Способ декапсулирования яиц ракообразных АсFемIа SaLINa Советский патент 1992 года по МПК A01K61/00 

Изобретение относится к промышленному рыбоводству, в частности к способам подготовки яиц ракообразных к инкубации, и может быть использовано при производстве кормов для личинок рыб.

В качестве стартового живого корма при кормлении личинок рыб разных возрастов используют жаброногого рачка Artemia sallna (п./кл, Branchlopoda, отряд Anostraca). Покоящиеся (диапазирующие) яйца артемия сохраняют жизнеспособность в течение многих лет и могут быть использованы в любое время. Оболочка яиц артемии состоит из трех слоев: жесткого хориона серого и светло-коричневого цвета и внутренней прозрачной эмбриональной кутикулы. После растворения хитинообразного хорир- на эмбрион остается в тонкой эластичной кутикуле, которая легко усваивается личинками рыб.

Известны способы подготовки и инкубации яиц артемии, когда увеличивается процент выклева науплиев. Для этого используют инкубирование яиц при различных сроках -экспозиции в растворах таких органических растворителей, как ацетон, ксилен, а также в растворах соды, буры, поваренной соли, перекиси и т.д. Перечисленные способы позволяют повысить вы- клев артемии, однако непроклюнувшиеся яйца и пустые оболочки, потребляемые личинками рыб, не перевариваются и блокируют кишечник. Механическая сепарация не дает желаемого эффекта. В связи с этим возникает необходимость разработки методов декапсулирования яиц артемии. Преимущество декапсуляции заключается в дезинфекции, увеличении процента выклева науплиев, сохранений энергии (калорийности) эмбрионов, не затрачивающих усилий на разрыв хориона

Известен способ декапсуляции яиц артемии, когда в качестве декапсулирующего агента обычно применяют хлорную известь

00

ь.

О

и гипохлориты кальция и натрия. Активность по хлору декапсулируемого раствора составляет 28 г/л. В 1 л раствора обрабатывают 80 г яиц в течение 10-15 мин, при перемешивании, рН 10. После декапусуля- ции яйца промывают в воде и для дезактивации остатков хлора обрабатывают децимолярной соляной кислотой. Эффек- тивность выклева науплиев из обработанных яиц на 11-17% выше, чем из необработанных. Эффективность реагента меняется в зависимости от количества в нем активного хлора, однако в процессе хранения содержание активного хлора меняется и необходим дополнительный пересчет для определения реального содержания хлора в реагенте перед его применением.

Однако указанный способ из-за чрезмерно большого содержания активного хлора, как и его длительная экспозиция оказывают негативное действие на декапсу- лирование яиц, а снижение экспозиции не обеспечивает полной декапсуляции. К тому же хранение реагентов, приготовление де- капсулирующего раствора, затем последующая промывка от него яиц артемий, дезактивация хлора кислотой, создает повышедшую опасность для обслуживания персонала и окружающей среды.

Для человека токсичны хлорпроизвод- ные соединения - уменьшается концентрация глутатиона в крови, ингибируется синтез ДНК в некоторых органах.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является описанный способ.

Целью изобретения является повышение эффективности процесса.

Для достижения поставленной цели, согласно способу декапсулирования яиц эрте- мий. включающему приготовление декапсулирующего раствора, содержащего 7-дневную культуральную жидкостью (КЖ) гриба Verticlllium lecani 71т,обладающему хитиназной активностью, с последующей обработкой яиц этой КЖ, при этом яйца артемий и декапсулирующий раствор берут в весовом соотношении 10:1.

Предлагаемый способ декапсулирования яиц артемий осуществляет следующим образом.

Собранные яйца рачка Artemla sallna очищают от примесей и помещают в воду для их гадратации на 1 ч. После чего яйца отцеживают в мешочек из капронового газа.

Предварительно готовится декапсулирующий раствор. Для этого жидкая, предварительно простерилизованная при Р-0,5 атм в течение 30 мин среда Чапека; сахарозы - 30 г, азотнокислого калия - 3 г, калия

фосфорнокислого однозамещенного - 1 г, магния сернокислого - 0,5 г, калия хлористого - 0,5 г, железа сернокислого - 0,01 г, воды дистиллированной - 1 литр, рН

5,5-6,0 - инокулировэлась грибом Verticillium lecani Zfm. Культивирование гриба осуществлялось поверхностным методом в литровых колбах, содержащих 200 мл питательной среды. Режим культивирования:

при t +24°C в течение 7 дней в термостате. Затем культуральная жидкость отфильтровывается и служит декапсулирующим раствором яиц артемий.

Гидротированные яйца помещают в

раствор при температуре и выдерживают в нем при перемешивании 1-2 ч. После чего яйца вынимают из раствора, промывают в пресной воде в течение 5 мин и закладывают на инкубацию по известной

методике.

Действие декапсулирующего раствора основано на том, что в процессе роста гриба V.lecani КЖ накапливаются экзоферменты хитиноза, обладающей хитиназной активностью.

Штамм гриба Verticillium lecani Zlm под N; 6 депонирован в ВНИИЗащиты растений как продуцент энтомоцидного грибного препарата, безвредного для теплокровных

и окружающей среды.

В предлагаемом технологическом процессе соотношение массы яиц и декапсулирующего раствора 10:1 (табл.1), При повышении соотношения яиц и раствора

процент декапсулированных яиц ниже. Увеличение количества декапсулирующего раствора на единицу яиц приводит к неоправданно большому расходу культу- ральной жидкости, а процент декапсулированных яиц в пределах, близких fc соотношению 10:1, При уменьшении количества декапсулирующего раствора на еди- ницу яиц приводит к тому, что культуральной жидкости не хватает на весь

объем обрабатываемых яиц и процент декапсулированных яиц значительно снижается. Время обработки не менее 1 ч (табл.2). При более длительной экспозиции вести процесс нецелесообразно, т.к.-ухудшаетсй

качество яиц.

Обработка яиц проводится при комнатной температуре (18-20°С), что соответствовало температуре, которая бывает в условиях рыборазведения на теплых водах.

В качестве декапсулирующего раствора оптимальной является 7-суточная культуральная жидкость (табл.3). Культуральную жидкость можно заморозить. При размораживании после 30-суточного хранения в хо

лодильнике, ее декапсулирующие свойства не ухудшились (табл.3).

Из декапсулированных яиц отмечали 100% выход жизнеспособных науплиев/ Формула изобретения Способ декапсулирования яиц ракообразных Artemia salina, предусматривающий приготовление декапсулирующего раствора и последующего обработку полученным

0

раствором яиц, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности процесса, в качестве декапсулирующего раствора используют культуральную жидкость, полученную после 7-суточного выращивания грибаVertlcilliumlecanf, при этом обработку яиц жидкостью осуществляют при массовом соотношении яйцагжидкость, равном 10:1.

Таблица 1

Использование: промышленное рыбоводство, декапсуляция яиц ракообразных. Сущность: готовят декапсулирующий раствор, представлякщий собой 7-суточную культуральную жидкость гриба Verticium lecpnl при соотношении яйца - декапсулирующий раствор 10:1. 3 табл.

Влияние концентрации яиц A.salina в декапсулирующем

растворе на декапсулирование (время обработки 1 ч,

7-суточная культурная жидкость)

Влияние времени обработки декапсулирующим

раствором на декапсулирование яиц A.salina

(10 мг яиц/1 мл раствора)

Влияние времени культивирования V.lecani в питательной среде на ее декапсулирующие свойства (время обработки яиц 1 ч)

Таблица 2

Таблица 3