Вещество, повышающее стрессоустойчивость Советский патент 1993 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к физиологии.

Цель изобретения - повышение активности к стрессу.

Влияние предлагаемого вещества и некоторых других соединений неустойчивость мышей к действию острой кратковременной гипертермии приведено в табл.1.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве средства, повышающего срессо- устойчивость организма млекопитающих, предлагается использовать водный экстракт, полученный из высшего дереворазру- шающего гриба - ложного дубового трутовика (Phellinus robustus /P.Karsten et Lalz) (ЛДТ). Длительность получения данного (устойчивого к действию высокой температуры) средства из исходного сырья (плодовых тел гриба) не превышает 2 ч.

Известна противовоспалительная активность водного экстракта, получаемого из высшего дереворазрушающего гриба ложного дубового трутовика. Сведений же о том, что упомянутый экстракт можно использовать для повышения устойчивости млекопитающих к действию экстремальных факторов внешней среды, в источниках патентной документации и научно-медицинской информации не обнаружено.

Водный экстракт из ложного дубового трутовика получают следующим образом,

Грубодисперсный порошок, полученный из сухих плодовых тел ложного дубового трутовика, вносят в колбу и заливают кипящей дистиллированной водой в соотношении 1:10 и кипятят 30 мин на водяной бане, Полученный отвар охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Получен00

GJ

i

ное средство представляет собой прозрачный или слегка опалесцирующий раствор коричневого цвета или порошок, получаемый после лиофильной сушки.

Водный экстракт из чаги (прототип) получали вышеназванным способом {по тексту он называется отвар из чаги) и путем настаивания при комнатной температуре (Рудаков, 1973) (по тексту он называется настоем чаги).

П р и м е р 1. Повышение стрессоустой- чивости организма млекопитающих к гипер- термии и ожоговому шоку.

В первой серии опытов, выполненной на белых нелинейных мышах обоих полов (246 животных), изучалось влияние различных доз полученного средства в сравнении с прототипом и с известными противовоспалительными и антигистаминными средствами на устойчивость животных к кратковременной гипертермии, которую вызывали у грызунов путем их помещения в термокамеру (60°С) на 17 мин. Препараты вводили за 30 мин до нагрева внутрибрю- шинно.

Опыты показали (табл.1), что ни салици- лат натрия (классическое противовоспалительное и гипотермическое средство), ни антигистаминные препараты (димедрол и дипразин), ни отвар коры дуба (обладающий противовоспалительным и вяжущим действием) не влияли на выживаемость мышей при кратковременном их перегревании. Повышали выживаемость животных при данном виде гипертермии серотонин, экстракт чаги (настой), предлагаемое средство и ин- тал в дозе 20 мг/кг. Следует отметить, что защитное действие водного экстракта из ложного дубового трутовика при остром перегревании мышей сохраняется и в случае перорального введения средства. Получение экстракта чаги при высокой температуре (отвар), существенно снизило фармакологическую активность прототипа.

Экстракт ложного дубового трутовика и прототип использовали для повышения устойчивости млекопитающих к действию ожоговой травмы, которую моделировали путем погружения нижней (3/4) части тела в горячую воду (70°С) на 4 с. Эксперименты показали (табл.2), что выраженность защитного действия экстракта из ЛДТ (ложного дубового трутовика) зависит от вводимой дозы и сохраняется при пероральном введении. Защитное действие прототипа при ожоге зависило от условий экстракции средства. Водный экстракт чаги, полученный при комнатной температуре, повышал, а отвал гриба не влиял на выживаемость мышей при ожоговом шоке.

