"Способ получения комплекса липидов "тимихол" из животного сырья" Советский патент 1993 года по МПК A61K35/24 A61K31/685 

м

Ф

TV

Изобретение относится к химико-фар- цевтической промышленности, а получа- ый комплекс липидов может пользоваться в медицине как средство,

способствующее очищению гнойной раны, генерации мягких тканей, реорганизации бца и эпителизации раневой поверхности словиях нарушенной трофики.

Новый способ предлагает использовать очестве сырья вилочковую железу круп- го рогатого скота и включает следующие ерации: измельчение и гомогенизация

сЦрья в физиологическом растворе, отделе- е жидкой фазы (центрифугирование), при )м обрузуется осадок и супернатант с

отирующей липидной фракцией, из фло- )ующей липидной фракции экстрагироваизопропанолом комплекса липидов. отделение твердой фазы (центрифугирование или декантация), растворение в гексане

биологически активных липидов, центрифугирование, концентрирование супернатан- та (вакуумная отгонка гексана) и сушка конечного продукта.

Получаемый комплекс биологически активных липидов содержит следующие компоненты, %: глицериды 30-45, глицерофосфаты 40-70, холестерин (в свободном и этерифицированном состоянии) 1,5-4, неомыляемые вещества 3-5, жирные насыщенные кислоты при массовом отношении к ненасыщенным 2:1.

В настоящее время вилочковую железу используют нерентабельно, исключительно как сырье для получения иммунокоррегиру- ющих белковых препаратов типа вилозен, тималин, тактивин, при этом выход целевого продукта составляет 5-7% от веса сырья. Новый способ позволяет, не исключая параллельного выделения указанных

СО

о о о

GO

белковых препаратов, получать липиды за счет оптимальной утилизации фракций гомогенизированного сырья после центрифугирования: супернэтант -- для выделения вышеуказанных препаратов, флотирующая липидная фракция - для выделения нового липидного комплекса.

Следовательно, использование вилоч- ковой железы для выделения комплекса ли- п и д о в, несмотря, на разнообразие источников сырья, является решением неординарным и рациональным, Новый комплекс липидов, выделенный из богатой на широкий спектр липидов флотирующей фракции путем экстракции изопропэнолом, центрифугирования, экстракцией липидов из осадка гексаиом, повторного центрифугирования и концентрированиясупернзтан- та, обладает лечебным эффектом - ускоряет процесс регенерации мягких тканей.и оказывает бактерицидное действие us инфицированные рань:.

Изобретение иллюстрируется примерами конкретного выполнения способа {примеры 1-3) и испытания биологической активности получаемого продукта (примерь: 4-6).

Пример 1.10 кг вилочковой железы измельчают на мясорубке с диаметром фильеры 2 мм,.гомогенизируют в двух объемах физиологического раствора, центрифугируют 80 мин при 3000 об/мии и температуре -4°С в рефрижераторной центрифуге. Получаемый супернатлнт используют для выделения препаратов типа Вилозен, Из флотирующей фракции су- пернатанта .экстрагируют комплекс липидов и з о п р о п а о л ом в соотношении гомогенат : спирт 1:5 о течение 2 ч при комнатной температуре, затем снова центрифугируют при 3000 об/мин. 30 мин. Осадок смешивают с гексаиом в соотношении 1:10, проводят реэкстракцию при перемешивании в течение 3 ч при комнатной температуре, а затем оставляют на 16ч для разделения фаз. Надосадочную жидкость декантируют, растворитель удаляют вакуумной отгонкой, комплекс биологически активных липидов сушат. Целевой продукт составляет 5% от веса железы или 25% от флотирующей фракции гомогената. Полученный липидный комплекс тимихол содержит 45% глицеридов, из них 11% моноглицеридов, 12% диглицеридов, 22% триглицеридов, 1,5% холестерина и 54,5% глицерофосфатов, в составе которых 30% фосфолипидов и 70% Јщ;ен-1-иловых эфи- ров глицерина.

Пример 2. Все операции по получению флотирующей фракции проводят согласно описанию примера 1. Флотирующую фракцию обрабатывают изопропанолом в соотношении 1:5 в течение 30 мин при 25- 30°С с последующим центрифугированием

при 3000 об/мин, 30 мин и отделением цен- трифугата. Из осадка липиды экстрагируют гексаиом в соотношении 1:7 в течение 2 часов при 40°С, снова центрифугируют при 3000 об/мин, в течение 30 мин. Из суперна0 танта удаляют гексан вакуумной отгонкой, а затем сушат получаемый комплекс биологически активных липидов. Целевой продукт составляет7% веса железа и30% веса флотирующей фракции гомогената. Получен5 ный липидный комплекс тимихол содержит 36% глицеридов, из них 6% моноглицеридов, 9% диглицеридов и 21% триг- яицеридов, 4% холестерина и 60% глицерофосфатов,

0 При м е р 3, Все операции по получению флотирующей фракции проводят согласно описанию примера 1. Из флотирующей фракции экстрагируют ли- пидные компоненты изопропанолом в соот5 ношении к растворителю 1:5 в течение 1 ч

при комнатной температуре. Смесь центри. фугируют при 3000 об/мин, 30 мин. Осадок

ресуспендируют с гексаиом в соотношении

1:5. Экстракцию проводят при перемешива0 нии в течение 2 часов при 45°С, снова центрифугируют при 3000 об/мин, в течение 30 мин. Из супернатанта удаляют гексзн в.аку- умной отгонкой, а затем сушат получаемый комплекс биологически активных липидов.

