Настоящее изобретение относится к сНособу получения новых фармацевтических композиций (форм), предназначенных дг я применения через нос.
Предпосылки настоящего изобретения.
В то время, как неагрессивное применение препарата прямокишечным или стоматическим способом является безусловно наиболее удобным для пациента, паренте- льное высвобождение лекарственных пр епаратов является в общем случае самым эффективным, В частности, лекарственные препараты, которые дезактивируются в же- луцочно-кишечном тракте или слабо в нем поглощаются, и лекарственные препараты, которые подвергаются широкому вовлечена ю в гепатический метаболизм после сто- мгтического применения, в общем случае применяются парентерально.
Имеются очевидные неудобства, свя- с парентеральным применением ле- кгрственных препаратов, такие, как необходимость в стерильных средствах для их высвобождения, боли и раздражения, вызываемые повторными инъекциями, и потенциальный риск внесения инфекции. Таким образом, ощущается необходимость в альтернативных средствах доставки лекарственных препаратов, равных по эффективности парентеральному применению в том смысле, чтобы обойти первый цикл процесса метаболизма. Одной такой потенциально многообещающей альтернативой является применение лекарственных препаратов через нос. Однако, как и в случае с другими способами неагрессивных применений медикаментов, биовосприимчивость препарата после применения в нос в значительной степени не предсказуема и зависит, среди прочего, от химической природы этого препарата.
Так, известно, что прогрестерон и пропра- нолол абсорбируются из носовой полости таким образом, что при этом обеспечиваются такие их концентрации в крови, которые почти равны концентрациям при внутривенном введении.
(Л
С
00
ы
XI
со о
ч
со
Известны также другие примеры композиций для введения через нос фармацевтически активных агентов с молекулярными весами до примерно 1 кД, например, композиции, содержащие зргопептидные алкалоиды, растворенные в водном этаноле, применяемые в форме аэрозолей (патент Швейцарии № 636011), соли фармацевтически активных аминов с жирными кислотами (патент Канады Ns 988652) и катехоламин, суспендированный в жирной кислоте (или сложном эфире), эмульгируемой полиоксиэ- тиленом (Европейская патентная публикация № 0160501 А).
В последние десятилетия были предложены самые разнообразные (главным образом синтетические) полипептидные лекарственные препараты.. В общем случае, полипептиды применяли парентерально из- за неполного поглощения в пищеварительном тракте и из-за их нестабильности в нем. В этом видимо заключается причина, почему в конкретных исследованиях достатки лекарственных препаратов через нос (в частности полипептидов) в течение последних лет усилия были интенсифицированы. Было установлено, что в то время, как некоторые полипептиды меньших размеров (до примерно 10 аминокислотных остатков) могут вполне эффективно поглощаться через нос из простых водных композиций, в общем случае биовосприимчивость при применении через нос полипептидов больших размеров становится неполной и нестабильной, причем этот эффект возрастает с увеличением молекулярного веса (см.обзор Л.Иллума: Archtv for Pharmaci og Cheml,T.94(1987), с. 127-135).
С тем, чтобы преодолеть те недостатки, которые возникают, в частности, при доставке через нос лекарственных препаратов, содержащих полипептиды больших размеров, были предложены дополнительные добавки, самые разнообразные биосовместимые агенты, промотирующие поглощение, или так называемые усилители.
В этой связи следует указать Европейскую Патентную Публикацию № 0111841 А, в которой описан эффект усиления поглощения желчной кислоты, и патент США № 4476116, в котором предложено использование хелатообразующих агентов таких, как ЭДТК.
Композиции для применения через нос, предназначенные для доставки инсулина, были бы, разумеется в высшей степени предпочтительными для пациентов-диабетиков, зависящих от инсулина, по сравнению с доступными в настоящее время
формами для парентерального применения при условии, что инсулин достаточно эффективно поглощается из носовой полости и с постоянной скоростью. Для таких компози- ций были разработаны самые разнообразные агенты, увеличивающие поглощение, главным образом поверхностно-активные агенты.
