Вещество, стимулирующее регенерацию тканей при комбинированном радиационном поражении и действии цитостатиков Советский патент 1993 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается вещества, получаемого из высшего дереворазрушающего гриба, обладающего способностью ускорять регенерацию тканей при комбинированном лучевом поражении (КРП) и действии цитостатиков.

Целью изобретения является усиление специфической активности.

Способ получения предлагаемого средства заключается в следующем: высушенное плодовое тело ложного дубового трутовика размельчают до грубодисперсного состояния, а полученный порошок переносят в колбу и заливают кипящей водой в различных соотношениях от 1:10 до 1:500, закрывают крышкой и ставят на кипящую водяную баню в течение 30 мин. Полученный отвар охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через несколько слоев марли. Оставшуюся массу отжимают. Полученное средство представляет собой прозрачный или слегка опалесцирующий раствор коричневого цвета. Сухой остаток на 1 мл такого раствора при соотношении сырье:экстрагент 1:10 составляет 13.68± 0,56 мг.

Пример 1. Белых беспородных крыс обоего пола облучали на универсальной гамма-установке УГУ-420 в дозе 4 ГР при мощности излучения 5 сГР (1,64x10 А/кг), а затем под эфирным рауш-наркозом производили перелом средней трети диафи- за большеберцовой кости. Контрольным животным в течение 10 дней подкожно (п/к) вводили стерильную воду для инъекций в

00 hO

VI ю ел

00

объеме 2,0 мл/кг. Животным опытных групп вводили: метиландростендиол (250 мг/кг один раз в день в желудок в течение первых четырех суток) плюс ретаболил (15 мг/кг один раз в день внутримышечно на 1,7, 15 сут) - прототип, или предлагаемое средство в дозе 2,0 мл/кг п/к один раз в день в течение 10 сут подряд после КРП,

Эксперименты показали, что на 15 день после КРП у контрольных животных на всех рентгенограммах поврежденной конечности четко прослеживается линия излома и края отломков. К 30 дню периостэльная мозоль хорошо различима. Лишь на одной рентгенограмме концы отломков соединены муфтообразным периостом, в остальных случаях щель между отломками четко прослеживается на всем протяжении. На 45 сутки отломки соединены хорошо выраженным муфтообразным регенератором, хотя тень регенерата нежная, а щель между отломками прослеживается в трех случаях из шести. Степень консолидации костных отломков возрастает с 1,5 ±0,2 единиц (15 день) до 3,8 ± 0,2 (р 0,001) единиц на 60 день после КРП. К 60-м суткам наблюдается также возрастание содержания Са и Р в костной мозоли на 38 и 34% соответственно (,01).

Введение животным анаболических стероидных препаратов вызывает нормализацию содержания фосфора в поврежденной кости уже на 15 сутки. Однако значительное повышение содержания фосфора в костях (на 44-72% (,01) по сравнению с контролем), которое сохраняется на всем протяжении лечения, не сопровождается столь выраженным нарастанием уровня кальция. В связи с этим выраженное усилие регенерации костной ткани отмечается лишь к 60-м суткам после КРП. При этом костные отломы соединены плотным однородным регенератором, а на ряде рентгенограмм можно проследить костно-мозговой канал. Степень консолидации костных отломков в этот период составляет 4,3 ±0,3 единицы при 3,8 ± 0,2 единицы в контроле.

Проведение у животных 10-дневного курсй терапии предлагаемым средством вызывает усиление регенерации уже в первые сроки исследования. Через 15 дней после КРП на рентгенограммах „прослеживается изломанная линия перелома. Края отломков не четкие и на них видна тень периосталь- ной реакции, которая на некоторых рентгенограммах соединяет концы отломков. Степень консолидации костных отломков возрастает при этом на 43% (,01) по сравнению с контрольными животными и на 21% по сравнению с крысами, у которых

проводили лечение анаболическими стероидами. К 30-м суткам периостальная мозоль хорошо выражена и плотно соединяет концы отломков. Щель между отломками прослеживается с трудом. На 45-е сутки после травмы концы отломков соединены плотной периостальной мозолью. К 60-у дню периостальная мозоль четко определяется, а края отломков мало различимы. Усиление регене0 рации костной ткани, которое особенно выражено в первые сроки после проведенного лечения, обусловлено нормализацией содержания кальция и фосфора в поврежденных конечностях. Особенно значительное увели5 чение содержания этих веществ в костях наблюдается на 15 и 30 сутки по сравнению с контролем. При этом следует отметить равномерное возрастание содержания как кальция, так и фосфора, что значительно

0 улучшает оссификацию костной ткани. В связи с этим эффективность консолидации костных отломков на ранних этапах после перелома при лечении предлагаемым средством выше, нежели прототипом. Учитывая

5 высокую эффективность действия прототипа на поздних фазах регенерации можно, вероятно, усилить его действие в комплексном применении с предлагаемым средством.

0 Таким образом, по данным рентгенограмм, степени консолидации костных отломков, содержанию в них кальция и фосфора и их отношению в травмированных костях видно, что эффективность лечебного

5 применения предлагаемого средства на ранних этапах после КРП значительно выше, чем применение анаболических стероидов (прототипа).

