Способ прогнозирования течения острых распираторных инфекций у детей раннего возраста Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине .и может быть использовано в педиатрии.

Известен способ прогнозирования частоты заболеваний острыми респираторными инфекциями (ОРИ) в первом полугодии жизни у детей, основанный на вычислении прогностического коэффициента поданным анамнеза и исследования крови беременной и новорожденного, о

Недостатками способа являются сложность, необходимость в дородовом обследовании беременной, невысокая достоверность, обусловленная неизбежным субъективизмом при сборе анамнеза, а также кратковременность прогноза, ограниченного первым полугодием жизни

Цель изобретения - упрощение известного способа, повышение его достоверности, сокращение сроков, необходимых для проведения прогноза, а также увеличение срока прогнозирования до 1 года жизни.

Поставленная цепь достигается определением содержания лимфоцитов в пуповин- ной крови новорожденного и в его периферической крови на 4 день жизни с определением количества теофиллинустой- чивых (Тту) и теофиллинчувствительных (ТТч) лимфицитов и вычислением соотношения Тту и снижении Тту/Ттч в обои анамнезах

Я сл

периода новорожденное™ прогнозируется возможность развития частых ОРИ в возрасте до 1 года.

Известно, что у детей с частыми ОРИ, формирующими группу так называемых часто болеющих детей (Ч БД), наиболее характерные изменения в иммунной системе заключаютря в уменьшении содержания Т- активных клеток и в снижении соотношения Тту/Ттч (субпопуляций, осуществляющих со- отвёт1ст в е н й 6 х ёлг1ерную и супрессорную функции), причем изменения их содержания выявляются как на фоне ОРИ, так и в течение длительного времени после выздоровления,

.Для решения этого вопроса нами проводилось обследование новорожденных с определением указанных параметров (Такт, ТТу, ТТч) и последующее наблюдение за ними до возраста 3 лет с повторными иммунологическими обследованиями. Всего было обследовано 320 новорожденных - 220 от нормально протекавшей беременности (I гр.) и 100 - от беременности с токсикозами II половины (2 гр.). Результаты определения содержания субпопуляций Т-лимфоцитов и их соотношения представлены в табл.1.

Как видно у детей I гр. содержание субпопуляций лимфоцитов при 1 и 2 обследованиях не менялось, а соотношение Тту/Ттч несколько снижалось. У детей 2 группы в пуповинной крови содержание обеих субпопуляций было повышенным, вероятно за счет антигенной стимуляции и гипоксии, но соотношение ТТу/ТТч менялось незначительно. Однако к 4 дню жизни содержание субпопуляции нормализовалось, а Тту/Ттч стремилось к норме. Эти средние значения с недостоверными колебаниями сохранились у большинства обследованных детей на протяжении первых 3 лет жизни,

При последующем наблюдении за обследованными детьми выяснилось, что частые ОРИ на 1 году жизни отмечены у 68 из 320 обследованных детей (21,3%). Критериями частых ОРИ были: до 1 года 4 и более ОРИ в год, 1-3 года 6 и более ОРИ в год. 54 из 68 детей до 1 года жизни находились дома и лишь 14 посещали детские дошкольные учреждения (ДДУ) с 6-9 мес, При ретроспективном анализе результатов иммунологического обследования часто болеющих детей в периоде новорожденное™ у 58 из них (85,3%) было найдено достоверное снижение количества Тту/Ттч как в пуповинной крови, так и на 4 день жизни. Достоверных различий в их содержании у детей 1 и 2 групп не отмечалось, что позволило объединить эти группы.

Отсутствие достоверных различий в содержании приведенных параметров при 1 и 2 обследованиях позволили обьединить их вместе. Характерно, что ни в одном случае

оба приводимых параметра одновременно не превышали средних значений, отмечаемых у этих детей в период новорожденное™ (т.е. Тту/Ттч-1,64 ±0,048, Тту-0,613±0,138х х 109/л). Все это явилось основанием для

введения указанных параметров в качестве ограничений в формулу изобретения.