В патенте Великобритании N; 1527605
были предложены .ионные, а также неионные поверхностно-активные агенты-усилители, такие, как соли желчной кислоты и простые эфиры высших полиоксиэтилено- вых спиртов в то время, как применение
5 специального простого эфира высшего по- лиоксиэтиленового спирта, а именно, поли- оксиэтилен-g (лаурилового простого эфира, описано в статье Р.Залцмана и др., Nev England J.of Med.,T.312 (1985) c.1078-1084).
0 Другие усилители, например, соли тауро- дигидрофузидовой кислоты, предложены в патенте США Ns 4548922.
Химическая структура усилителей, известных до настоящего времени, значительно
5 отличается от структуры известных составляющих клеточных мембран, включая тех, что содержатся в носовой полости. Это свойство может быть служит объяснением их тенденции вызывать раздражения носо0 вой полости или даже постоянное воспаление носовой оболочки, в частности, при хроническом применении.
По этой причине можно было бы рассмотреть использование усилителей бо5 лее родственных другим физиологически встречающимся поверхностно-активным агентам такие, как фосфолипиды. Однако, согласно данным, приведенным в патенте Великобритании № 1527605 (см,выше), фос0 фолипиды в широко распространенной смеси лецитинов с длинными цепями не проявляют усиливающее поглощение действием в инсулиновых композициях для применения через нос.
5 в настоящее время неожиданно было установлено, что фосфатидилхолины и фос- фатидилэтаноламины со средней длиной цепи значительно ускоряют поглощение через нос фармацевтических активных соеди0 нений, в частности, полипептидов, не причиняя при этом вреда или раздражений носовой слизистой оболочки. Поглощение через нос также увеличивается при использовании форм, в которых жировое масло,
5 например, растительное масло смешивают с фосфолипидом.
Краткое описание изобретения. Предлагается способ получения композиции для применения через нос, содержащей фармацевтически активный агент и
си д
пид
стему, увеличивающую поглощение, ржащую по крайней мере один фосф общей формулы (I):
K-CH-OR
сн-ок
i
мг
Н-СН-0-РСО) (OH)-OR
в которой R и R, которые могут быть как олинаковыми, так и различными, каждый выбирают из группы, состоящей из водоро- дг,алкила,алкенила,алкилкарбонила,алке- нилкарбонила и алкадиенил-алкатриенил- лг и алкатетраенилкарбонила, содержащего дс 14 атомов углерода (общее количество) пси условии, что оба R и R не являются всдородом, a представляет гидрофильную составляющую, выбранную из группы, ссстоящей из 2(триметиламмонио)этила, 2- алгиноэтила, 2-карбокси-2-аминоэтила, 2,3- дюксипропила и пентаоксициклогексила, содержащих, таким образом, фосфатидило- вь е производные холина (лецитина), этано- ламина, глицерина, серина и инозитов, соответственно. Не обязательно, но предпочтительно, система, увеличивающая по- гл эщение, также содержит жировое масло в CNecn с фосфолипидом (фосфолипидами).
Способ получения композиции включает диспергирование по крайней мере одного фосфолипида общей формулы (I), не обязательно, но предпочтительно смешанного с жировым маслом, в жидком или твердом разбавителе вместе с фармацевтически активным агентом либо в растворе, либо в порошкообразном состоянии, причем вышеупомянутый разбавитель может (не обязательно) содержать вспомогательные рН -буферирующие, консервирующие и регулирующие осмотическое давление агенты.
Предпочтительные варианты реализации настоящего изобретения и его подробно
э описание.
Предпочтительный подкласс соединений формулы (I) образуют соединения, в которых R и R каждый является ал(илкарбонилом.
Еще один предпочтительный подкласс об эазуют соединения формулы (I), в которой представляет 2-(триметиламмонио)этил, эти соединения известны под названием ледитины. Еще более предпочтительный подкласс образуют соединения формулы (I), в которой R1 и R каждый представляет алкилкарбонил или алкил, содержащий от примерно 4 атомов углерода, в предпочтительном варианте до не более 12 атомов
углерода. Самый предпочтительный подкласс соединений формулы (I) образуют соединения, в которых R и R каждый представляет нонилкарбонил.