Пример 2, Известно, что угнетающим

0 действием на органы и ткани обладает не только ионизирующее излучение, но и цито- статики. В связи с этим было изучено влияние водного экстракта ложного дубового трутовика на действие цитостатика-антиме5 таболита 5-фторурацила.

Эксперименты проведены на белыхбес- породных крысах обоего пола массой 150- 200 г, 5-фторурацил (5-ФУ) вводился животным подкожно в дозах 120 и 200 мг/кг

0 в виде 5%-ного водного раствора. Экстракт из ложного дубового трутовика давали пить животным без ограничения вместо воды в течение 10 суток после введения 5-ФУ (через 8 ч) в виде 0,02 и 0,05%-ного раствора.

5 После введения цитостатика за животными осуществляли общеклиническое наблюдение, биохимическими, морфологическими и физиологическими методами исследовали динамику изменения основных параметров системы крови и системы метаболизма на 3,6 и 12 сутки после введения 5-ФУ.

Установлено, что 5-ФУ в дозе 200 мг/кг вызывает 100% гибель животных, средняя положительность жизни составила 5.4 ±0,4 сут. ФУ в дозе 120 мг/кг вызывает гибель 60-95% крыс (в среднем 80,0 ± 8,9%), Продолжительность жизни погибших животных составила в среднем 7,0 ±0,6 сут. Максимальная летальность животных наблюда- лась с 5 до 9 день после введения 5-ФУ. Применение на этом фоне средства, полученного из ложного дубового трутовика, увеличивало продолжительность жизни опытных животных в 1,3-1,5 раза (,01) по сравнению с контрольными, а также их выживаемость при действии цитостатика.

Установлено, что механизм цитостати- ческого и побочных эффектов 5-ФУ связан с угнетением активности тимидилатсинтета- зы и подавлением синтеза ДНК во многих тканях и в первую очередь в быстро профилирующих: костном мозге и эпителии кишечных ворсинок. Изучение системы крови при введении 5-ФУ показало развитие со- стояния выраженной интоксикации, которое сопровождалось анемией (число эритроцитов снижалось в 1,3-1,5 раза (,01) лейкопенией (на 6 сутки количество лейкоцитов снизилось в 2,2 раза (,01)) прогрессирующим нарастанием скорости оседания эритроцитов (СОЭ), Несмотря на потерю массы тела, связанную с выраженной диареей, гематокрит почти в 2 раза ниже нормы (р 0.01), что указывает на ведущую роль угнетения кроветворения в патогенезе интоксикации 5-ФУ.

Комбинированное применение 5-ФУ и препарата гриба не изменяет содержания эритроцитов, концентрацию гемоглобина (при введении одного 5-ФУ содержание ге- моглобина снижено с 141,8 ± 0,4 г/л (интак- тные крысы) до 106,5 ±8,8 г/л (,01) и гематокрит по сравнению с нормой. При этом 5-ФУ не изменяет физико-химических свойств эритроцитов, о чем свидетельствует нормальный уровень СОЭ. Поскольку предлагаемое средство не оказывало существенного влияния на обезвоживание организма крыс при введении 5-ФУ, то нормальные цифры гематокрита указывает на отсутствие угнетения эритропоэза. Данное средство не препятствовало развитию лейкопении, хотя выраженность ее была меньшей по сравнению с контролем.

Влияние 5-ФУ на кроветворение сопровождалось также изменениями массы тимуса и селезенки. Так, масса тимуса была сниженной в 1,3-3,9 раза (р 0,05) во все сроки наблюдения. Масса селезенки снижалась на 28-33% в первые сроки исследования (через 3 и б дней после введения 5-ФУ) и повышалась на 46% (,05) на 12 сутки после применения цитостатика. Применение препарата гриба не влияло на уменьшение массы тимуса и селезенки после введения 5-ФУ, но стимулировало репаративные процессы в этих органах о чем свидетельствует более выраженное возрастание массы этих органов на 12 сутки исследования по сравнению с контрольными животными.

В целом применение препарата гриба уменьшает токсичность 5-ФУ, увеличивая продолжительность жизни и выживаемость опытных животных. Этот эффект, по-видимому обусловлен способностью предлагаемого средства стимулировать эритропоэз и репаративные процессы в тимусе и селезенке.

Таким образом, предлагаемое средство превосходит по своей активности прототип и может с успехом применяться с целью стимуляции репаративных процессов в организме млекопитающих при КРП и действии цитостатиков. В отличие от прототипа оно не обладает андрогенной активностью и менее трудоемко при получении.

Формула изобретения Применение водного экстракта высшего дереворазрушающего гриба ложного ду- бового трутовика (Phelflnus robustus /P.Karsten/ Bourd et Galz) в качестве вещества, стимулирующего регенерацию клеток и тканей при комбинированном радиационном поражении и действии цитостатиков.

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности касается вещества, получаемого из высшего дереворазрушающего гриба, обладающего способностью ускорять регенерацию тканей при комбинированном лучевом поражении и действии цитостатиков. Целью изобретения является усиление специфической активности. Сущность изобретения заключается в применении водного экстракта высшего дереворазрушающего гриба ложного дубового трутовика в качестве вещества, стимулирующего регенерацию клеток и тканей при комбинированном радиационном поражении и действии цитостатиков. Положительный эффект: предлагаемое средство превосходит по своей активности прототип и не обладает андрогенной активностью. сл