П р и м е р 2. Протекторная активность при лучевом поражении. Эксперименты по изучению способов повышения устойчивости млекопитающих к действию ионизирующего излучения проводились на белых беспородных крысах обоих полов различных возрастных групп (120 животных и белых нелинейных мышах обоих полов массой 18-25 г (240 животных): Экстракт из ЛДТ

вводился в дозе 1/32, 1/8 и 1/2 от СД16 и 1/10 от СДбО. Прототип вводился в эквивалентной дозе 3x1/8 от СДче. В качестве стандартного радиозащитного средства для сравнения применяли серотонин (50 мг/кг)

5 и цистамин (75 мг/кг). Все исследуемые соединения вводили за 30-60 мин до облучения на универсальной гамма-установке (УГУ-420) в дозах 6-8 ГР при мощности дозы гамма-излучения 5сГР/с. За животными на0 блюдали 30 суток. Изучали выраженность клинической картины лучевой болезни: среднюю продолжительность жизни павших животных и динамику изменения массы тела развивающейся диареи.

5 Опыты показали (табл.4 и 5), что предлагаемое средство обладает выраженным ра- диопротекторным действием, Фактор уменьшения дозы равен 1,4 и сопоставим с таковым у цистамина и серотонина. Высо0 кий терапевтический индекс (23,5) указывает на очень низкую токсичность препарата при сравнении с таковой для таких известных радиопротекторов как цистамин (1,5) и серотонин (7,0). Протекторный индекс пре5 парата значительно превосходит таковой для цистамина и в меньшей мере для серотонина, что указывает на большую широту его терапевтического действия по сравнению со стандартными радиопротекторами,

0 Оптимальные радиозащитные дозы препарата составляют 1/8 от СД16 (278 мг/кг - 1/10 от СДво (375 мг/кг). Предлагаемое средство превосходит по своей активности прототип. Следует отметить, что радиоза5 щитное действие препарата сохраняется как у взрослых животных (крыс) репродуктивного периода, так и у крысят инфантильного периода в том числе и при его пероральном применении.

0 ПримерЗ. Повышение устойчивости животных к действию гипоксии и гиперкап- нии.

Опыты по изучению устойчивости животных к гипоксиям различного происхожде5 ния проведены на белых беспородных крысах-самках массой 150-220 г (45 животных) и белых нелинейных мышах обоих полов массой 18-25 г (64 животных). Препараты, полученные из ЛДТ путем кипя- ения на водной бане и из чаги при ее настаивании в условиях комнатной температуры, в виде 10%-ных растворов вводили животным в/б в дозах 2 и 10 мл/кг массы тела за 30 мин до воздействия. Острую гипоксич- ную гипоксию вызывали путем подъема животных в барокамере на высоту 12 км (первые 6 км за 1 мин, последующие 6 км со скоростью 1 км/мин). Гиперкапническую гипоксию моделировали путем помещения животных в термокамеру объемом 250 мл.

Результаты экспериментов представлены в табл.6. Из них видно, что процент выживших животных после 8-минутного пребывания на высоте 12 км в опытной группе был в 9,2 (.01) раза выше, чем в контрольной. Увеличивалась устойчивость животных и к действию гиперкапнии при введении им средства из ЛДТ. Длительность пребывания животных в условиях гер- мообъема увеличилась при этом в 1,35 раза (,05).

П р и м е р 4. Защитное действие некоторых фармакологических препаратов при адреналиновом отеке легких. Отек легких вызывали внутрибрюшинным введением адреналина-гидрохлорида (0,1%-ный раствор) в дозе 9,0 мг/кг. Препараты вводили за 30 мин до применения адреналина внут- рибрюшинно.

Эксперименты показали (табл.7), что наиболее, выраженным протекторным действием при отеке легких обладали а-адреноблокатор фентоламин (100%-ная защита от гибели опытных крыс) и экстракт из ЛДТ, при введений которого выжило 40,0 ± 16,3% животных. Все остальные препараты: прототип (настой), обзидэн, (ог-адре- ноблокатор) димедрол и дипразин (блокаторы Hi-гистаминовых рецепторов) не влияли на выживаемость животных при адреналиновом отеке легких.

