СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА НА НОСИТ Советский патент 1974 года по МПК C12N11/08 

Изобретение относится к /производству ферментных препаратов, а именно к способам получения фермента на носителе.

Известный способ получения фермента иа носителе, предусматривающий приготовление растворов фермента с мономерам « катализатора, смешивание этих растворов с последующей полимеризацией полученной смеси, не обеспечивает (получения фермента на .носителе в виде гранул.

Для получения фермента на носителе в виде гранул в 1Првдлагаемо(м способе смесь перед полвме1ризацией подвергают вибрации, а .полимеризацию осуществляют в не .смещивающемся с водой растворителе, например вазелиновом масле, 1При освещении.

При этом полимеризацию осуществляют в .непрерывном оотоке, например, в колон ке, внутренняя стенка которой обработана крвмнеорганичеаким соединением.

Виюрацию смеси осуществляют в процессе подачи ее на полимеризацию через вибрирующий капилляр.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Готовят растворы фермента с мономером .и катализатора и затем полученные растворы смешивают. Полученную смесь подвергают последующей полимеризации в не смешивающемся с водой растворителе, например вазелиновом масле, при освещении.

Для предотвращения прежде,Временной полимеризации исходной омеси растворов последние готовят раздельно и смещивают Непосредственно перед подачей на полимеризацию. При этом полимеризацию осуществляют в непрерывно.м потоке, например, в стеклянной колонке, внутренняя стенка которой обработана кремнеорганичеоким соединением. Обработка таким соединением предотвращает прилипание материала к стенкам (Колонки, а освещение обеспечивает необходимую скорость полимеризации.

Для получения однородных микрогранул требуемого размера реакционную смесь подвергают Вибрации, которую осуществляют в процессе подачи ее на полимеризацию через вибрирующий капилляр.

В качестве исходных ферментов применяют гидролазы, оксидоредуктазы или трансферазы. Носитель получают из растворимых в воде электронейтральных, 1катионных или анионных мономеров, содержащих достаточное количество бифункционального смешивающего агента.

Пример. Для связы1вани1Я ипвертазы в полиакриламюный гель .в установке непрерывного действия готовят растворы; мономеров и

фермента путем смешивания 5 объемов раствора инвертазы с активностью 100 международных единиц в 1 мл и 5 объемов смешанного раствора 18,6% акрилаадида и 1,4% N-мет.илен-бнс-ажриламида; и катализаторов - нз 0,5 ч. надсернокислого аммония, 0,5 ч. диметнламияопрОП.ионитрила, 0,02 ч. рибофла1ви«а в 10 ч. раствора.

Все растворы готовят в 0,05 М ацетатном буфере.

Приготовленные растворы подают с одинановой скоростью в смеситель, а толученную реакционную смесь через вибрирующий капилляр iB стеклянную колонку, внутренняя стенка которой обработана 1кремиеорганичеоким соединением.

В ту же (Колонку 1вводят вазелиновое масло со скоростью, иревышающей IB 10 раз скорость В1вода реакционной смеси.

Образующаяся в верхней части колонки эмульсия Стакает через интенсивно освещаемую колонку, (проходя освещенную зону в течение 3-5 мин.

Из нижней части колонки поступает суопензия подученных ми1крогранул фермента в масле, которые затем отделяют от масла центрифугированием и промывают петролейным эфиром или раствором поверхностно-активного вещества.

Активность полученного фермента определяют в потоке раствора сахарозы при 30° С, при этом она равна 30 ед/мл, что соответствует выходу 78% от теоретического.

Микроскопическая проверка полученных гранул подтверждает их сферичность.

П р е д 1М е т изобретения

1.Способ Получения фермента на носителе, лредусматривающий приготовление растворов фермента с мономером и катализатора, смешивание этих растворов с последующей полимеризацией полученной омеси, отличающийся тем, что, с целью получения фермента на носителе в виде 1гранул, смесь перед полимеризацией поД1вер|гают вибра-ции, а полимеризацию осуществляют в не смешивающемся с водой раст1ворителе, например вазелиновом масле, при освещении.

2.Способ 1ПО п. 1, отличающийся тем, что полимеризацию осуществляют в непрерывном потоке, например, в колонке, внутренняя стенка которой обработана кремнеорганичеоким соединением.

3.Способ по пп. 1-2, отличающийся тем, что вибрацию смеси осуществляют в процессе подачи ее на полимеризацию через вибрирующий капилляр.