Предпочтительным является использование смеси двух фосфолипидов формулы (I), в предпочтительном варианте в весовых пропорциях от 1:10 до 10:1, в более предпочтительном варианте от 1:2 до 2:1. Одним из
этих двух фосфолипидов может быть соединение, в котором R и R оба являются окта- ноилом, деканоилом или лауроилом. Вторым из этих двух фосфолипидов может быть соединение, в котором один из двух
заместителей R и R является водородом, а второй из двух заместителей R и R является октаноилом, деканоилом или дауроилом (додеканоилом).
Примерами предпочтительных соединений формулы (I) являются:
диоктаноил L- а - фосфатидихолин, ди- октил-0-L- а -фосфатиидилхолин, дидекано- ил L- а -фосфатидилхолин, дидецил-0-L- а -фосфатидилхолин, децил-0-L-a -лизофатидилхолин, дилауроил L-a -фосфатилилхо- лин, лауроил L-a -лизофосфатидилхолин.
Получение нескольких соединений формулы (I) было известно ранее, например, Е.К. Роблес и Д. Ван Ден Берг: Biochim
Biophgs.Acta, т.187{1969), стр.520-526. Г.К. Мэнголд и Ф.Палтауф (Редакторы) в книге Липиды простых эфиров, Гл.З, Акад.Пресс 1983 г. Другие соединения формулы (I) могут быть получены аналогичными методами.
Жировое масло, которое не обязательно вводят в систему увеличения поглощения, являющуюся предметом настоящего изобретения, в предпочтительном варианте является растительным маслом, в более
предпочтительном варианте соевым маслом, арахисовым маслом, кокосовым маслом, маисовым маслом, оливковым маслом, подсолнечным маслом или их смесями, В еще одном предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения фармацевтически активным агентом является полипептид.
Одной группой предпочтительных полипептидов является инсулин и производные инсулина, например, инсулин, модфицированный химическими или ферментными методами, или при помощи технологии рекомбинантной ДНК, или смеси таких инсулинов, проинсулина и глюкагина,
Еще одними предпочтительными полипептидами являются паратироидный гормон, антагонист паратироидного гормона, каль- цитомин, вазопрессин, ренин, пролактин, гормон роста, тироидный стимулирующий
гормон, кортикотропин, фактор, высвобождающий кортикотропин, гормон, стимулирующий фолликулы, лютеинизирующий гормон, хорионный гонадотропин, атриаль- ные пептиды, интерферон, плазминогенный активатор ткани, гаммаглобулин, фактор УП, фактор УГ, гормон, высвобождающий гормон роста, соматостатин и холецистоки- ны.
Композиции могут быть получены жидкими, например, предназначенными для применения в виде струи, или твердыми, например, порошок, предназначенный для вдыхания. Полученные жидкие композиции такие, например, которые основаны на водных формах, будут в общем случае включать вспомогательные агенты, например, рН-бу- ферирующие системы, и предпочтительном варианте такой буфер, как фосфатный, цит- ратный или ацетатный буфер, консервирующие и регулирующие осмотическое давление агенты, например, глицерин или хлорид натрия. Полученные порошкообразные композиции могут содержать фармацевтически активный агент и систему, усиливающую поглощение, в смеси с приемлемыми для применения через нос порошкообразными разбавителями или их смеси, например, целлюлозу или ее производные, например, простые эфиры целлюлозы или натрий карбоксиметилцеллюлозу, крахмал, жирную кислоту с длинной цепью или ее соль, например, стеарат алюминия, органический полимер, например, производного акриловой кислоты или неорганические растворители такие, как тальк или диатомовая земля. Для улучшения адгезии порошкообразной композиции со слизистой оболочкой носовой полости может оказаться необходимым использовать дополнительные добавки абсорбирующих воду полимеров, например, полиэтилен гликоля или поливинил пирролидона.
