Способ получения тетраплоидной ромашки матRIсаRIUм снамомILLа RесUтIтаL.,АстеRасеае Советский патент 1993 года по МПК A01H1/04 

сл

с

Использование: биотехнология, селекция растений, фармацевтическая промышленность. Сущность изобретения: получена новая тетраплоидная и богатая бизаболо- лом ромашка, цветки которой, высушенные при температуре, равной 40°С, содержат по меньшей мере 100 мг% хамазулена и по меньшей мере 200 мг% (-)-а-бизаболола, причем содержание прочих бизаболоидов превышает 50 мг%. Для получений данной ромашки тетраплоид iyio или диплоидную ромашку, в которой бизаболол представляет собой основной компонент эфирного масла, подвергают различным операциям отбора и размножения. J З.П.Ф-ЛЫ, 2 табл.

-; Препараты из головок ромашки (CJiamomilla recutita (L.) Rauschert, синоним с |/1atricar1a chamomilla L. Asteraceae находя вследствие их антифлогистического и спазмолитического действия широкое терапевтическое применение и образует влажную составную часть растительного лекарственного богатства. При этом особое те запёвтическое значение имеют биологически активные вещества (-)- fir-бисаболол и хаиазулен. Поэтому хорошее ромашковое сырье должно иметь максимально возможное содержание этих обоих веществ.

| Встречающиеся в природе диплоидные ромашки являются в отношении содержания в них биологически активных веществ веЬьма неоднородными. В частности, из на- иб олее важных биологически активных веществ хамазулена и (-)-а-бисаболола представлен только один, или оба эти вещества полностью отсутствуют, или имеются вместе только в очень небольшом количестве, причем в таких случаях основные компоненты эфирного масла состоят из менее: действенных бисаболоидов (окиси А или В| бисаболона, окиси А бисаболола).1

Из немецкого патента № 2402802 изве-j стен сорт ромашки Degumill, который имеет одновременно высокое содержание (-}-(i- бисаболола и хамазулена. Содержание хамазулена и бисаболола этого сорта ромашки однако лишь тогда является постоянным, когда предотвращается любое вовлечение в скрещивание или постороннее опыление другими сортами ромашки, содержание бисаболола и хамазулена, в которых является значительно более низким. Эта опасность скрещивания посредством постороннего опыления почти всегда имеет место, потому

00

Сл)

о о о

Ь.

Сл)

что зти дикие ромашки встречаются практически повсюду.

Теперь было обнаружено, что вообще из естественно встречающихся популяций ромашек либо диплоидных, либо тетраплоид- ных селекционных ромашек посредством определенных операций могут быть получены богатые бисабололом тетраплоидные растения ромашки, которые, с одной стороны, не являются более восприимчивыми по отношению к постороннему опылению естественно встречающимися ромашками, а с другой стороны имеют одновременное высокое содержание хамазулена и (-)) а-бисаболола причем содержание (-)- а-бисаболола значительно превосходит содержание хамазулена и при этом прочие бисаболоиды практически не встречаются или встречаются лишь весьма в небольшом количестве. При этом, таким образом, существенное значение имеет то, что большое содержание основных биологически активных веществ (-)- а-бисаболола и хамазулена в случае соответствующей изобретению ромашки является постоянным, т.е. остается сохраненным при каждом размножении.

Изобретение относится к способу получения новой тетраплоидной ромашки с предпочтительными и улучшенными свойствами. Новая соответствующая изобретения тетраплоидная; ромашка неожиданно отличается по отношению к до сих пор известным ромашкам или сортам ромашек рядом новых и предпочтительных свойств.