При повторных иммунологических обследованиях, проведенных у 62 из 68 часто болеющих детей в возрасте 12,18 и 24 мес.

(± 1 мес.) не ранее чем через 1 мес. после перенесенных ОРИ, выяснилось, что у большинства из них количество ТТу/ТТч и ТТу по- вышалось, причем во всех случаях превышение ими параметров периода новорожденности непосредственно предшествовало уменьшению частоты ОРИ (табл.3),

У 16 детей из 58 содержание Тту и Тту/ТТч за время наблюдения не повысилось, и частота ОРИ не снизилась (8,4 ±2,3

в год).

Выявленная зависимость между повышением указанных иммунологических показателей и частотой ОРИ явилась основанием для введения в лечение этих детей

иммуностимуляторов. 8 детей группы ЧБД с 18 мес. получали нуклеинат натрия (НН) - 0,1 х 3 р. в день - 2 курса по 10 дней с интервалом 2 недели. Через 2-3 недели после 2 курса НН отмечалось достоверное повышение содержания Тту и Тту/Ттч (соответственно до 1,011 ± 0,168 х 10 /л и 2,20 ±0,17).

Частота ОРИ после этого снизилась с 8,2 ± 2,3 до 3,2 ± 0,8 раз в год (в пересчете

на год), Р 0,05. Это также свидетельствовало о роли снижения количества Тту и нару- шении соотношения ТТу/Ттч в возникновении повторных ОРИ у детей. Что касается биологического смысла

приводимых параметров, то количество Т- активных лимфоцитов иособенноТту, в значительной степени отражающих содержание Т-хелперов, является одним из важнейших параметров иммунной системы,

во многом определяющих резистентность против инфекции. Количество Тту и ТТч лимфоцитов может варьировать в различных пределах, но соотношение Тту/ТТч, называемое также иммунорегуляторным индексом,

является наиболее информативным показателем, отражающим хелперную активность лимфоцитов. Под влиянием различных неблагоприятных факторов, действующих во время беременности, количество ТТу и

Тту/Ттч могут меняться, отражая изменение активности иммунной системы. На этом выявлении индивидуальных темпов восстановления сниженных при рождении функций и основан предлагаемый способ.

Следует отметить, что всего из 320 обследованных новорожденных группу ЧБД составило 68 детей, причем у 10 из них указанные иммунологические параметры были выше приведенных. Вероятно, повторные ОР у этих детей были обусловлены иными механизмами (патологией носоглотки, снижением функций нейтрофилов и пр.). Предлагаемый способ позволяет выделять из группы ЧБД тех детей, у которых развитие ОРИ обусловлено конкретными иммунными механизмами, что открывает возможности для проведения патогенетически обоснованной терапии.

Пример 1. Ребенок Н.С., родился 4 июля 1988 г. В родильной комнате в стерильную силиконизированную пробирку с 75 ед. гепарина было взято 5 мл крови из пуповины. Было подсчитано количество лейкоцитов в камере Горяева (7,46 х 109/л) и сделан мазок крови с окраской по Рома- новскому-Гимза с подсчетом количества лимфоцитов (32%) и вычислением их абсолютного числа (2,388х109/л). 1 мл крови из пробирки развели в 2 раза средой 199 (рН 7,2-7,4) с 5% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), смесь подслоили тонкой пипеткой под 2 мл смеси фиколл-верографин с плотностью 1119 г/см3. Пробирку с содержимым центрифугировали 40 мин при ЗбОд без охлаждения. Кольцо лимфоцитов на границе градиента плотности собрали пипеткой, перенесли в силиконизированную пробирку и дважды отмыли средой 199 в течение 10 мин при 120д. Подсчитали количество клеток в 1 мл в камере Горяева и добавлением среды 199 довели концентрацию до 2 х 10е мл. 0,1 мл этой смеси мешали с 0,05 мл ЭТС, добавили 0,1 мл 1% эритроцитов барана и в силиконизированной пробирке выдержали при 4°С в течение 1 ч. Затем процесс фиксировался добавлением 5 капель 50%-ного раствора глютаральдеги- да. Из смеси приготовили мазки, высушили, фиксировали метанолом и окрасили по Романовскому. Препарат исследовали под малым увеличением. Было подсчитано 100 лимфоцитов как с эритроцитами, так и без. Розеткой считались лимфоциты, присоединившие 4 и более эритроцита. Их количество составило 48% (1,146 х 109/л). Это отразило общее количество Т-лимфоцитов.