Жидкие композиции, в которых разбавителем является вода могут быть получены при помощи диспергирования системы, увеличивающей поглощение, в водной среде, содержащей фармацевтически активный агент и вспомогательные агенты, диспергирование осуществляют при помощи любого приема, который в общем случае используют для суспендирования или эмульгирования, например, при помощи обработки ультразвуком. Регулирование водной фазы вблизи нейтральности (например, с рН в области от примерно 6,5 до примерно 8) может быть осуществлено на любой из подготовительных стадий. В предпочтительном варианте получают микроэмульсии, в которых размер диспергированных частиц или
капель составляет порядка 10 нм, при этом облегчается их переход через слизистую оболочку носа. Такие микроэмульсии могут быть стерилизованы при помощи фильтрации. Содержание фосфолипида формулы (I) и жирового масла в предпочтительных композициях (формах), являющихся предметом настоящего изобретения, изменяется в области от 0,01 до 10% в предпочтительном
0 варианте от 0,5 до 5% (в/о) и от 0,01 до 50%, в предпочтительном варианте от 0,1 до 10% (в/о), соответственно, от всей композиции. Ввиду того факта, что в слизистой оболочке носа содержится протеазы и петидазы
5 (см.Р.Е. Стрэтфорд и В.Г.Л. Ли. Int.Jeurn.Pharmceutis, т.ЗО (1986), стр.73- 82), может оказаться желательным ввести биосовместные ингибиторы протеазы и пеп- тидазы в композиции, содержащие пол0 ипептид.
Концентрация фармацевтически активного агента будет разумеется, зависеть от конкретного выбранного агента, от его эффективности, от сравнения его биовоспри5 имчивости при применении через нос и при применении другими способами, например, при помощи парентеральной инъекции и от необходимой частоты применения вместе с необходимой одной дозой композиции. Та0 кие фармакологические данные могут быть получены при помощи приемов, известных каждому специалисту в этой области, например, в результате экспериментов на животных, например, в терминах индексных
5 величин таких, например, которые оценивают для композиций инсулина в примерах, приводимых ниже.
Если взять инсулин в качестве примера, то его концентрация в композиции, являю0 щейся предметом настоящего изобретения, может изменяться в области от примерно 5 до 1000 международных единиц (М.Е.) на мл, в предпочтительном варианте от 50 до 500 М.Е. на мл.
5 В инсулиновые композиции предпочтительном варианте включают бычий, свиной или человеческий инсулин.
Иллюстрирующий процедурой получе-. ния инсулиновых композиций, являющихся
0 предметом настоящего изобретения, в которых разбавителем является вода, является процедура, содержащая растворение инсулина, например, кристаллического цинково- го инсулина, например, высокоочищенного
5 сорта инсулина, предложенного в патенте Великобритании № 1285023, в воде в присутствии кислоты, например, хлористоводородной кислоты. Водный раствор консервирующего агента, например, фено- ла. алкил фенола такого, как крезол, или
метил пэра-оксибензоата получают отдельно, он может содержать агент, обеспечива- ощий изотонность раствора, такой, как лорид натрия или глицерин. Кроме того, онсервирующий раствор может содержать уферирующий агент такой, как фосфат на- рия, цитрат натрия, ацетат натрия или РИС (трис(оксиметил)аминометил) и ингибитор протеазы. Полученный в результате онсервирующий раствор затем смешивают кислым раствором инсулина, а затем до- авляют основание, например, раствор гид- ата окиси натрия, чтобы обеспечить )Н-значение в нейтральной области.
Фосфолипид формулы (I), не обязатель- о в смеси с жировым маслом, может быть добавлен в раствор инсулина в виде раство- ia или эмульсии, которую получают при помощи растворения или суспендирования
осфолипида формулы (I) в воде и, если это
необходимо, затем подвергая суспензию
бработке ультразвуком перед смешением
раствором инсулина. В качестве альтернаивы раствор или суспензия фосфолипида
может, если это необходимо, содержать бу-
ерирующий агент и концентрирующий
гент. После смешения рН-значение инсуиновой композиции можно обеспечить в
нейтральной области. Наконец, полученный
результате раствор инсулина доводят дс расчетного объема добавлением воды.