В частности, она более не является вос- .приимчивой по отношению к постороннему опылению естественно встречающимися популяциями ромашек(дикие ромашки), как известный сорт DEGUMILL. По отношению к остальным известным диплоидным ромашкам и по отношению к сортам тетраплоидных ромашек соответствующая предложенному способу ромашка неожиданно отличается более высоким содержанием важного биологически активного вещества (-)-а-бисаболола (по меньшей мере 200 мг%), в то время как содержание остальных бисаболоидов (например, окиси бисаболола) является очень незначительным и меньше чем 50 мг%. Так, например, известные и описанные в литературе сорта ромашек все имеют очень высокое родержание окисей бисаболола, которое как правило составляет приблизительно 50% эфирного масла растительного сырья (т.е. пр 1 %-ном содержании эфирного масла приблизительно 50 мг на 100 г растительного сырья).

Далее, соответствующая изобретению ромашка в противоположность к до сих пор известным сортам тетраплоидных ромашек в отношении ингредиентов является гомогенной, причем свойства ромашек, содержащих хамазулен и (-)- а-бисаболол, являются постоянными (т.е.являются гомозиготными).

Кроме того, соответствующая изобретению ромашка неожиданно отличается от известных сортов тетраплоидных ромашек, например, одним или несколькими из следующих свойств: улучшенная способность семян к прорастанию, меньшая инвизия

используемой травянистой массы (т.е.большой урожай цветков), меньше содержание воды в цветках (т.е. лучший урожай высушенных цветков и более коротки периоды сушки), лучшая пригодность для механизированной уборки, потому что цветки в значительной степени локализованы в одной плоскости и большинство цветков цветут одновременно (вследствие этого также возможен единый срок сбора урожая), лучшая

стойкость растительного сырья (меньшая склонность к распаду и к образованию трухи), особенно ароматный и типичный ромашковый запах. Названные последними преимуществами выступают, например,

когда помимо селекции по содержанию биологически активных веществ происходит еще селекция по одному или нескольким из вышеназванных признаков, из отселекци- рованных растений получают семенной материал, снова проводят селекцию выращенного из этих семян нового поколения и эти мероприятия повторяют 3-5 раз. Задачей изобретения является получение новой тетраплоидной ромашки с улучшейными свойствами, с увеличенным содержанием (-)-а-бисаболола.

Получение новой соответствующей изобретению ромашки происходит посредством того,что

а) тетраплоидизируют известные диплоидные ромашки у которых (-)- а -бисаболол представляет собой основной компонент эфирного масла, проводят селекцию полученных таким образом тетраплоидных растений и снова отбирают из этих отобранных тетраплоидных растений растения, цветки которых, высушенные при температуре 40°С, имеют наименьшее содержание хамазулена равное 100 мг%, наименьшее содержание (-)-а-бисаболола равное 200 мг% и содержание отдельных бисаболоидов менее, чем 50 мг% (сбор цветков происходит в момент времени, когда расцвели 30-70% трубчатых цветков головки) и при необходимости за этим непосредственно следуют дальнейшие прочие операции селекциони- рогания и размножения (например, селекция по материнской линии для вегетативного размножаемого посторонне- го опылителя), или

I б) из известных тетраплоидных ромашек, у которых (-)- а-бисаболол представляет собой основной компонент эфирного ма ;ла, проводят селекцию растений, цветки KOI орых, высушенные при температуре равной 40°С.имеют наименьшее содержание хамазулена равное 100 мг%, наименьшее содержание (-)-а-бисаболола равное 200 мг &-и содержание прочих бисаболоидов не больше, чем 50 мг% (сбор цветков происходи; в момент времени, когда расцвели 30- 70% трубчатых цветков головки), и желании за этим непосредственно следуют дальнейшие обычные операции селекционирования и размножения (например, селекция по материнской родословной для вегетативно размножаемого постороннего опылителя).

