Зейтца и дополнительном автоклавировании при давлении 0,5 атм в течение 15 мин для обеспечения стерильности.

Полученный препарат по своей антибиотической активности не уступает нативному продукту и позволяет обеспечить достаточный дренаж гнойной раны, снизить обсемененность пупочного ложа новорожденных стафилококками и заболеваемость омфалитом и пупочным сепсисом [2]
Наиболее близким к предлагаемому является способ получения бактериального препарата для санации новорожденных и их матерей, согласно которому сквашенное молоко или молочную сыворотку кислотностью 200^oT с использованием штамма Lactobacillus acidophilus 317/402 "Наринэ" последовательно фильтруют через вату, бумажный фильтр и фильтр Зейтца до получения безмикробного фильтрата "Наринэ-Ф". Фильтрат стерилизуют, высушивают и растворяют в изотоническом растворе [3]
Однако этот способ увеличивает концентрацию антибиотических веществ в препарате механически, т.е. после сублимационного высушивания и дальнейшего растворения в изотоническом растворе концентрацию антибиотических веществ можно увеличить в 10 и более раз.

Задача изобретения повышение эффективности антибактериального воздействия молочнокислых бактерий, получение более дешевого микробного препарата, не вызывающего каких-либо отрицательных последствий, и возможность его применения в больничных и домашних условиях благодаря простоте и доступности его получения.

Сущность изобретения заключается в том, что полученный препарат представляет собой безмикробный фильтрат штаммов Lactobacillus acidophilus 317/402 "Наринэ" или Lactobacillus mazuni N 2 "Каринэ", или Lactobacillus acidophilus 4 аг/8 кислотностью 220^oC или 180^oT.

Для получения препарата в пастеризованное молоко или молочную сыворотку, подготовленные к заквашиванию, вносят пепсин, приготовленный на цитратно-солянокислом буфере, pH 5,0-5,2, затем молоко заквашивают закваской штамма молочнокислых бактерий из расчета 2% от общего количества молока или молочной сыворотки, инкубируют в термостате при 36-37^oC в течение 16 ч для молока и 28 ч для сыворотки. По истечении указанных сроков инкубации определяют кислотность полученного сгустка, которая должна быть в пределах 220 и 180^o Тернера соответственно. Затем сквашенное молоко или сброженная молочная сыворотка автоклавируются при 1 атм в течение 15 мин с последующей фильтрацией в начале через вату, затем через бумажный фильтр. Полученный фильтрат, освобожденный от казеина, снова фильтруется через фильтр Зейтца для полного освобождения от белков и получения безмикробного фильтрата. Безмикробный фильтрат разливают в пенициллиновые флаконы или сокслетовские бутылки, закупоривают и ставят на стерилизацию при 0,5 атм в течение 15-20 мин. В таком виде фильтрат может быть использован для лечения и санации носителей золотистых стафилококков, послеродовых маститов, обработки пупочного ложа новорожденных.

Обнаружение ингибирующих веществ приготовленного описанным выше методом фильтрата проводили по ГОСТ 23454-79. Сущность этого метода основана на восстановлении метиленового голубого при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам молочнокислых бактерий. При отсутствии в фильтрате ингибирующих веществ содержимое в пробирке белого цвета, а при наличии - голубого. При исследовании антимикробной активности фильтрата в отношении ряда патогенных микроорганизмов, как E.coli, Staph.aureus и др. зоны угнетения роста патогенных микроорганизмов были намного больше контроля. Контролем служил фильтрат, полученный без ферментативной и тепловой обработки.

Данные представлены в табл. 2. Таким образом, предложенный способ получения продуктов метаболизма молочнокислых бактерий позволил повысить антимикробную активность более, чем в 4-5 раза.

Необходимо отметить, что кислотность молока или сброженной сыворотки до и после фильтрации заметно изменяется (табл.3).

Для получения препарата целевого назначения необходимо строго обратить внимание на кислотность фильтрата (табл.3).

Пример 1. Стерилизованное (или пастеризованное) молоко разливают в 3 склянки, подогревают до 39^oC, в каждую склянку вносят по 0,00015% пепсина, приготовленного на цитратно-солянокислом буфере с pH 5,0-5,2, затем вносят закваску молочнокислых бактерий: в одну на штамме Lactobacillus acidophilus п. у. Ер 317/402 ("Наринэ"), в другую на штамме Lactobacillus acidophilus 4 аг/8, в третью на штамме Lactobacillus mazuni N 2 ("Каринэ") в количестве 2,0% от количества молока в склянке, сквашивание проводят в термостате при 36-37^oC в течение 16 ч до значения кислотности в полученных сгустках 220^o Тернера. Затем сквашенное молоко автоклавируют при 1 атм в течение 15 мин и полученный продукт фильтруют сначала через вату, затем через бумажный фильтр, затем через фильтр Зейтца для полного освобождения от белков. Полученный безмикробный фильтрат разливают в пенициллиновые флаконы, закупоривают и стерилизуют при 0,5 атм в течение 15-20 мин и таким образом получают готовый бактериальный препарат.

