Способ оздоровления селекционных сортов картофеля от заражения Х-вирусом Советский патент 1992 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений.

Известен способ селекции сортов картофеля на вирусоустойчивость, осуществляемый по определенной схеме, в основу которой положены следующие принципы: подбор форм для скрещивания, одна из которых несет признак крайней устойчивости (иммунности); искусственное инфицирование гибридов вирусами с последующей их диагностикой; отбор высокоустойчивых продуктивных форм

Данный способ включает длительный, процесс отбора и испытаний (до 9 лет), требует больших экономических затрат. Недостатком его является вероятность вырождения созданного сорта, т.е. снижение урожайности и товарных качеств клубней за счет потери вирусоустойчивости.

Наиболее близким к предлагаемому является способ борьбы с вирусным вырождением картофеля, заключающийся в освобождении посевного материала от вирусной инфекции, при котором верхушечную меристему вычленяют из этиолированных ростков, а у зеленых растений - из пазушных почек. Полученные изоляты высаживают на питательную среду с последующей пересадкой меристемы каждый на свежую среду до получения регенерантов. В течение 2-6 мес. меристемы регенерируют ростки, которые снимают и высаживают на новую питательную среду для ускорения и образования растений. Меристемные растения многократно проверяются на предXJ

.&ь

СЛ

сь

мет обнаружения вирусов. Безвирусные растения, размноженные в культуре In vitro из пробирок, пересаживают затем в питомники размножения для получения клубневого потомства.

Недостатки способа - быстрое повторное заражение оздоровленного материала вирусами, возможность утраты сортовых ха- рактеристик, повышенная чувствительность к грибным инфекциям.

Цель изобретения - повышение устойчивости селекционных сортов картофеля к заражению Х-вирусом.

Цель достигается тем, что культивируемый устойчивый сорт, проявляющий первые признаки вирусного вырождения, подвергают клоповой селекции, осуществляемой в несколько этапов.

1)Индивидуальная оценка клубней на присутствие вирусов с помощью иммуно- ферментного анализа, основанного на взаимодействии диагностической сыворотки (антител) с соком проверяемых растений, в котором вирусный белок является антигеном. О степени зараженности растения су- дят по окраске субстрата, обусловленной ферментативной активностью конъюгата (комплекса антитела с ферментом), преобразующего субстрат. На основе оценки проводится отбор безвирусного потомства (клонов).

2)Выращивание клонов и их оценка на вирусоустойчивость при искусственном заражении: натирании листьев соком растений, содержащих Х-вирус в высоком титре;

3)Повторный отбор и размножение устойчивых клонов на фоне тяжелой инфекции - прививок инфицированных вирусами черенков на здоровые растения;

4)Размножение и иммунодиагностика отселектированных вирусоустойчивых клонов.

В отличие от известного в предлагаемом способе не используется дорогостоящая, требующая специального оборудо- вания и недостаточно эффективная культура апикальных меристем. Способ позволяет длительное время поддерживать вирусоустойчивость исходного сорта на высоком уровне за счет выбраковки неустойчивых ге- нотипов.

Предлагаемый способ реализуют следующим образом.

Пример. Двести клубней сорта Адретта проращивали в сосудах при 20°С и в фазе 3-4 недельных проростков оценивали индивидуально методом иммунофермен- тного анализа на п| исутствие X, F, М, S-вирусов. Отобрали 70 безвирусных растений и сразу же заразили их методом натирания соком растения, пораженного ХВК. Спустя 3 недели, методом растения достигали стадии бутонизации, повторно оценивали их на присутствие ХВК (ЭЛИЗА-тест) и отбирали устойчивые. Клубневое потомство тринадцати отобранных устойчивых к ХВК растений (77 клубней) первого этапа отбора высаживали в сосуды и проращивали при 20°С. В фазе полных всходов (3-4 недельные растения) заражали ХВК прививкой с целью отбора иммунных форм. Через 3 недели проводили иммуноферментный анализ на присутствие вируса в подвое. Из 77 инфицированных растений только 2 были свободны от ХВК, что составило 3% от числа испытанных клонов.

Результаты сведены в табл. 1.

П р и м е р 2. Аналогичную процедуру двухэтапного отбора на устойчивость к ХВК применили к сорту Лошицкий, В отличие от первого примера, опыты на сорте Лошицкий проведены в полевых условиях. В первом цикле отбора при натирании листьев соком больного растения устойчивость к ХВК составила 88% (35 клонов из 40). Потомство отобранных устойчивых клонов заражали методом прививки в течение двух лет (тяжелая инфекция) с целью отбора иммунных форм. В первый год прививок выделили 32 устойчивых клона из 81, которые вновь высадили и в фазе полных всходов прививали повторно. Методом иммуноферментного анализа провели отбор безвирусных растений (иммунных). Средний уровень устойчивости отобранных клонов составил при заражении прививкой 79% с варьированием по семьям от 100 до 66%. Всего было выделено 257 иммунных клонов.

Результаты представлены в табл,1, ПримерЗ. Сто клубней сорта Сафир выращивали в поле и 3-4 недельные проростки инфицировали соком растения, больного ХВК. Методом иммуноферментного анализа оценивали индивидуально каждое растение. Ни в одном из испытанных клонов Х-вирус не обнаружен, Клубневое потомство анализируемых растений Инфицировали прививкой в течение двух лет, после чего оценивали методом иммуноферментного анализа на присутствие ХВК. Все растения испытанных клонов были свободны от ви русных частиц, т.е. были иммунными (табг

1).

Испытания на урожайность отобранны контрастных по устойчивости клонов расте ний сорта Лошицкий проведены в течение 1989 1990 гг. в полевых условиях на делян ках размером 12.5 м2 в четырехкратной по вторносги при площади питания 70x70 см.

Данные представлены в табл. 2. из которой видно, что двухэтапный отбор на ви- русоустойчивость приводит к повышению продуктивности устойчивых клонов на 30% по сравнению с поражаемыми клонами.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повышать уровень устойчивости районированных сортов, фиксировать наступление вирусного вырождения сорта, повышать продуктивность оздоровленного сорта.

Формула изобретения Способ оздоровления селекционных сортов картофеля от заражения Х-вирусом,

0

5

предусматривающий получение свободных от вирусов и устойчивых к заражению растений и последующее их размножение, о т- личающиися тем, что, с целью повышения устойчивости сортов к заражению, свободные от вирусов растения получают поэтапной кленовой селекцией, включающей предварительный отбор безвирусных клонов методом иммуноферментного анализа, искусственное их заражение путем натирания листьев соком зараженных Х-вирусом растений, отбор непораженных клонов, повторное заражение путем прививки зараженных X-enpvcoM черенков и повторный отбор непораженных растений,

Использование сельское хозяйство, фитопатология, картофелеводство, семеноводство Сущность изобретения: свободные от вирусов растения, устойчивые к заражению, получают путем поэтапной клоновой селекции, предусматривающей предварительный отбор безвирусных клонов методом имму- ноферментного анализа, искусственное их заражение путем натирания листьев сокогл растений, зараженных Х-вирусом, отбор непораженных клонов, повторное заражение путем прививки зараженных Х-вирусом черенков и повторный отбор непораженных растений После этого полученные растения размножают 2 табл I - сл

Тэбли ц$1

Таблица 2