Для определения теофиллинустойчи- вых Т-лимфоцитов (ТТфуУ к смеси лимфоцитов концентрации 2 х 10 мл добавили 0,1 мл

ЭТС и 0,1 мл 0,5%-ного раствора теофилли на. Смесь выдержали при 37°С 1 ч, добавили к ней 0,1 мл 1%-ной взвеси эритроцитов барана, центрифугировали при 200д 5 мин и

выдержали 1 ч при 4 °С. Количество лимфоцитов, образовавших розетки, составило 25% от общего количества лимфоцитов (от 2,388 х 109/л), т.е. 0,597 х 109/л (менее ограничения, приведенного в формуле, т.е. 0,613

0 х 10 /л). Количество теофиллинчувствитель- ных клеток (Ттфч) определялось по разности Тобщее-Ттфу 1,146-0,597 0,549 х 109/л. Соотношение ТфУ:ТТфЧ 0,597:0,549 1,09 (менее 1,64).

5 На 4 день жизни утром из пятки этого же ребенка было получено 1 мл крови в стерильную пластиковую пробирку объемом 1,5 мл, содержащую 15 ед. гепарина Последующие манипуляции по подсчету об0 щего количества лейкоцитов, приготовлению и окраске мазков крови, выделению лимфоцитов, определению количества Т- лимфоцитов, Ттфу, Ттфч полностью аналогичны проведенным с пуповинной кровью,

5 Количество лейкоцитов составило 12,200 х

х109/л, количество лимфоцитов-32% (3,904х

х 109/л, Т-лимфоцитов - 1,054 х 10 /л, Ттфу

- 0,590, Ттфч 1,054 - 0,590 0,464 х 1Cг.

Соотношение Ттфу/Ттфч 0,590:0,464 1,27,

0 На основании того, что значения Ттфу и соотношения Ттфу/Ттфч в обоих анализах были ниже приведенных в формуле ограничений, . был дан неблагоприятный прогноз по развитию повторных ОРИ. С 5 до 12 мес. ребе5 нок перенес 5 ОРИ, что подтвердило прогноз.

Пример 2. Ребенок П.П. В пуповинной крови: Тту - 0,776 х 109/л ( 0,613), Ттч- 0,145 х 109/л, ТТу/Ттч - 5,35 ( 1,64). На 4

0 день: Тту- 1,280х 10э/л (0,613), ТТч - 0,280 х х109/л, Тту/ТТч 4,57 (1,64). На основании превышения содержания Тту и ТТу/Ттч ограничений, приводимых в формуле изобретения, был дан благоприятный прогноз по

5 развитию ОРИ. На протяжении первых 12 мес. жизни перенес ОРИ 2 раза, течение - без осложнений. При обследовании в 12 мес.: Тту - 1,329 х 109/л ( 0,613), Ттч - 0,306 х 10 /л, Тту/Ттч 4,3 1,64). Благоприятный

0 прогноз подтвержден. С 16 мес. посещает детские ясли: в течение 20 мес. (с 16 до 36 Мес.) перенес ОРИ 6 раз (3,6 раз в год, 6 раз в год), течение неосложненное. В приводимом примере высокие уровни Тту и Тту/Ттч в

5 периоде новорожденности позволили дать благоприятный прогноз по заболеваниям ОРИ, а высокие уровни в 12 мес. - подтвердить его. На основании этого было рекомендовано посещение детских яслей, где ребенок болел редко.