(Проводят селекцию пригодных диплот ид шх и тетраплоидных исходных ромашек посредством исследований отдельных растений. В общем необходимо исследовать из одной исходной популяции, например, 1000-10000 растений, чтобы найти отдельные индивидуумы/которые имеют содержа- ни е (-)-а-бисэболола, соответствующее вы неуказанным критериям, и пригодны в качестве исходных ромашек. Из этих вы- бронных индивидуумов обычным способом получают семенной материал,его тетрапло- идизуруют..После завершенного тетраплои- дизирования проводят селекцию теграплоидных растений из прочих диплоидных оставшихся растений. Из полученных таким образом тетраплоидных растений, прр необходимости после предшествующего размножения проводят селекцию всех растений, цветки которых, высушенные при , содержат, по меньшей мере 100 мг% хамазулена, по меньшей мере 200 мг% (-} опбисаболола и меньше, чем 50% прочих бисаболоидов. Сбор урожай этих цветков пр л этом происходит в стадии развития, когда раскрыты 30-70% всех трубчатых цвет- кои голоски. При необходимости за этим могут непосредственно следовать дополнительные операции селекционирования и размножения, которые, например, вызывают улучшение в отношении следующих признаков или свойств: одновременный срок цветения, равномерное, основное ветвле ни|е и узкая зона цветения (т.е. лучшая пригодность к механизированной уборке).

большие головки, лучшая стойкость растительного сырья, особенно ароматный запах.

В случае, если с самого начала происходит из тетраплоидных ромашек, то происхо- . дит лишь заранее указанная селекция таких растений, цветки которых, высушенные при 40°С, имеют, по меньшей мере 100 мг% хамазулена, по меньшей мере 200 мг% (-)-а-бисабололаименьше, чем50мг% прочих бисалоидов, причем также сбор урожая этих цветков происходит в стадии развития, когда раскрыта 30-70% всех трубчатых цветков головки, также и в этом случае при необходимости могут непосредственно следовать дальнейшие операции селекционирования и размножения, из которых как указано выше, вытекают дальнейшие улучшения.

Особенно предпочтительную ромашку получают, тогда, когда селекции по содержанию хамазулена и (-)-#-бисаболола проводят селекцию таких растений (известных и полученных согласно способу), содержание хамазулена, в которых равно, по меньшей мере 200 мг%, предпочтитетельно 250 мг%, а содержание (-)-а-бисаболола, в которых равно по меньшей мере 300 мг%, предпочтительно 400 мг% (содержание прочих бисаболоидов всегда меньше 50 мг%).

Тетраплоидизиррвание может, например, происходить самим по себе известным способом.

Тетраплоидизирование с помощью хи- .мических веществ происходит, например, при температуре между 0 и 35°С, предпочтительно между 12 и 30°С, в частности, между 15 и 25°С.

Применение происходит посредством, например, обработки семян, верхушек побегов, корней (в частности, кончиков корней .или корней проростков), завязей, плоскостей разреза на листьях и стеблях, клеточных суспензий из тк&ни меристем, культур коллуса или также посредством инжекции в прикорневую область стебля или область пазушных почек. Химикалии в общем применяются в виде растворов в воде, слабо спиртовых (содержание спирта, как правило, меньше 5%) или слабокислотных растворов. Водородный показатель слабо кислотных растворов лежим, например, в диапазоне 5.5-6,5, причем подкисление происходит, например, посредством низких органических алифатических кислот, как уксусная кислота. Если применяют спиртовые растворы, то они также могут быть слабо кислотными. Концентрации химикалиев в этих растворах могут, например, быть равны 0,01-0,5%. предпочтительно, 0,02-0,2%, в

частности 0,05-0,1%. Газообразные вещества применяются как таковые при необходимости под давлением (например 1-10 бар). Продолжительность обработки равна, например, 1-36 час, предпочтитительно 2- 12 час, в частности 4-6 час.