Таким образом, эксперименты показали, что предложенный способ повышения стрессоустойчивости организма млекопитающих путем введения экстракта из ЛДТ превосходит таковой при применении прототипа. Кроме того, еще одним важным отличительным признаком экстракта из ЛДТ Является его более низкая токсичность и большая устойчивость к действию высоких температур по сравнению с прототипом. Как показали эксперименты (табл.3), СДво для экстракта из ЛДТ составляет 3748 мг/кг, а для прототипа 1000 ± 311 мг/кг, для коры дуба 958 ± 275 мг/кг. Не оказывало токсического действия на организм и длительное как паратеральное, так и пероральное введение водного экстракта из ЛДТ крысам обоих полов. 15 дневная замена воды в поилках на отвар ложного дубового трутовика (при соотношении сырье: экстрагент 1:100) не влияла на содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина, величину цветного

показателя, уровень СОЭ и циркулирующих имунных комплексов, гемолитическую активность комплемента (табл .8). Не было раз- ницы при этом и в некоторых других показателях: подвижности животных в тесте открытого поля, температуре тела, массе тела и внутренних органов. Увеличение длительности потребления крысами (до 48 дней) водного экстракта из ЛДТ (причем соотношение сырье:экстрагент было 1:10)

вместо питьевой воды также не вызывало видимых изменений в поведении животных, изменение массы тела и внутренних органов.

Следовательно, предлагаемый способ

позволяет повышать выживаемость животных и удлинять их пребывание в условиях действия экстремальных факторов, не оказывая при этом токсического Действия на организм млекопитающих.

Учитывая наличие выраженного клинического стресса у домашних и сельскохозяйственных животных при их лечении/было предложено провести клинические испытания предлагаемого способа в условиях экспериментальной клиники при лечении собак.

Прим е р 5. Повышение резистивности

организма к действию эмоционально-иммо- билизационного стресса.

Исследования проведены на базе экспериментальной клиники МГМИ на собаках

различных пород массой 5-15 кг. В опытной и контрольной группах было по 6 животных. У иммобилизованных на спине в течение 10-15 мин животных регистрировали электрокардиограмму (ЭКГ) во 11 стандартном

отведении и забирали (после записи ЭКГ) кровь из бедренной вены для иммунологи- ческого и общеклииического анализов. Эти манипуляции с собаками производили до применения средства и через 5,15 и 30 дней

после его использования. Экстракт добавляли животным в творог в дозе 200 мг на животное (один раз в сутки) ежедневно в течение 31 дня.

Установлено, что у всех животных в исходном состоянии отмечаются при иммобилизации выраженные нарушения сердечного ритма (табл.9). Отношение числа сердечных сокращений (ЧСС) к числу внеочередных сокращений(ЧВС)(т.е. когда разница в длительности двух соседних интервалов РР превышает 10%) составляет 1,61 ±0,12 единиц.

У контрольных собак на 15-й день существенной динамики не отмечается. Отношение ЧСС/ВЧС равно 1,55 ±0.12 единицы. У опытных же животных этот показатель увеличивался до 2,62 ±0,34(,05). Это свидетельствует о стабилизации сердечного ритма и уменьшении числа внеочередных сокращений в 1,69 раза у опытных собак. Кроме того, у животных на ЭКГ в исходном состоянии имеются признаки ишемии миокарда: отрицательные зубцы Т, опущение сегмента ST ниже изолинии. У опытных собак при этом поя действием экстракта из ЛДТ наблюдается скорейшее исчезновение этих признаков по сравнению с контролем.

Анализ показателей системы крови показал, что они у опытных и контрольных животных соответствуют данным литературы. Не выявлено достоверных различий в показателях и в динамике наблюдения за контрольными животными (табл.9). У опытных же животных по сравнению с контролем лишь достоверное увеличение количества лейкоцитов на 34% (.05) через 15 дней после приема экстракта из ЛДТ. При этом у опытных собак была выше и функциональная активность лейкоцитов, о чем свидетельствует увеличение числа фагоцитирую- щих лейкоцитов в 1,23 раза (,005) и числа фагоцитируемых одним нейтрофилом стафиллококков в 1,43 раза (,01).