Антимикробные свойства полученных препаратов представлены в табл. 1.

Пример 2. Приготовление бактериального препарата проводят аналогично примеру 1, только вместо молока используют молочную сыворотку, а сквашивание проводят в течение 28 ч до кислотности в полученных сгустках 180^o Тернера.

Антимикробные свойства бактериальных препаратов на основе молочной сыворотки аналогичны антимикробным свойствам бактериальных препаратов на основе молока и представлены в табл.1.

Обоснование необходимости ферментативной и тепловой обработки, а также последовательной фильтрации продукта через вату, бумажный фильтр и фильтр Зейтца представлено в табл.2. Как видно из данных таблицы, только сочетание этих признаков обеспечивает повышение антимикробной активности бактериального препарата по сравнению с контролем (в 5 раз).

Предложенный препарат благодаря антагонистической активности молочнокислых бактерий благотворно влияет на бактериальную флору влагалища, ликвидирует дисбактериоз, восстанавливает биоценоз данного органа. Полученные данные опробированы в клинических условиях.

Препарат рекомендуют применять
а) для санации стафилококконосителей медицинского персонала и больных по 0,5 мл индивидуальной пипеткой в каждый носовой ход в течение 5 7 дней, 3 раза в день; эпидемиологически опасных стафилококконосителей необходимо санировать 5 6 раз в течение дня, в результате чего значительно снижается внутрибольничная заболеваемость;
б) для обработки пупочного ложа новорожденного после отпадания остатка пуповины:
при воспалительных изменениях кожи пупочного кольца или сосуда;
для быстрого сокращения пупочных ранок;
для профилактики и лечения гнойного омфалита, пупочного сепсиса.

После отпадания остатка пуповины стерильной глазной пипеткой препарат закапывают в пуповину 6 раз в день (при каждом пеленании новорожденного)
для обработки трещин сосков;
профилактики развития послеродового лактационного мастита.

Стерильная обработка сосков преследует цель прерывания путей передачи стафилококка и заселения им новорожденного после кормления, уничтожения очага инфекции, попавшей на сосок молочной железы матери из полости носа новорожденного, а также создания местной микробной невосприимчивости тканей.

Описанную процедуру рекомендуется начать с первого дня послеродового периода вне зависимости от вскармливания и проводить ежедневно в регламентированные часы (1 2 раз в сутки).

Использование: молочная промышленность, акушерство и гинекология для лечения и санации носителей золотистых стафилококков, послеродового мастита, обработки трещин сосков молочных желез, пупочного ложа новорожденных, заживления ран, санации половых путей, гнойно-септических заболеваний у новорожденных и их матерей, кольпитах и др. Сущность изобретения: получение бактериального препарата осуществляют с использованием закваски штаммов молочнокислых бактерий Lactobacillus acidophilus 317/402 "Наринэ" 4аг/8 или Lactobacillus mazuni N 2 "Каринэ". Для перевода связанных активных антимикробных веществ, образующихся в процессе молочнокислого брожения, в свободное состояние молочное сырье подвергают ферментативному гидролизу с помощью пепсина. Сквашенное молоко или сброженную молочную сыворотку кислотностью соответственно 220 и 180^o Тернера автоклавируют при 1 атм 15 мин с последующей фильтрацией через вату, затем через бумагу и фильтр Зейтца, разливают в флаконы, закупоривают и ставят на стерилизацию при 0,5 атм 15-20 мин. Антимикробная активность фильтрата в отношении ряда патогенных микроорганизмов повышается в 5 раз. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Способ получения бактериального препарата для лечения и санации ряда гнойно-септических заболеваний у новорожденных и их матерей, предусматривающий заквашивание подготовленных молока или молочной сыворотки закваской молочнокислых бактерий штаммов Lactobacillus acidophilus 317/402 "Наринэ", или Lactobacillus acidophilus 4аг/8, или Lactobacilus mazuni N 2 "Каринэ", сквашивание до заданной кислотности, последовательную фильтрацию через вату, бумажный фильтр и фильтр Зейтца до получения безмикробного фильтрата и стерилизацию, отличающийся тем, что перед заквашиванием в подготовленное молочное сырье вносят пепсин, приготовленный на цитратно-солянокислом буфере pН 5,0 5,2, сквашивание ведут до достижения кислотности 220^oТ или 180^oТ соответственно с последующим автоклавированием. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед стерилизацией продукта его расфасовывают.