Особенно благоприятной является обработка колхицином при температурах 0- 35°С, предпочтительно 12-30°С, в частности, 15-25°С. Это может, например, произойти посредством того, что семена диплоидных исходных ромашек доводят до набухания в 0,01-0,2%-ном, в частности, 0,02-0,1%-ном, предпочтительно 0,05%- ном растворе колхицина или погружают проросшие, в возрасте 5-7 дней, хорошо развитые проростки дисплоидной исходной ромашки (с зародышевыми листками ромашки, направленными вниз) в 0,1-0,2%- ный, в частности, 0,02-0,1 %-ный, предпочтительно 0,05%-ный раствор колхицина. В случае последнего способа отражающая атмосфера должна иметь почти 100%-ную относительную влажность воздуха. Продолжительность обработки колхицином равна, например, 3-36 час, в частности 4-10 час. При применении проростков в общем является достаточной продолжительность воздействия, достигающая 10 час. При использовании семян продолжительность обработки может при известных условиях увеличиться до 36 час.

После обработки химикалиями набухшие семена, проростки или другие части растения несколько раз ополаскивают водой. Набухшие семена, например, высеивают. Растения с обработанными корнями или другими частями, или обработанные проростки пикируют в ящики для растений. Из обработанных таким образом семян или проростков выращивают растения (например, в таблице 3 температура между 18 и 25°С днем и 10-1б°С ночью) и отбирают растения, пыльцевые зерна которых приблизительно в 1,5 раза больше чем пыльцевые зерна исходного -материала, или имеют число хромосом соматических клеток равное 36. Если обработке химикалиями подвергают другие части растений (надземные или подземные части), то более позднему исследованию на прошедшую тетраплоиди- зацию подвергают исключительно происходящие из обработанных частей побеги, корни или цветки/семена. Если, например, предпринимается обработка побега или пазухи, то затем исследуют на число хромосом только происходящий из этой пазухи или из этого отростка новый побег и образованные на нем листья или семена.

Измерения размеров пыльцевых зерен и подсчет хромосом могут например, быть проведены так, как указано в примере 3. Тетраплоидизирование лучами происходит, например, на семена или кончики корней при температурах между 0 и 35°С, предпочтительно 10-30°С, в частности, 15- 25°С. Сумма облучения: 5-50 Крад. Предпочтительными являются гамма-лучи и

0 рентгеновские лучи.

В качестве ультрафиолетовых лучей и в расчет, например принимаются такие ультрафиолетовые лучи, длины волн которых лежат в диапазоне 400-30 нм,

5 предпочтительно 350 нм.

Облученные таким образом растения или части растений затем также подвергают дальнейшей обработке, как после обработки химикалиями.

0 Применение высоких и низких температур.

В качестве высоких температур в расчет, например, принимаются температуры между 33 и 50°С, предпочтительно 42-45°С.

5 Действию этих температур, например, подвергаются набухшие семена, проростки, верхушки побегов и меристиматическая ткань. Продолжительность обработки: например, 1-48 час, предпочтительно 12-24

0 часа.

В качестве низких температур в расчет, например, принимаются: 0-5°С, предпочтительно 0,5-4°С, в частности, 2°С. Воздействию этих температур, например,

5 подвергаются набухшие семена, проростки, побеги и меристематическая ткань. Продолжительность обработки, например, 1-100, предпочтительно 20-40 дней. Обработанные таким образом растения или части рас0 тений также подвергают дальнейшей обработке, как после обработки химикалиями. Декапитирование проводится на молодых растениях на стебле, предпочтительно на конусе прорастания верхушки, после об5 разования от 4 до 6 листьев или также черенках листьев или на боковых побегах. Возникающие ткани коллуса почки или побеги срезают, доводят до корнеобразова- ния, далее, культивируют в горшках и

0 проводят селекцию тетраплоидизирован- ных растений таким же образом, как и при обработке химикалиями.