. Таким образом, предлагаемый способ повышения стрессо-устойчивости организма млекопитающих может найти уже сегодня широкое применение в ветеринарии при

лечении и перевозках домашних и сельскохозяйственных животных для профилактики стрессорных повреждений при вынужденной их лечебной или транспортной иммобилизации. Кроме того, предлагаемое для

данного способа средство не оказываетток- сического воздействия на организм млекопитающих разных видов (мыши, крысы, собаки) как при остром, так и при хроническом введении в рекомендуемых дозах.

Фор мула изобретения Применение водного экстракта высшего дереворазрушающего гриба ложного дубового трутовика (Phellinus robustus/P. Karsten / Bourd et Lalz) в качестве вещества, повышающего стрессоустойчивость.

Изобретение относится к медицине, а именно к физиологии, и касается вещество, повышающее стрессоустойчивость. Целью изобретения является повышение специфической активности. Сущность изобретения заключается в использовании водного экстракта дереворазрушающего гриба ложного дубового трутовика в качестве средства, повышающего стрессоустойчивость в эксперименте. Положительный эффект заключается в повышении активности к ги- пертермии и ожоговому шоку, а также про- текторной активности при лучевом поражении, к воздействию гипоксии и ги- перкапнии, а также при здреналовом отеке легких и эмоционально-иммобилизацион- ном стрессе. 9 табл.

Примечание: все препараты вводились внутрибрюшинно, кроме предлагаемого средства, которое животным 13-й группы вводилось чере.з зонд в желудок. - ,01 по отношению к группе 1 (контролю).

30

Таблица 1

Таблица2

Изменение устойчивости мышей к ожоговому шоку после введения животным некоторых фармакологических препаратов

Примечание: в/б - внутрибрюшное введение препаратов; в/ж - введение препаратов в желудок через зонд; - ,05 по отношению к контрольной группе;

ожоговый шок у мышей вызывали путем погружения нижней (3/4) части тела в горячую воду (70°С) на 4 с.

Таблица 3

Острая токсичность предлагаемого средства при внутрибрюшинном введении в сравнении с прототипом

.01 по отношению к животным, которым вводили отвар коры дуба или настой чаги

Т а б л и ц а 4

Сравнение радиозащитного действия предлагаемого средства и известных радиопротекторов

Примечание: Препараты вводили за 30-60 мин до облучения животных в дозе 7,0 ГР при мощности дозы излучения 5 сГР/с.

- различие достоверно при сравнении с контролем

Табл ица 5

Сравнение защитных и токсичных Доз экстракта из ЛДТ и классических радиопротекторов при их внутрибрюшном введении.

Примечание: ЛДТ - ложный дубоЁый трутовик.

Т а б л и ц а 6

Повышение устойчивости животных к острой гйпоксической (А) или гиперкапнической (Б) гипоксиям после внутрибрюшинного введения им предлагаемого средства и прототипа

Продолжение таблицы А

13

Примечание: препараты применяли в виде 10%-ных растворов; - ,05 по отношению к контролю

Таблица 7

Влияние предлагаемого средства в сравнении с некоторыми другими препаратами на выживаемость животных при адреналиновом (9,9 мг/кг) отеке легких. Препараты вводили внутрибрюшинно за 30 мин до применения адреналина.

- ,05 по отношению к контролю.

ТэСлицав

Некоторые показатели крови после ежедневного в течение 15 дней употребления отвара ложного лубового трутовика (1:100) вместо питьевой воды

181344614

Продолжение таблицы 6

31,9 6,5

25

8,1 С,05

Та б л и ц а. 9 Динамика некоторых показателей системы крови у контрольных (1) и опытных (2) собак.

Примечание: - достоверно по сравнению с исходными величинами.