Способ сенсибилизации ланцета аллергеном для диагностики поллиноза Советский патент 1993 года по МПК A61B17/20 

Изобретение относится к медицине и может быть применено для диагностики аллергии.

Целью изобретения является разработка способа сенсибилизации панцета пыльцевым аллергеном для диагностики поллиноза.

Поставленная цель достигается тем, что для обеспечения специфичности, стандартности, стабильности кожного тестирования лиофилизированный очищенный аллерген растворяют в растворе бикарбоната аммония в соотношении мг/мл: 1,6-2.6: 1 и сенсибилизируют до полного испарения раствора.

Способ осуществляют следующим образом.

Обезжиренную пыльцу промывают дистиллированной водой до визуального отсутствия в ней пигментов. 3-х кратно экстрагируют 0,125 N бикарбонатом аммония, лиофилизируют. вновь растворяют экстрагирующим раствором и стерилизуют, Далее полученный аллерген контролируют на стерильность, токсичность, содержания азота белка, затем осуществляют сенсибилизацию ланцета. Для этого берут навеску

лиофилизированного аллергена растворяют в растворе бикарбоната аммония. Далее раствор аллергена заливают в лунки плек- сиглазовых плашек куда помещают в вертикальном положении ланцеты и высушивают до полного испарения экстракта.

Затем осуществляют контроль специфичной активности сенсибилизированных ланцетов.

Полученный таким образом сенсибилизированный ланцет готов к употреблению.

П р и м е р 1. Берут 100 г пыльцы амброзии обезжиривают этиловым эфиром, высушивают при комнатной температуре, затем промывают дистиллированной водой до визуального отсутствия в ней пигментов, после чего вновь высушивают и в холодильной камере при t +4°C проводят 3-х кратное экстрагирование пыльцы 0,125 раствором бикарбоната аммония на магнитной мешалке в течение 18, 4 и 4 ч. Для этого берут соотношение пыльцы и экстрагирующей жидкости 10:100 и последовательно экстрагируют пыльцу 50%, 25% и 25% объема раствора бикарбоната аммония. После каждой экстракции надосадочную жидкость сливают в

w

Ё

00 N3 СП О Ю О

Ц|(1рчфужиые стаканы, центрифугируют . 000 об/мин в течение одного часа, ьсеч ччсгракпм объединяются вместе I Hiibi ;,-/км через бумажный фильтр и под- лиофильному высушиванию Далее 6epyi г исфи/ibno высушенного a/mepie- н-з рзсичог яют i мл 0 125 N раствора бикарбоната аммония, фильтруют через стерилизующие мембраны и контролируют на стеритьяосгь токсичность и содержание азотз бе л к,ч.

Затем стерильный, не токсичный, содержащий 10000 Р N И/мл раствор аллергена заливаю i по 0,05 мл в лунки тексишазовых плашек и в каждую лунку помещают по од- hor- jy iMueiy e вертикальном положении и г-1,г;пжи.вают РИЛОТЬ до полного испарения раствора

Далее полученные сенсибилизированные ланцегы стерильно упаковывают и про- вяряют их специфическую активность по кожному тестированию в прик-тесте соглас но методически рекомендаций При этом получают с снсмбилизированный ланцет, об- ладзьчций специфической активностью у пнциентив чупгл вительных к пыпьцеамбро- зпщуГ- гни. 5 ти обследованных пациентов о i МОМРЧЫ резки поло китепьные и очень резко НОПОУ-Иiечьине реакции) (таблица),со сроком пл|1 ния в течение года У больных чс tune/I Нг к растительной пыльце не -мри щ триропано положительных прик- lerrrjR рнгчбичиэиропянными ланцетами

При м е р 2 Г посоЬ осуществляют так же, i-ar в примере 1 за исключением того, -tin беру) i (.теску липфильно высушенного j.ineprcHa 1 G мг н 1 мл 0 175 N раствора бик рбонат-п л м ми н пч

При. получают сенсибилизирован- ii,|и. .янцет обладающий специфической жтиннгн.т у пациентов чувствительных к nuiibt c vi6pr. пи fy J x из 5 ги обследованrlt.lX nQi . f.n,h ,М:ИТРЛЫ ЫР |}РЗКО ПОЛО