От цветущих растений собираются трубчатые, цветки, пыльники которых находятся

5 в стадии первого митоза пыльцы. Пыльники забирают из цветковых почек посредством микроманипулятора и переносят в чашки Петри, которые, наполнены, например, питательной средой по hltsch und hitsch (Таб- лица 1). Затем чашки Петри хранят при

температуре днем равной 28°С и при температуре ночью рапной 20°С, причем продолжительность дня составляет 16 час. После приблизительно четырех недель пыльники начинают вскрываться и из них вырастают растения, В случае диплоидной родительской формы они являются гаплоидными, в случае тетраплоидной родительской формы - дигаплоидными, после образования корней их сажают, например в горшки с садовой землей и о теплице доводят до цветения. Эти (ди) гаплоидные растения являются стерильными, однако могут быть полиплоидизировзны посредством обработки химикалиями, причем возникают гомозиготные растения, которые затем могут далее размножаться через семена. Дальнейший образ действия см.при обработке химикалиями (например, обработка колхицином)..

Водородный показатель среды установлен на 5,5

Из отселекционированных посредством измерения размеров пыльцевых зерен и/или подсчета хромосом тетраплоидных растений ромашки, которые могут быть получены согласно вышеописанным возможностям, затем отбирают растения, которые имеют наименьшее содержание хамазулена равное 100 мг%, и наименьшее содержание бизаболола равное 200 мг%, в то время, как содержание прочих бизаболоидов (в частности, окисей бизаболола) должно быть меньше 50 мг% (в пересчете на высушенные цветки, см.пример 1).

Отселекционировэнные таким образом Зрастения после удаления всех уже распустившихся корзинок дают возможность отцвести в теплице при температуре равной 18-24°С днем и 12-14°С ночью и при продолжительности дня равной, по меньшей мере, 14 час, причем за период времени равный 4 неделям с целью получения семем чого материала собирают урожай всех голо- зок, которые отцвели и подошли вплотную к эаспаду. После сушки при температуре воздуха между 20 и 35°С получают, например, Семена репродукции соответствующей изобретению ромашки.

I В качестве дополнительных критериев для этой селекции могут быть еще дополни- уельно применены следующие: а) приблизительно одновременное цве- |ение;

j б) равномерное, основное ветвление и узкая зона цветения равная приблизитель- ijto 10 см, в частности, 5 см, i с) большие головки с внешним диаметром равным приблизительно 30 мм (20-40 фм), в частности 25-35 мм.

Применение дополнительных критериев о), б) и с) ведет, например, к высоким урожаям цветков и растительного сырья и к лучшей пригодности для механизированной 5 уборки урожая.

Если исходят из уже известных тетраплоидных ромашек, то вышеописанная селекция, а также при желании дополнительные операции селекции и раз- 0 множения происходит аналогичным образом.

Последовательность посев-селекция, согласно вышеуказанному наименьшему содержанию хамазулена равному 100 мг% и 5 (-)-«- бизаболола равному, по меньшей мере 200 мг%, (другие бизаболоиды меньше 50 мг%), а также при известных условиях согласно дополнительным критериям а)-с) - получение семенного материала, может по- 0 вторяться 3-5 раз.

За этим еще раз непосредственно следует последовательность посев - как указано выше селекции (при известных условиях клонирование) - получение семенного мате- 5 риала.

П р и м е р 1 (исходная ромашка является тетраплоидной).

Посредством индивидуальных, испытаний 10000 растений сорта тетраплоидной 0 ромашки на изменчивость, который был описан I. Sarkany (Herba Hungar, 4 (I). 125- 169(1925). было обнаружено, что на приблизительно 100 индивидумов приходится одно растение, которое в эфирном масле имеет 5 высокое содержание хамазулена, равное 20 весовым %, а также весовое содержание (-)-#-бисаболола, равное 50 весовым %, причем одновременно содержание прочих бисаболоидов (в частности, окиси (-)-#-би- 0 саболола) является весьма малым (меньше, чем 5 весовых %). Была проведена селекция этих индивидуумов, и они были подвергнуты следующим операциям:

Операция 1

5 Из последующего поколения отселекци- онированных (как описано выше) тетраплоидных растений ромашки были отобраны индивидуумы, которые

а) приблизительно одновременно цве- 0 тут,

в) имеют равномерное, основное ветвление и узкую зону цветения, равную приблизительно 10 см, предпочтительно 5 см.

