фина блок устанавливают на столик санного микротома и несколькими срезами обновляют поверхность блока. Последний снимают с микротома, переворачивают рабочей поверхностью вниз и помещают в сосуд с водным раствором акридинового оранжевого 0,01 %-ой концентрации. Время флуорохромирования 20 мин. Флуорохромированные препараты промывают водопроводной водой 5-10 мин. Затем парафиновый блок устанавливают на столик люминесцентного микроскопа, например МЛ-3. Препараты просматривают в падающих УФ-лучах с максимумом возбуждения флуоресценции в области 360 нм. Наблюдение ведут на поверхности свежесрезанной ткани стебля при увеличении в 50-80 раз.
Микросклероций возбудителя вилта не флуоресцирует и поэтому хорощо выделяется на фоне флуоресцирующей поверхности поперечного среза в виде черных точек и пятен.
На срезе каждого кусочка стебля подсчитывается количество микросклероциальных скоплений в сосудах сосудисто-волокнистых пучков ксилемы и в межклетниках ксилемы. Учет проводится примерно на 6-10 срезах, что зависит от длины анализируемого участка стебля.
Высчитывается среднее количество микросКлероциальных скоплений на один срез. Показателем устойчивости сорта является среднее количество микросклероциальных скоплений иа одном срезе. Чем меньше гриб образовал микросклероциев в сосудисто-нроводящей системе растения, тем выше устойчивость сорта к определенной популяции гриба.
Предлагаемый способ значительно экономит Бремя (17-18 дней вместо 50-70 дней)
при оценке сортов и гибридов хлопчатника на устойчивость к возбудителю вилта. Оценка на устойчивость проводится на седьмой, восьмой дни после заражения проростков. На приготовление препаратов и их анализ затрачивается 30-40 мин.
Кроме того, значительно сокращаются рабочие площади на выращивание растений как за счет сокращения времени на заверщение опыта, так и за счет сокращения анализируемых растений.
Испытание способа проводили на вновь районированных высокоустойчивых сортах
хлопчатника «Тащкент-1 и «Ташкент-3, и на восприимчивых- 108-Ф и 153-Ф. Из-за отсутствия абсолютно устойчивого сорта для проверки способа использовали модельные растения других видов, на которых возбудитель вилта не паразитировал, например растения огурца и фасоли. Опыты ставили на проростках растений, выращенных в теплице. Заражение проводили инокулиумом в стебель. Растения заражали черными щтаммами
V. dahlial Ташкентской (Янги-Юльский район) и Азербайджанской популяций, полученных из лаборатории микологии ВИЗР. На анализ брали растения на восьмой день после заражения. В каждом варианте опыта было
взято по пять проростков. Опыты ставили в трехкратной повторности с разрывом во времени примерно через 10-15 дней. Количество микросклероциальных скоплений в сосудистопроводящей системе проростков сортов хлопчатника в зависимости от устойчивости сорт и агрессивности патогена представлены в табл. 1.
Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ определения вилтоустойчивостиХлОпчАТНиКА | 1979 |
|
SU816440A1 |
| Способ повышения устойчивости хлопчатника к поражению возбудителем вертициллезного вилта | 1990 |
|
SU1782387A1 |
| СПОСОБ ОТБОРА ИСХОДНОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ РАСТЕНИЙ СОИ С КОМПЛЕКСНОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ВОЗБУДИТЕЛЯМ ПЕПЕЛЬНОЙ ГНИЛИ И ФУЗАРИОЗНОГО УВЯДАНИЯ | 2010 |
|
RU2433168C1 |
| ШТАММ ГРИБА Gliocladium catenulatum Gilmann et Abbott ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ГРИБНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ СОСУДИСТЫХ БОЛЕЗНЕЙ И КОРНЕВЫХ ГНИЛЕЙ РАСТЕНИЙ | 2005 |
|
RU2307156C2 |
| Способ борьбы с вилтом хлопчатника | 1982 |
|
SU1095481A1 |
| Способ отбора вилтоустойчивых форм хлопчатника | 1986 |
|
SU1507264A1 |
| Лабораторный экспресс-метод, позволяющий дифференцировать сорта озимых зерновых культур по устойчивости к возбудителю розовой снежной плесни (возбудитель гриб Microdochium nivale (Fr.)Samuels & C.I. Hallet) | 2020 |
|
RU2757227C1 |
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТНОСИТЕЛЬНОЙ УСТОЙЧИВОСТИ СОРТОВ ЯЧМЕНЯ И ПШЕНИЦЫ К ОБЫКНОВЕННОЙ КОРНЕВОЙ ГНИЛИ ЗЛАКОВ | 1999 |
|
RU2188538C2 |
| СПОСОБ ЗАРАЖЕНИЯ ПРОСА ГОЛОВНЕЙ | 1993 |
|
RU2090054C1 |
| Штамм возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника | 1977 |
|
SU649387A1 |
Как видно из таблицы, у высокоустойчивых сортов количество микросклероциальных скоплений значительно меньще, чем у восприимчивых. Указанная зависимость отмечается
на двух популяциях гриба, отличающихся различным географическим происхождением. В табл. 2 приведены другие виды растений, абсолютно устойчивые к данным популяциям гриба.
Кроме этого, из таблицы видно, что ташкентская популяция сильнее поражает сосудисто-проводящую систему растений, чем азербайджанская. Эти данные подтверждают возможность определения данным способом, как устойчивость сорта, так и агрессивность возбудителя вилта.
Формула изобретения
Способ диагностирования устойчивости сортообразцов хлопчатника к вилту (VerticilHum dahlial Kleb.), включающий приготовлюние свежих срезов проростков и просмотр их в ультрафиолетовых лучах люминесцентного микроскопа, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса оценки сортообразцов хлопчатника, свежие срезы проростков
Таблица 2
На других видах растений, абсолютно устойчивых к названным популяциям гриба, каких-либо симптомов поражения сосудов не обнаружено. Следовательно, у будущих абсолютно устойчивых сортов хлопчатника, по-видимому, должно быть полное отсутствие микросклероция в сосудисто-проводящей системе.
заделывают в парафиновые блоки, флуорохромируют водным раствором акридинового оранжевого концентрацией 0,01-0,1% в течение 20 мин с последующей промывкой водой и при микроскопировании производят подсчет микросклероциальных скоплений в сосудистоволокнистых пучках ксилемы проростков.