Дальнейшие подробности реализации h астоящего изобретения. Композиции, яв- яющиеся предметом настоящего изобре- ения, можно использовать в любой дозе, в ависимости от устройства, преднэзначен- н ого для применения через нос. Это устрой- ство может быть сконструировано с точки рения обеспечения оптимальной точности змерений и совместимости его конструк- тивных элементов таких как контейнер, кла- п ан и привод с композиций для применения через нос и может базироваться на системе Механического насоса, например, на систе- fjie распылителя с фиксированной дозой, или системе аэрозоля под давлением. Система аэрозоля требует применения распыляющего агента, который должен быть инертным относительно композиции. Соответствующие распыляющие агенты могут быть выбраны среди таких газов, как фторуг- лероды, углеводороды, азот и окись азота, или их смеси.
I Дальнейшие подробности реализации настоящего изобретения на практике де- н онстрируются при помощи приводимых ниже примеров, которые, однако, не следует рассматривать в качестве каких либо ограничений области, охватываемой им.
Исходный инсулиновый материал, используемый в примерах 1-12 содержит примерно 20-30 г цинка на мг азота.
Соевое масло и арахисовое масло являются очищенными сортами, соответствующими сортам U.S.Р. XXI и П.Г.ХУ, соответственно.
Пример 1. 772 мг человеческого инсулина растворяли в 40 мл 0,02 М растворе хлористоводородной кислоты и добавляли 1,6 г безводного глицерина. Далее, до объема 80 мл добавляли дистиллированную воду. рН регулировали на уровне 7,4 при помощи 0,2 М раствора гидрата окиси натрия. 1,0 г дидеканоил-L-a -фосфатидилхо- лина растворяли в 2 мл этанола (96%) и с использованием подкожного шприца инъ- ектировали в 10 мл дистиллированной воды. Полученный в результате мутный раствор подвергали обработке ультразвуком с использованием ультразвукового зонда с высокой энергией в течение 10 минут и полученный в результате коллоидный раствор добавляли в раствор инсулина при перемешивании, а затем до объема 100 мл добавляли дистиллированную воду. Эту композицию, содержащую 200 М.Е. (мл инсулина, диспергировали в распылитель, предназначенный для применения в нос, и затем 100 микролитров применяли в носовую полость самца кролика NZW. Такую же композицию, но без дидеканоил-L-a -фос- фатидилхолина, также испытывали на кроликах.
В фиксированные моменты времени брали пробы крови из маргинальной ушной вены и определяли концентрации глюкозы методом гексокиназы.
Были получены следующие результаты (см.табл.1).
Пример 2. 100 мг дидеканоил L- а -фосфатидилхолина растворяли в 100 мг соевого масла и этот раствор добавляли в 5 мл 0,01 М буфера фосфата натрия, рН 7,4.
Смесь эмульгировали с использованием ультразвуковой обработки, 2 мл инсулино- вого раствора с 400 единицами на мл добавляли в эту эмульсию и рН обеспечивали на уровне 7,4 затем до объема 10 мл добавляли воду.
После применения через нос этой композиции кроликам концентрацию глюкозы в крови наблюдали в течение 120 минут. Площадь над кривой, в которой единственные значения концентрации глюкозы в крови выражены в пересчете на проценты от начального значения, оценивали методом треугольника. Далее, индекс рассчитывали по формуле:
Индекс 0,053 х А/О.в которой А - это площадь над кривой для испытываемой композиции, D - это доза испытываемой композиции, а множитель 0,053 представляет собой эмпирический множитель, выведенный при подножном применении сильно действующих инсулиновых препарации.
Испытываемая таким образом инсули- новая эмульсия для применения через нос имеет индекс 24%.
Аналогичная композиция, но приготовленная без растительного масла, имела индекс 12-15%.