с) имеют большие головки с внешним 5 диаметром, равным приблизительно 30 мм, предпочтительно 25-35 мм,

д) достигают или превосходят наименьшее содержание хамазулена, равное 150 мг . % и бизаболола, равное 300 мг%, а содержание в них прочих бисаболоидов (в частности, окиси бесаболола) является меньше 50 мг%. Все значения относятся к головкам, которые были высушены при 40°С и сбор которых происходил в стадии, когда раскрыты 30-70% всех трубчатых цветков головки.

Эти растения были клонированы. Для этого растения (кленовые материнские растения) были укорочены прежде всего на приблизительно 15 см длины побега, и при длине дня, равной 8-10 час и при температуре, равной 12-14°С были доведены до образования нового побега (короткие боковые побеги). Короткие побеги были обрезаны и посажены в смесь торф-песок. При приблизительно 100% относительной влажности воздуха, температуре воздуха, равной 15°С и продолжительности дня, равной 14 час, корнёобразование черенков продолжалось 7-14 дней.

Вместо указанного обычного клонирования (размножение черенками) может также быть использовано размножение в колбе- способных к делению частей ткани растений (так называемое размножение растений методом культуры меристем). Для установления культуры ромашки пригодны различные части растений, предпочтительно верхушки побегов или пазушные почки.

После промывки растений с помощью Н20з удаляют при асептических условиях в ламинарном потоке (высокоэффективный фильтр взвешенного вещества со слабым турбулентным напорным потоком) верхушки побегов пазушных листьев и переносят в пробирках, которые наполнены питательной средой, например, по murashige und SKoog (Physiol.Plant 15, 473-497,1962). Пробирки помещают в кондиционируемое помещение при условии продолжительности дня, равной 12-18, предпочтительно 16 час (достигается посредством флюоросцентно- люминесцентных трубок), интенсивности света, равной 500-10000 люкс, предпочтительно 1000-3000 люкс и температуре, равной 15-30°С, предпочтительно22 27°С.

Как только эксплантаты показывают хороший рост, их переносят на вышеназванную питательную среду, однако, с большей концентрацией цитокинина (цитокининами являются фитогормоны, которые требуют клеточное деление) (например, 30 мг/л 6- изопентениладенина) и с небольшим количеством ауксина или вообще без ауксина (0-0.3 мг/л индолилуксуной кислоты. Впоследствии пазухи растягиваются и образуются придаточные органы и в большом количестве пазушные почки). Они могут быть вышеуказанным образом удалены и выращены.

Предназначенные для размножения растения в большем количестве эксплантаты (3-ий пересев 3-ему поколениюразмно- жения) после/увеличения и формирования

листьев на вышеназванной питательной среде переносят на питательную почву, которая содержит 10 мг/л индолилуксусной кислоты или 3 индолилмасляной кислоты или 0,1-0,3 мг/л а -нафтилуксусной кислоты. При этом у растений происходит корнёобразование и после приблизительно 4 недель они могут быть посажены в горшки, наполненные стерилизованной садовой землей (пропаренная в течение 12 ч при

температуре, равной 120°С) и далее, культивированы в теплице (при условиях, которые являются обычными для традиционного размножения черенками( табл. 2).

Операция 2

Полученные после операции 1 растения совместно отцветают при изолированных условиях в теплице. Растения при этом стояли в 11-см-ых горшках, наполненных садовой землей, при температуре, равной 18-24°С днем и 12-14°С ночью. Продолжительность дня равнялась приблизительно 14 час и в зимнее время года достигалась посредством дополнительного освещения

(200 Вт/м ). Водоснабжение происходило, по потребности.

