Способ очистки аллергена Советский патент 1992 года по МПК A61K39/36 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для диагностики и лечения поллинозов.

Известен способ получения пыльцевых аллергенов, включающий механическую очистку пыльцы от примесей, обезжиривание в эфире с последующим экстрагированием, центрифугированием и стерилизующей фильтрацией.

Чистота препарата.получаемого при использовании этого способа,зависит от степени удаления примесей из пыльцы и ее обезжиривания.

Однако данный способ не обеспечивает очистку целевого продукта от пигментов (цветность 0.75 - 1.3 ед. экстинции). Это приводит к появлению ложноположитель- ных реакций и снижает специфичность им- мунотерапевтического действия.

Цель изобретения - повышение степени очистки целевого продукта от пигментов.

Указанная цель достигается тем, что в С/) предлагаемом способе пыльцевые зерна f после обезжиривания отмывают водой.л

Существенным отличием предлагаемо- 3 го способа получения от известного является то, что предлагаемое изобретение почти полностью исключает цветность в готовом.

препарате (0,02-0.05 ед. экст.) за счет от- 4 мывки пыльцевых зерен после обезжирива- N| низ водой до визуального отсутствия в ней пигментов, Ч,

Пример. 10 г пыльцы (например, fy амброзии) очищенной от механических при- sQ месей, помещают в емкость, обезжиривают этиловым эфиром, высушивают при комнат- ной температуре, затем заливают дистилли- - рованной водой в соотношении г/мл 1:100 и отмывают пыльцу до визуального отсутствия пигментов в промывной жидкости. Затем пыльцу вновь высушивают и из расчета на 3 г пыльцы добавляют 100 мл раствора Эванса-Кокка, и экстрагируют в течение 72 часов на магнитной мешалке при 4-6°С.

Полученную взвесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надоса- дочную жидкость фильтруют через бумажный фильтр, а затем через стерилизующие мембраны, стандартам- руют до 0,100 ±0,020 мг/мл азота белка по Кьельдалю, разливают во флаконы и укупоривают.

Контроль полученного аллергена осуществляют на стерильность, токсичность, специфичность и цвелг|(ость.

Токсичность препарата проверяют в опытах на белых мышах и свинках. Стерильность определяют посевом на питательную среду. Специфическую активность аллерге- на проверяют в кожных тестах на больных сенсибилизированных пыльцой поллино- зов. Цветность определяют визуально.

При этом получают прозрачный, бесцветный препарат (цветность - 0,03 ед. экс- тинции), содержащий 0,1 мг/мл азота белка по Кьельдэлю.

Сравнительная характеристика препаратов,полученных по известному и предла- гаемомуспособам/федставленавтабл, 1-3. (Средние данные 10 серий).

Из табл.1 видно, что предложенный способ получения пыльцевых аллергенов позволяет почти полностью удалить пигменты. Об этом свидетельствует низкая сте- пень цветности (0,02 - 0,05 ед. экстинции)у очищенных аллергенов по сравнению с цветностью (0,75 - 1,3 ед. экстинции) у неочищенных. В то же времп очистка препарата не изменяет показателей специфичности, токсичности, стерильности, содержания белкового азота, которые соответствуют требованиям фармакопеи.

, Как видно из табл.2, при кожном тестировании (прик-тест) аллергенами, полученными по известному и предлагаемому способам, активность реакций не отличается.

Как видно из табл.3, уровень содержания антител у животных, иммунизированных аллергеном, приготовленным по предлагаемому способу на уровне, а в некоторых случаях и выше, чем кроликов иммунизированных коммерческим аллергеном.

Предлагаемый способ, по сравнению с известным, Обеспечивает следующие преимущества:

дает возможность получить стандартный препарат очищенный от пигментов (цветность 0,02-0,05 ед. зксчинций, ч го в конечном итоге повышает эффективность диагностики: достоверность анализа, уменьшается показатель ложных реакций и лечение поллинозов; более специфическая стимуляция иммунной системы).

В настоящее время о НПО Аллерген нарабатываются серии аллергена для оформления изменения к регламенту производства на пыльцевые аллергены.

Формула изобретения Способ очистки аллергена, включающий механическое отделение примесей от пыльцы, ее обезжиривание эфиром, центрифугирование, стерилизующую фильтрацию надосадочной жидкости, отличающий- с я тем, что, с целью повышения степени очистки целевого продукта от пигментов, пыльцу после обезжиривания отмывают водой.

Использование: изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для 2 диагностики и лечения поллинозов и касается способа очистки аллергена. Целью изобретения является повышение степени очистки целевого продукта от пигментов. Сущность изобретения заключается в отделении примесей от пыльцы, ее обезжиривании эфиром, отмывании водой, центрифугировании и стерилизующей фильтрации надосадочной жидкости. Положительный эффект заключается а практически полном исчезновении цветности целевого продукта. 3 табл.

Таблица 1

Таблица 2 Сравнительная характеристика кожных реакций аллергенов

Таблица 3

Сравнительная характеристика иммуногенности аллергенов, выявленной в РИГА по титру антител у иммунизированных животных (кроликов)

Аллергены, приготовленые по способу

известному

1:640 1:320 1:1280 1:320

предлагаемому

1:10240

1:25.60

1:320

1:160

1:320

1:5120