Примеры 3-12. Композиции из примеров 3-6,8 и 12 получали с использованием тех же приемов, что были описаны в примере 1 в то время, как композиции из примеров 7 и 9-11 получали по методу из примера 2. В табл.2 используются следующие сокращения:
ФосфатидилхолинPC
Дидеканолил фосфатилилхолин DDPC Дилауроил фосфатидилхолин DLPC Содержание в процентах приведено в пересчете на вес/объем. Все композиции содержали 80 М.Е./мл инсулина.
Эти данные показывают прекрасные эффекты увеличения поглощения фосфати- дилхолина с ацильными или алкильными группами со средней длиной цепи.
Пример 13. 100 мг дидеканоил L- а -фосфатидилхолина растворяли в 100 мг соевого масла и раствор затем добавляли в 5 мл 0,01 М буфера фосфата натрия, рН 7,4, содержащего 160 мг глицерина. После эмульгирования смеси при помощи обработки ультразвуком в эмульсию добавляли 100 мг глюкагона, рН обеспечивали на уровне 7,4 и воду добавляли до объема 10 мл;
После применения через нос этой композиции кроликам, концентрацию глюкозы в пробах крови определяли путем взятия проб из маргинальной ушной вены, при этом использовали метод гексокиназы.
Во времени получали следующие концентрации глюкозы в пробах крови:
Минуты после применения 0 1530 60 120
Глюкагон без системы усилителя 107 100 107 113 111
Глюкагон без системы усилителя 163 100 144 178 188
Пример 14. Инсулин (4,53 мг) человека размалывают в ступке вместе с а-цикло- декстрином (395,47 мг) и получают препарат с содержанием инсулина в 0,3 МЕ/мг.
Препарат испытывают на моделях с кроликами, в которых кроликов обрабатывают путем введения через нос препарата инсулина (20 мг/животное). Спустя 0,15,30,60 и +20 мин после введения отбирают образцы крови, в которых определяют концентрацию крови. Каждую такую концентрацию глюко- зы в крови выражают в виде процента от первоначальной концентрации глюкозы и методом треугольника рассчитывают площадь между средней концентрацией глюкозы в крови относительно кривой времени и
кривой t (время) 100, Затем по нижеприведенной формуле рассчитывают индекс, которым сравнивается гипогликаэмическое действие препарата для введения через нос с действием стандартной подкожной инъекции быстродействующего препарата инсулина.
Индекс 0,053 х A/D,
где А - площадь над кривой для испытуемого препарата, D - доза испытуемого препарата в МЕ/животное и коэффициент 0,053 является полученным эмпирически коэффициентом на основе подкожного введения быстродействующего препарата инсулина. Для вышеприведенного препарата индеке равен 42.
Пример 15. Инсулин человека (2,91 мг) размалывают в ступке вместе с а -цик- лодекстрином (717,09 мг).
Размолотый порошок опрыскивают раствором дидеканоилфосфатидилхолина (80 мг) в необходимом объеме разбавленного этанола, содержащего около 30% (об./об.) воды, после чего оставляют сушиться.
Высушенный порошок просеивают через сито с размером отверстий в 0,7 мм и затем через сито с размером отверстий в 0,2 мм и получают препарат с содержанием инсулина в 0,1 МЕ/мг.
При испытании на модели с кроликами
примера А для полученного препарата найден индекс в 88.
Пример 16. Воспроизведена методика примера В с использованием человеческого инсулина (2,3 мг), а -циклодекстрина
(537,7 мг) и дидеканоил-фосфатидилхолина (60 мг), растворенных в этаноле, содержащем около 4% (об,/об.) воды и получают препарат с содержанием инсулина в 0,1 МЕ/мг.
При испытании на модели с кроликами примера А для полученного препарата найден индекс, равный 95.
Пример 17. Глюкогон человека (4 мг) размалывают в мельнице с а -циклодекстрином (796 мг) и получают препарат с содержанием глюкагона в 5 мг/г.
Препарат испытывают на модели с кроликами, в которой 6 кроликам вводят через нос препарат глюкогона (20 мг/животное).