Из совокупности отселекционирован- ных индивидуумов непрерывно собирали за временный промежуток, равный 4 неделями

те головки для получения семенного материала, которые отцвели и были незадолго до распада. Сушка происходила в хорошо вен- тилируемом помещении при температуре воздуха между 20 и 30°С, затем семенной

материал был отсеян посредством щелевого сита 5x0,4 мм) и дополнительно очищен посредством вертикального пневмосепарато- ра.

Операция 3

Из полученного после операции 2 семенного материала была взята выборочная проба и из нее выращено приблизительно 2000-ное последующее поколение (экологические условия как в случае операции 2) и

отселекционировано по тем же критериям а)-д) операции 1. С отселекционированны- ми, таким образом, индивидуумами затем поступили согласно операции 2. Операция.4

Из семенного материала согласно операции 3 одна часть была осенью посеяна на двух различных участках. Участок I)

450мм, NN1 48.5° N2/115° О3 сумма годовых осадков равна 750 мм,

влажно умеренный климат

температура в январе от -10 до 0°С.

температура в июле от +10 до +20°С,

Участок II)

200м, NN, 42°М/1°С,

сумма годовых осадков равна 400 мм,

среднеземноморский климат, j температура в январе от 0 до +10°С, температура в июле от +20 до +30°С.

Посев происходил на обоих участках в конце сентября/начале октября.

Полученные, таким образом, насаждение для полевых опытов проверяли и расценивали (оценивали) в отношении гомогенного роста, размера цветков и сбора урожая, кроме того, были исследованы выборочные пробы цветков на содержание биологически активных веществ. Из полевого насаждения были снова отобраны те индивидуумы, которые соответствуют параметрам, названным в операции 1. Из них получают семенной материал согласно операции 2, последнее предложение.

1 - NN-северный нормальный нуль - урс вень моря,

j 2° - N северная широта (н град) 3° - О - восточная долгота (н град)

Операция 5

С семенным материалом согласно операции 4 были повторены операции 3 и 4 в указанной последовательности и указанным способом.

Операция 6

Из полученного согласно операции 5 семейного материала были выращены приблизительно 1500 индивидуумов (экологические условия такие же, как и в случае операции 2} и отселекционированы по тому же принципу, как указано в случае операции 1. Из отселекционированных, таким образом, растений были отобраны 34 индивидуума и клонированы согласно операции 1. По 10 растений каждого клона были посажены в случайном распределении на рафтоянии 40x30 см на открытом грунте (участок 1, см операцию 4) в изолированном месте. Почвой был лесовидный суглинок, водородный показатель был равен 7,0. посадка происходила в начале июня, первый урожай семян в середине июля, после этого растения были снова обрезаны, расцвели еще раз и дали в середине/конце августа второй урожай семенного материала.

Получение семян этого материала про- исх рдило согласно операции 2.

|Полученный. согласно операции 6 се- менИой материал является семенным мате- риа|пом соответствующей изобретению ромашки.

Цветки растений из двух семян репродукции (посев сентябрь) (октябрь, урожай начало июня следующего года), которые были собраны в момент времени, когда рзс 5 .крыты 30-70% трубчатых цветков, и которые затем немедленно были высушены в сушильном шкафу при температуре 40°С в течение 72 час, содержат, в пересчете на вес высушенных цветков (сухое вещество), на10 пример, по меньшей мере: 150 мг% хамазу- лена, 300 мг% (-)- а -бизаболола и не более 50 мг% прочих бизаболоидов.

Другие примерные данные соответствующей изобретению ромашки:

15 1.Рост

Стебель: вертикальный, незначительно разветвлен,

Лист: 2-3-кратно перистораздельный 0 Толщина: средняя

Перистый лист, цвет среднезеленый. Перистый лист (середина стебля), пери- стость: от средне до сильно перистого

5 Корзинка (головка)

приблизительно 30 мм внешний диаметр,

приблизительно 15 мм внутренний диаметр,

0 вес единственной (высушенной) корзинки приблизительно 45 мг,

цветоносный побег, длина (мм): приблизительно 700, однако зависит от места возделывания (климат), срока посева, почвы, 5 удобрения, обработки растения, погоды.