5Целевой продукт составляет 7% веса

железы и 30% веса флотирующей фракции из гомогената.

В составе целевого продукта: 30% глицеридов, из них 5% моноглицеридов, 8%

0 диглицеридов и 17% триглицеридов; 3%-хо- лестерина, остальные липиды представлены глицерофосфатами: 25% фосфолипидов и 75% ал кен-1-иловых эфиров глицерина. Пример 4. Больной А., 28 лет. Диаг5 ноз: компрессионный перелом Cs позвонка, осложненный повреждением спинного мозга. Травма 10-ти месячной давности. Отсутствие движений в нижних конечностях, нарушена функция тазовых органов. У боль0 ного пролежни в области крестца 5x6 см и в области вертела 4x5 см, оперативное закрытие швами которых и аутодермопластикой были безуспешными. Местное лечение на первом этапе осуществляют Ируксолом и

5 Левосином. После очищения ран, когда применение указанных мазей становится нецелесообразным, так как они задерживают рост грануляций, которые приобретают мелкозернистый вид м становятся тусклыми, применяют препараты, стимулирующие

i регенеративные процессы в райе. Для ускорения роста грануляций и эпителизации (тканей пролежень в области крестца обра- |батывают новым комплексом липидо в ти- |михол, а пролежень в области вертела винилином - бальзам Шостаковского (контроль) в течение 3 недель ежедневно один раз в день, В конце указанного срока про- Ьежень в области крестца полностью зажил, а в области вертела (контроль) уменьшился по площади всего на 50%.

Пример 5. Больной Б., 42 года. Диагноз: компрессионный перелом тозвонков, синдром полного поперечного повреждения спинного мозга. Травма 17- тетней давности.

Пролежни размером 2x3 см на правой и левой ягодицах, вялое, малосимптомное зазвитие нагноения. В раневом отделяемом иыявлена ассоциация протея и энтеробак- ерий. Общее небольшое недомогание, Стойкий и длительный субфебрилитет, снижение показателей клеточного и гуморального иммунитета. На первом этапе проводят курс иммунотерапии с использо- аниемтактивинэ, декариса, а пролежни ле- . Чат обычным методом с применением антибиотиков, протеолитических ферментов, препарата Ируксол. После очищения гролежней от некротических тканей и ис- чезновения в отделяемом протея и энтеро- бактерий в течение 2-х недель, ежедневно, один раз в сутки пролежень на левой ягодице обрабатывают облепиховым маслом (Контроль), а на правой новым комплексом липидов тимихол. Последний обеспечи- вЬет более быструю регенерацию клеток тканей, способствуя росту грануля- лй и ускоряя эпителизацию. Так, в течение

Ц 2 ю

х недель под действием нового липидного мплекса происходит полное заживление

р|жы, тогда как при лечении облепиховым м эслом (контроль) пролежень уменьшается по площади только на 70%, но не зэрубцошается в те же сооки.

Пример 6. Больной В., 27 лет. Диаг- нфз: переломо-вывих Ths-Thn позвонков с повреждением спинного мозга. Травма давностью Т месяц. В области крестца проле- жонь размером 4x7x3,5 см. Из отделяемого пролежня высеяны протей и кишечная па- лс|чка (10 /мл), чувствительные к гентамициHV

хлоргексидину, рифомпицину и

5 10

15

20 5 0 5

0

5

0

фуразолидону. Местное применение 0,02% хлоргексидина для промывания раны и Ле- восина в течение недели, ежедневно, один раз в сутки позволяет снизить число микробов до 103 на мл отделяемого. Последующее ежедневное применение один раз в сутки нового комплекса липидов тимихол для лечения пролежня способствует положительной динамике бактериологических исследований, полному исчезновению гиберодной микрофлоры к концу 1-й недели, появлению грануляций. За последующие 2 недели возбудители не высеваются ни разу, а пролежень уменьшается в размерах до 2.5.1,5 см, т.е. рана подготовлена к оперативному закрытию швами или аутодермоп- ластикой. После хирургического закрытия рана заживет первичным натяжением, что соответствует состоянию неинфицированной раны.

Результаты клинических испытаний показывают преимущество использования нового комплекса биологически активных липидов по сравнению с известными аналогами: облепиховое масло, бальзам Шостаковского, которое заключается в ускорении регенерации мягких тканей, реорганизации рубца и эпителизации раневой поверхности, заживлении ран первичным натяжением после хирургического лечения раны за счет улучшения антибактериального состояния раневой поверхности.

Формула изобретения

1.Способ получения комплекса липидов тимихол из животного сырья, включающий измельчение сырья, экстракцию органическим растворителем, отделение су- пернатанта центрифугированием с последующим концентрированием отгонкой целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве сырья используют вилоч- ковую железу крупного рогатого скота, которую после измельчения гомогенизируют в физиологическом растворе, флотирующую фракцию супернатанта экстрагируют изо- пропанолом, дополнительно центрифугируют и осадок, содержащий целевой продукт, растворяют в гексане.

2.Способ по п.1,отличающийся тем, что экстракцию супернэтанта изопро- панолом и растворение осадка в гексане проводят в соотношении 1:5-10.