Спустя 0,15,30,60 и 120 минут после введения отбирают образцы крови, в которых определяют концентрацию глюкозы. Каждую кэнцентрацию глюкозы в крови выражают в в/1де процента от первоначальной концентрации глюкозы и способом треугольника подсчитывают площадь между кривой f (вре- Nfl) 100 и средней концентрацией глюкозы в крови относительной кривой времени. Рассчитанную площадь, деленную на вводимую дозу, используют в качестве меры г лпергликаэмического эффекта от введения,
В данном испытании получено значение площади на дозу, равное 74,876.
Пример 18. Воспроизведена методика примера В с применением глюкогона че- овека (4 мг), а -циклодекстрина (716 мг) и идеканоилфосфатидилхолина (80 мг), рас- воренных в этаноле, содержащем около % (об./об.) воды, и получением препарата содержанием глюкогона в 5 мг/г.
В испытании по методике примера D ля полученного препарата получено значе- ие площади на дозу, равное 107,683.
Примеры 19,20. Препараты этих примеров приготовлены и испытаны по ме- одике, аналогичной методике примера 1. Индекс подсчитывают так, как описано в г)римере 2 (см.табл.З).
Пример 21.В 5,5 мл воды растворяют -циклодекстрин (664 мг), добавляют биосинтетический гормон роста человека (Б- ГР, поставляется фирмой Ново Нординск /S, 35,8 мг) и раствор высушивают вымо- f аживанием. Полученный порошок (600 мг) гранулируют с 96%-ым этанолом (250 мкл), г росеивают через сита на 0,7 и 0,3 мм и сушат в эксикаторе над силикагелем. Полученный препарат содержит 3 МЕ/20 мг Б- Р.
Биодоступность препарата для введе- йия через нос испытывают в сравнении с раствором для в.в. введения, приготовляе- ого следующим образом.
В 1 мл воды растворяют Б-чГР (1,364 мг) затем разбавляют карбонат-глициновым уфером (рН 8,4), к которому добавлен 1 % льбумина сыворотки крови человека до конечного объема в 5,3 мл. Такой раствор для нъекций содержит 0,754 МЕ/мл Б-чГР.
Испытания проводят на самцах кроли- юв линии NZW весом около 2,5 кг с шестью i роликами в группе для введения через нос тремя кроликами в группе для в.в. введения. В ходе испытания кроликов фиксируют станке и для отбора образцов крови в ушную артерию кроликов вводят катетер.
В группе для введения через нос каждому зверьку вводят 20 мг препарата. Для вду- вания порошка в ноздри животных используют шприц специальной конструкции, создающий строго определенное давление воздуха. Отбирают образцы крови в 0,5 мл в охлаждаемые льдом гепаринизиро- ванные пробирки за 5 мин до и 10,20,30,40,50,60,75,90,120,180 и 240 мин
после введения испытуемого препарата.
В контрольной группе каждому зверьку вводят 250 мкл в.в. раствора для инъекций. Образцы крови отбирают за 5 мин до и 10,20,30,40,50,60,75,90 и 120 мин после введения.
Образцы крови анализируют относительно иммунореакционноспособного чГР с помощью чГР-ELISA метода.
Подсчитанная биодоступность вводимого через нос порошка составляет 31 %.
Пример 22. В 5 мл воды растворяют а-циклодекстрин (608 мг), добавляют Б-чГР (35,8 мг) и раствор высушивают вымораживанием. Полученный порошок (552 мг) гранулируют с раствором DDPC (48 мг) в 96%-ном этаноле (200 мкл), просеивают через сита на 0.7 и 0,3 мм и сушат в эксикаторе над силикагелем. Полученный порошок для введения через нос содержит 3 МЕ/20 мг
Б-чГР. В испытании по методике примера Н биодоступность составляет 36% (относительно в.в. инъекции).
Пример 23. В 4,6 мл воды растворяют а-циклодекстрин (552 мг), добавляют Б-чГР
(35,8 мг) и раствор сушат вымораживанием. Полученный порошок (504 мг) гранулируют с раствором DDPC (96 мг) в 96%-ом этаноле (200 мкл), просеивают через сита на 0,7 и 0,3 мм и сушат в эксикаторе над силикагелем.