Пример 3. Ребенок М.В. В пуповин- ной крови: Тту - 0,565 х 109 л ( 0,613), Ттч - 0,560 х 109/л, Тту/Ттч 1,0 ( 1,64). На 4 день: Тту 0,580 х 109/л ( 0,614), Ттч - 0,342 х хЮ9/л, ТТу/ТТч 1,48 ( 1,64). На основании сниженных по сравнению с ограничениями количеством Тту и ТТу/Ттч был дан неблагоприятный прогноз - повышенный риск развития частых ОРИ. Ребенок не посещал ясли, однако до 12 мес. перенес 5 ОРИ, на осно- вании чего был отнесен в группу Ч БД. В 12 мес.: ТТу 0,923 х 109/л ( 0,614), Ттч 0,241 х Х109/л, Тту/Ттч 3,8 ( 1,64). На основании превышения иммунологическими показателями установленных ограничений было ус- тановлено улучшение прогноза - ожидаемое снижение частоты ОРИ. В следующие 6 мес. (до 12 мес.), находясь дома, перенес 2 ОРИ (т.е. 4,0 в пересчете на год). С 20 мес. посещает детские ясли, и с 20 до 36 мес. перенес ОРИ 4 раза (3,0 в пересчете на 1 год), что меньше критерия Ч БД для данного возраста. На данном примере виден следующий положительный эффект предлагаемого способа: прогнозирование риска ОРИ в периоде новорожденности, проведенное на протяжении короткого срока (первых 4 дней жизни) на основании объективных данных, с высокой степенью достоверности, выявило риск развития частых ОРИ сроком на 1 год, что было невозможно при использовании прототипа. На основании этого были

даны рекомендации отложить посещение ДДУ до 1 года жизни, т.е. посещение их и учащение контактов с инфекциями способствовало бы более частым заболеваниям, препятствующим восстановлению функций иммунной системы, Несомненно, что в этом случае ребенок оставался бы в группе ЧДБ большее время, что увеличило бы число дней временной нетрудоспособности родителей по уходу.

Повторное иммунологическое обследование в 12 мес., проведение которого не позволяет осуществить прототип, выявило снижение степени риска ОРИ и позволило рекомендовать посещение ДДУ, в котором, несмотря на возросшее число контактов с инфекциями, частота ОРИ снизилась. Формула изобретения Способ прогнозирования течения острых респираторных инфекций у детей раннего возраста путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют в пуповинной крови новорожденного и в его периферической крови на 4 день жизни количество Т-теофиллину- стойчивых и Т-теофиллинчувствительных лимфоцитов, их соотношение и при содержании Т-теофиллинустойчивых лимфоцитов менее 0,613 ±0,138 х 109/л и соотношении менее 1,64 ±0,48 прогнозируют неблагоприятное течение заболевания.

Таблица 1

Изобретение, относится к педиатрии и может быть использовано для прогнозирования течения острых респираторных инфекций у детей раннего возраста. Цель - повышение точности способа. Способ осуществляется следующим образом: в пуповинной крови ребенка и в его периферической крови на 4-й день жизни определяются количество лейкоцитов с подсчетом содержания форменных элементов, и абсолютное количество Тту и ТТч лимфоцитов с определением их соотношения ТТу/ТТч При количестве ТТу менее 0,613 ± 0,138 х 109/л и соотношении Тту/ТТч менее 1,64 ± 0,48 в обоих анализах прогнозируется риск развития частых острых респираторных заболеваний в возрасте до 1 года. При определении этих же параметров у тех же детей в возрасте старше 1 года и до 2,5 лет, в случае сохранения указанных параметров нижеприведенных значений прогнозируется сохранение риска развития повторных ОРВИ сроком на 6 мес, а при их нэрастании и одновременном превышении ими указанных значений прогнозируется уменьшение степени риска. Предложенный способ повышает достоверность прогноза 3 табл. чх Ё

Количество субпопуляций Т-лимфоцитов и их соотношение у новорожденных

Количество Тту, Ттч и соотношение ТТу/ТТч у часто болеющих детей в периоде новорожденности

Средняя частота ОРИ у обследованных детей до и после повышения содержания Тту и Тту/Ттч

в пересчете на год жизни

Таблица 2

Таблица 3