Способ оценки устойчивости томатов к альтернариозу Советский патент 1993 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений на иммунитет к фитопатогенам.

Цель изобретения - ускорение и упрощение оценки при сохранении селекционного материала.

Способ заключается в том, что пыльцу растений томатов проращивают на питательной среде в присутствии экстракта культуральной жидкости гриба alternaria solani и устойчивость определяют по относительному проценту длин пыльцевых трубок в опыте и контроле, при этом при значении данного показателя 60% и выше исследуемые генотипы оценивают как устойчивые, при значении 30-60% - как умеренно пораженные и при значении менее 30% - как восприимчивые.

Пример. Для получения препарата токсичных метаболитов гриб выращивают в погруженной культуре на среде Чапека-До- кса. Для этого в колбы Эрленмейера емкостью 300 мл наливают по 150 мл среды, автоклавируют 40 мин при 0.5-0,6 атм. избыточного давления, затем после охлаждения инокулируют мицелиальными дисками диаметром 10 мм. Диски вырезают у краев 7-10 суточных колоний на аганизованной среде Чапека-Докса. Колбы с грибом помещают на роторные встряхиватели при 90- 120 об/мин. Спустя 12 суток инкубации при комнатной температуре, отфильтровывают культуральную жидкость, подкисляют до рН 3,0-3,5 и эксрагируют равным объемом хлороформа. После отгонки хлороформа на роторном испарителе при температуре 30-40°С получают неочищенный препарат токсинов A.Solani. Осадок растворяют в дистиллированной воде, готовят необходимые концентрации культурального экстракта, который используют при осуществлении способа.

Исследования проводили на двух сортах томатов Sub.arctic Maxl и Персей, а ткже на линиях, полученных методом гибридизаЁ

00

го

4

ГО

ции: Л 738/84, Л 738/84, Л 778/84, ЛК 30/86. К 30/86. SPF, F1 Союэ4 Л 738/84.

Способ осуществляют следующим образом,

С каждого растения выборки (10 образцов) срывают по 1 цветку на одной стадии развития (первый день раскрытия). Отделяют тычиночные колонки от других частей цветка и помещают в пакет из пергаментной бумаги для каждого образца. Пакеты оставляют в комнатных условиях для сушки в течение суток, по истечении которых пакеты встряхивают таким образом, чтобы на дно осыпалась пыльца. Пыльцу каждого образца препаровальной иглой высевают на искусственную питательную среду, содержащую 15%-ную концентрацию сахарозы и 0,003%-ную концентрацию борной кислоты в- дистиллированной воде (контроль) и на среду аналогичного состава, содержащую 0,006%-ную концентрацию экстракта куль- турэльной жидкости (опыт). Пыльцу проращивают в термостате при температуре 28°С в течение трех часов. Затем измеряют длину у 100 случайно выбранных пыльцевых трубок в опытном и контрольном вариантах. Определяют среднее значение длин пыльцевых трубок для каждого образца в опыте и контроле, затем вычисляют относительный процент длины пыльцевых трубок в опыте по отношению к контролю.

Относительный процент длин пыльцевых трубок определяют следующим образом: например, средняя длина пыльцевых трубок линии К 30/86 составляет в контроле 543,09 мкм а в опыте 217,01 мкм.

ПДТ

217,01 100

39,96

543,09

Сопоставляют полученное значение и средний балл поражаемое™ листьев и процент больных плодов для всех образцов. Рассчитывают коэффициент корреляции. Данные представлены в табл.1 и 2.

Из табл.1 видно, что с увеличением по- ражаемости растений снижается относительный процент длин пыльцевых трубок. Таким образом, у более устойчивых образцов рост пыльцевых трубок менее подвержен угнетению токсичным метаболитом фитопатогена. О тесной взаимосвязи признаков свидетельствует высокий коэффициент корреляции г - -0.84 (при критическом уровне показателя для данной выборки 0,65), т.к. фактически найденная величина превосходит этот уровень, установленная связь достоверна на 5%-ном уровне значимости, что доказывает возможность использования предлагаемого способа для диагностики устойчивости томатов. Из данных таблицы видно также, что если относительный процент роста пыльцевых трубок составляет менее 30%, то это соответствует сильному поражению образцов. 30-50% умеренному поражению, а выше 60% - устойчивым образцам.

Из данных табл.2 видно, что обнаруженная тесная связь признаков (z -0,78 при критическом уровне показателя 0,68) свидетельствует о высокой точности способа, т.к. поражаемость плодов является дополнительной характеристикой устойчивости томатов к альтернариозу.

Использование способа обеспечивает

по сравнению с известными способами следующие преимущества.

Ускоряется процесс оценки устойчивости томатов к альтернариозу, т.к. используется пыльца, а не взрослое растение с 3-х

летней оценкой на искусственном инфекционном фоне. Отпадает необходимость применения живых патогенов в полевых условиях, что устраняет опасность распространения болезни. При длительном культивировании на искусственной питательной среде патоген часто утрачивает вирулентные свойства, в то время, как культураль- н,ый экстракт является более стабильным. Создается возможность оценивать селекцибнный материал до завязывания плодов, не повреждая его. Кроме того, пыльца является самой чувствительной стадией развития растений, при этом экономится время, снижается трудоемкость, т.к. создается возможность использования выборок порядка 105-106.

Формула изобретения Способ оценки устойчивости томатов к

альтернариозу, включающий воздействие патогеном на растительный материал и определение устойчивости исследования реакции на патоген по сравнению с контролем, отличающийся тем, что, с

целью ускорения и упрощения оценки при сохранении селекционного материала, в качестве растительного материала используют пыльцу, воздействие патогеном осуществляют путем проращивания пыльцы

на питательной среде в присутствии 0,005- 0,007 мас.% экстракта культу рал ьной жидкости гриба Alternarla solani и устойчивость определяют по относительному проценту длин пыльцевых трубок в опыте и контроле,

при этом при значении данного показателя 60% и выше исследуемые генотипы оценивают как устойчивые при значении 30-60% - как умеренно поражаемые и при значении мене 30% - как восприимчивые.

Т а 6 л и ц а 1

Использование: сельское хозяйство, овощеводство, фитопатология. Сущность изобретения: устойчивость томатов к аль- тернариозу определяют по относительному проценту длин пыльцевых трубок в опыте и контроле, при этом определение ведут путем проращивания пыльцы на питательной среде, содержащей экстракт культуральной жидкости патогена. 2 табл.

Сравнение устойчивости пыльцы к культуральному экстракту по длине

пыльцевых трубок с полевой оценкой устойчивости растений томатов к фитопатогену A.Solan на искусственном инфекционном

фоне по пятибальной шкале.

Сравнение устойчивости пыльцы к культуральному экстракту по длине

пыльцевых трубок с полевой оценкой поражаемости плодов томатов

альтернариозом на искусственном

инфекционном фоне

Таблица2