начало цветения (день с 1-го января) приблизительно. 160-ый день (посев в сентябре, участок Фрайзинг, ФРГ, в противном случае в зависимости от вышеуказанных 0 факторов)

Цветение: с середины июня (см.выше), соцветие без стебля, содержание эфирного масла (% от сухого вещества), прибли- зительно 1,0%. содержание азулена в 5 эфирном масле: по меньшей мере 15%

распад высушенного соцветия, цветковое сырье: незначительный, если урожай был собран перед раскрытием последнего трубчатого цветка, 0 диаметр в пыльцевых зерен 30 Мм,

длина семян, приблизительно 1.25 мм число хромосом соматических клеток: 4п 36,

5 тысячезерновая масса (ТКМ) семян, 0,06-0.13 г,

7, Другие признаки:

соотношение усушки свежий: сухой (цветок) От 5,5 до 6:

характерный ароматичный запах растительного сырья, тонкий ароматичный, типичный вкус чайного настоя

Кроме того могут иметь место следующие свойства: единая высота растений (уравненность) с узкой зоной цветения, поэтому особенно пригодны для механизированного сбора урожая, большие головки, средневысокий урожай, основательно (3-5 кратно) разветвленная форма.. .

Формула изобретения

Питательная среда no hitsch und hitsch/Scienceiges/

образом короткие побеги высаживают при относительно высокой влажности воздуха и температуре 15°С в трофическую спесь или путем размножения меристем, при котором вершины побегов или пазушные почки помещают на питательную среду и культивируют при температуре 15-30°С, а затем культивируют при относительно высокой влажности воздуха и температура около 15°С, полученным таким образом растениям дают отцвести в изолированных условиях в течение нескольких недель, снимают головки, которые находятся в стадии вегетации и 30-70% трубчатых цветов головок соцветий раскрыты, из полученного посевного материала потомство выращивают в изолированных условиях при температуре 18- 24°С, ночной температуре 12-14°С, в случае необходимости при дополнительном освещении, далее из полученных растений отбирают те растения, которые цветут в одно и тоже время, имеют равномерное основное жилкование, величину головок соцветий от 20-40 мм, а также содержание 100-250 мг% 5 хамазулина, 50-400 мг% (-)- а -бисаболола и менее 50 мг% прочих бисаболоидов, из отобранных растений вновь получают посевной материал, в случае необходимости из этого посевного материала выращивают растения в различных местностях и производят, дополнительную селекцию по тем же критериям, повторяя указанные приемы 4-6 раз.

5

0

0

5

0

Таблица 1

;NazMo04 x 2НаО

;CuS04x5H20

мл раствора из 7,45 г динатриевой соли этилендиаминтетрауксус- ;ной кислоты и 5,57 г FeSCM x7H20 на

миоинозита

Глицин

Никотиновая кислота Пиридоксин - HGI

Тиамин - HCI

Фолиевая кислота

Биотин

Сахароза

Готовая питательная среда

piFCO-бакто-агар :Индолилуксусная кислота

Питательная среда по Murashlge Skoog, мг/л:

NH4N03

Са(ЫОз)2 х 4НаО

КЫОз

КН2Р04

MgS04x7H20

КС aFe Этилендиаминтетрауксусная кислота

НзВОз

MnS04 x 4HaO ZnSCM x 7H20

KI

Индолилуксусная кислота Фурфуриладенин

Тиамин Никотиновая кислота

Продолжение табл. 1

0.25 0.025

000мл 100

2

5

0,5 0,5 0,5 0,05 20 г

8г 0.1

Таблица 2

400 144 80 12.5 72 65 25 1.6 6,5 2,7

2,0 0,1 0.1 0,5

Пиридоксин

Глицин

Миониозит

Гидролиз казеина

Сахароза Очищенный агаровый порошок

Продолжение табл. 2

0.5

2,0

100

1000

2%

1%