и.11,1 реакции) ( таблица 1) со сроком п-ч тнпч год v больных нечувствитель ii.i- г пыльце не зарегистри- pnn-it.t in/ (), ЦТР л ьч ы при к-т ее то в с епсиопт зиро па иными панцетами

П р и м Р р 3 Способ ncvmeciвляют так же, как Р гримере 1 та исключением того чю берут n.jRf-гку лиС ильно рыг.ушенногс cvnppren;) 2 6 мг в 1 мл 0 125 N раствора бикарбоната аммония При том получают гонги илизированный панцет обладающий сиецифи.мрской .1ннп(лью у пациентов, чуне вм i ( льны, к ПЧПЬЦР чмброзии (у 5-ти и 1 5-ти оболе/юрлиных больных отмечены и - ч1 Г , i i по игрл-id реакции) (таб

1 Н(Н М I П НОМ МММГИИЧ 1 I ()Д У бо ТЬ

ных, нечувствительных к растительной пыльце, не зарегистрировано положительных прик-тесгов с сенсибилизированными ланцетами.

Пример 4. Способ осуществляют так

же, как в примере 1 за исключением того, что берут навеску лиофильно высушенного аллергена 2,8 мг в 1 мл 0,125 N раствора бикарбоната аммония. При этом получают

сенсибилизированный ланцет с резко выраженной аллергенной активностью (у 5- ти из 5-ти обследованных отмечены очень резко положительные реакции, причем у 2-х пациентов развился лимфангоит (табли5 ца), что делает нецелесообразным использование этой навески при сенсибилизации ланцета.

П р и м е р 5. Способ осуществляют так же как в примере 1 за исключением того, что

0 берут навеску лиофильно высушенного аллергена на 1,4 мг в 1 мл 0,125 N раствора бикарбоната аммония, При этом получают сенсибилизированный ланцет, который не обладал аллергенной активностью в доста5 точной степени (у 2-х из 5-ти обследованных отмечены положительная и резко положительная реакции) (таблица), что делает нецелесообразным использование этой навески при сенсибилизации ланцета

0П р и м е р 6. Способ осуществляют так

же, как в примере 1 за исключением того, что вместо пыльцы амброзии берут пыльцу ежи, в дальнейшем используя соотношения навески лиофильно высушенного аллергена

5 (мг) и 0,125 N раствора бикарбоната аммония (мл) 2.0 1.0.

При этом получают сенсибилизированный ланцет обладающий специфической активностью у пациентов чувствительных к

0 пыльце ежи (у5-ти из 5-ти обследованных пациентов отмечены резко положительные и очень резко положительные реакции) со сроком хранения в течение года. У больных, нечувствительных к растительной пыльце.

5 не зарегистрировано положительных прик- тестов с сенсибилизированными ланцетами

Предлагаемый способ сенсибилизации ланцета обеспечивает: возможность получе0 ния специфически активного, стабильного и стандартного сенсибилизированного ланцета, сохраняющего свои свойства в течение года,

Формула изобретения

5Способ сенсибилизации ланцета для

диагностики поллиноза. включающий нанесение аллергена на ланцет с последующим высушиванием, отличающийся тем что, с целью обеспечения специфической активности стандартности и стабильности

при кожном тестировании, аллерген растворяют в 0.125 N растворе бикарбоната аммо- ния в соотношении 1.6-2,6 мг:1 мл.

стерилизуют фильтрацией, а после нанесения аллергена на ланцет выдерживают до полного испарения раствора.

Изобретение относится к медицине, в частности для диагностики поллинозов. Цель изобретения - разработка способа, обеспечивающего сенсибилизацию ланцета со специфической активностью, стабильными и стандартными свойствами при хранении в течение года. Способ включает сенсибилизацию аллергеном, растворенным в 0,125 N бикарбонате аммония в соотношении мг/мл: 1,6-2,6:1. 1 табл.

Результаты изучения специфической активности сенсибилизированных ланцетов