Полученный порошковый препарат для введения через нос содержит 3 МЕ/20 мгБ-чГР. В испытании по методике примера Н найденная биодоступность составляет 44% (относительно в.в. инъекции).
П р и м е р ы 24, 25, 26, 27. Композиции указанных примеров получают по методике примера 2 использованием соответственно 100мг кокосового масла, кукурузного масла, оливкового масла или подсолнечного масла.
Кроме того, испытания и подсчет индекса осуществляют согласно методике примера 2 (см. табл.4).
Пример 28. Исследование переноси- мости композиций, полученных в соответствии с изобретением, слизистой носа проводилось при использовании композиций примеров Н и I (далее обозначенных как композиции Н и I). Так, в два различных
дня каждому из 8 здоровых добровольцев делалось по 2 вдувания (1 на каждую ноздрю) композиции Н или композиции I, причем в каждом вдувании содержится 20 мг соответствующей композиции. Вдувание осуществляют с помощью сменного наконечника пипетки и отмеренного небольшого количества сжатого воздуха. За 10 мин до и 180 мин после введения порошка проводят риноскопию. Сравнивают наблюдения до и после введения порошка, и вызываемое порошком раздражение оценивают как: отсутствие, слабое, умеренное или тяжкое. Как ясно видно из нижеприведенной таблицы, включение в композицию I дидека- ноилфосфатидилхолина почти снимают раз- дражающее действие, присущее аналогичным композициям, но без фосфо- липида {см. табл.5).
Формула изобретения 1.Способ получения дисперсии полипептидов для ичтраназального применения, включающий диспергирование активного агента в разбавителе с поверхностно-активным веществом, добавление рН- буферирующих, консервирующих, регулирующих осмотическое давление вспомогательных веществ, отличающийся тем, что, с целью ускорения интрана- зального поглощения и предупреждения раздражающего действия конечного продукта, диспергирование проводят в жирном масле или другом разбавителе, в качестве поверхностно-активного вещества используют фосфолипид общей формулы
tt-CH OR CH-OR Н-СН-0-РСО) (ОНИЛГ
где R и R, одинаковые или различные, - водород, алкил, алкенил, алкилкарбонил, алкенилкарбонил,алкадиенилкарбонил, ал- катриенилкарбонил или алкатетраемилкар- бонил, содержащий не более 14 атомов углерода, при этом R и R не являются водородом, a R1 - гидрофильная группа, выбранная из 2-(триметиламмония)этила, 2-аминоэтила, 2-карбокси-2-аминоэтила, 2,3-диоксипропила или 2,3,4,5,6-пентаокси- циклогексила.
2.Способ по п.1,отличающийся тем, что R - 2-{триметиламмонио)этилом.
3.Способ по п.2, отличаю щи и с я тем, что R и R - каждый алкил или алкилкарбонил, содержащий 4-12 атомов углерода.
4.Способ по п.З, отличающийся тем, что R и R - нонилкарбонил. 5.Способ по п.2, отличающийся тем, что или R1, или R - водород.
6.Способ по п. 1,отличающийся
тем, что в качестве жирного масла берут
растительное масло, выбранное из группы
соевое, арахисовое, кокосовое, маисовое,
оливковое, подсолнечное масло.
Т.Способ по пп.1-6, отличающий- с я тем, что фосфолипид берут в количестве 0,1-10,0%, предпочтительно 0,5-5,0% от всей композиции.
в.Способ по п.7, отличающийся тем, что жирное масло берут в количестве 0,01-50,0%, предпочтительно 0,1-10,0% от всей композиции.
Приоритеты по пунктам: 16.12,86 - пп.1,2,3,4,7,
16.01.81-пп.5,6,8.
Таблица 1
Область использования: изобретение относится к области медицины. Цель: предупреждение раздражающего действия. Сущность изобретения: активное вещество - полипептид диспергируют в разбавителе, таком как жирное масло, в присутствии фосфолипида такого как фосфатидилхолин (лецитин), 7 з.п.ф-лы, 5 табл.
Глюкоза в крови в процентах от первоначального уровня
Таблица 2
Таблица 3
