Способ определения устойчивости растений картофеля к вирусам мозаичной группы Советский патент 1984 года по МПК A01G7/00 

со Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений при выведении вирусоустойчивых сортов картофеля. Известен способ определения .j/стой чивости растений картофеля к вирусам мозаичной группы, который предусматривает искусственное заражение расте ния путем его выращивания на искусственно созданном инфекционном фоне в полевых условиях с последующим составлением суждения о его вирусоустойчивости по результатам визуальн го, серологического, индикаторного и электронно-микроскопического ана-. лиза сока его листьев 1 J. Однако известный способ не позвол ет пол; чить достоверную информацию с вирусоустойчивости растений каргофеля, так как в aнaлизиpye ryю пробу сока не.всегда попадают имеющиеся S исследуемом зараженном растении виру ные частицы. Кроме того, подвергаемая анализу усредненная проба сока может быть составлена из нескольких смешанных объемов сока, лишь один из к-оторых содерлсит вирусные частиць, концентрация которых резко падает в итоговой пробе, и поэтому при анал зе вирусные частицы могут быть не об нар ужены. Цель изобретения - повысить досто верность способа. Цель достигается тем, что-согласно способу определения устойчивости растений картофеля, к вирусам мозаичной группы, включающему искусственное заражение растения и последующий элeктpoннo- икpocкoпичecкий анализ е.го элементов, анализируют срезы листа и к вирусоустойчивым относят только те растения, в клетках которы сохраняется целостность мембран мито хондрий и хлоропластов. Пример I. Заражение растени картофеля в теплице осуществляли механической инокуляцией сока больных растений в период появления -всходов изучаемых растений. Ткань листа зара женного растения фиксировали в 6,5%ном растворе глютаральдегида о постфиксацией 2%-ным раствором четырахокиси осмия, заключали в эпоксидную смолу по общепринятым методикам.Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме, контрастировали 2%-ным раствором уранйлацетата и цитратом свинца. Срезы просматривали под элек тронным микроскопом. 1 90 Согласно известному способу 1 анализировал сок зараженных растений. Пример 2, Лри анализе ере зов листа зараженного растения (сорт Лошицкий) наблюдали следующую картину: много вирусных частиц и включений, нарушены- структуры (расширены каналы эндоплазматического ретикулума, появляется большое количество лизосом, цитосогрессом, наблюдается увеличение слоя цитоплазмы за счет скопления вирусных частиц), однако митохондрии и хлоропласты не нару.шены. В соответствии с наблюдаемой картиной сорт Лошицкий по предлагаемому способу отнесен к числу сортов с высокой по.левой устойчивостью, что соответствует известной из практики высокой полевой устойчивости данного сорта к вирусам мозаичной.группы. При анализе сока по известному способу 1 3 обнар-ужены вирусные частицы, и сорт ошибочно отнесен к.числу неустойчивых. Пример 3. При просмотре срезов листа зараженного растения.(гибрид 6/8 ху 76-23) наблюдали следующую картину: в цитоплазме присутствуют вирусные частицы, но никаки-х изменений ультраструктуры клетки не наблюдается., хлоропласты и митохондрии не разрушены. Вывод: гибрид обладает высокой полевой устойчивостью к вируснойинфекции. Из-за присутствия вир.усных частиц в цитоплазме они могут быть обнаруже ны при изучении сока, что приводит к неверному выводу о неустойчивости гибрида к вирусам мозаичной группы. Пример 4. На срезе единичные включения, распирены каналы эндоплазматического ретикулума, имеются лизосомы, цитоплазма увеличена, но митохондрии и хлоропласты не нарушены. Вывод: сорт устойчив.(сорт Лошицкий). Подтверждено практикой. Пример 5. Преимзпцество предлагаемогоспособа наиболее наглядно демонстрируется на примере М-вируса картофеля, относящегося к дефектным вирусам. Этот вирус медленнно развивается в растениях картофеля и трудно выявляется в первый год заражения растений. С помощью анализа сока зараженных растений могут обнаруживаться в электронном микроскопе единичные вирусные частицы, что свидетельству3 .1 1077 ет о.низкой концентрации частиц в соке. В основном же вирус вообще не удается идентифицировать путеманализа сока в электронном микроскопе в первый год заражения растений, в связиS .с чем нельзя получить достоверные данные о степени вирусоустойчивости исследуемых образцов картофеля. При ультраструктурном анализе клеток по предлагаемому способу уже в первый год заражения исследуемых растений обнаруживается локализация 90 4 и концентрация вируса вклетке и характер его взаимоотношений с клеточными органеллами. По состоянию мембран хлоропластов и митохондрий ножно судитЬ об устойчивости того или иного образца картофеля к вирусной инфекции. Таким образом, при определенииустойчивости растений картофеля к вирусам мозаичной группы предлагаемьм спосо достоверность определен значительно повышается.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ КАРТОФЕЛЯ К ВИРУСАМ МОЗАИЧНОЙ ГРУППЫ, включающий искусственное заражение растения и последующий электронно-микроскопический анализ его элементов, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности способа,анализируют срезы листа и к вирусоустойчивым относят только те растения, в клетках которых сохраняется целостность мембран митохондрий и хлоропластов.