Штамм возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника Советский патент 1979 года по МПК A01N15/00 C12K1/00 

с я высокой вирзлентностыо, был получен ряд клонов микросклероциального типа. Каждый пз этих клонов, в свою очередь, также был оценен по вирулентности.

В результате технологической проверки из их числа был отобран производственный штамм V. dahliae Kleb 214, обладающий способностью к преимущественному и стабильному образованию микросклероциев на регламентной среде в глубинной культуре.

Штамм хранится в коллекции чистых культур лаборатории почвенных патогенов и вилта хлопчатника Всесоюзного научноисследовательского института защиты растений. Морфолого-культуральные свойства. Конидиеносцы мутовчато-разветвленные, содержат 1-3 мутовки, состоящие из 2-5 фиалид с заостренными вершинами, иногда прямые по типу Cephalosporium. Конидии продолговато-эллипсоидальные, 3,5-8,0 X Х2-4 мкм, бесцветные, собраны на концах фиалид в слизистые головки. Мицелий септированный, бесцветный, с возрастом на нем образуются темно-окращенные (меланизированные) покоящиеся структуры - микросклероции.

Штамм способен расти на общепринятых для грибов средах: агаризованной среде Чапека, сусло-агаре, картофельно-глюкозном агаре. На агаризованной среде Чапека образует округлые, плотные, с ровным краем колонии, плоские или со слегка поднимающимся центром.

Воздущный мицелий сероватый, слабо развитый. На 7-10 сутки роста при 24- 26° С колонии приобретают черную окраску вследствие образования сплошного слоя микросклероциев. Окраска обратной стороны колоний черная. Пигмент в среду не выделяется. Штамм отличается интенсивным и быстрым образованием микросклероциев. Поверхность колонии угольно-черная, сухая; складчатость слабо выражена.

В глубинной культуре на регламентной среде - 2% мезга картофельная сухая (крахмал 1-2%), 0,3%-NaNOs, 0,1% КН2РО4 по 0,05% КС1 и MgSO4-7H2O - гриб формирует все характерные для него морфологические структуры: конидии, мутовчатые или моноподиальные конидиеносцы, микросклероции. Растет в виде однородного пушистого мицелия, вначале бесцветного, а с возрастом, по мере образования микросклероциев, приобретающего черную окраску. Микросклероции начинают формироваться через 60-72 ч после начала роста гриба и составляют к концу технологического цикла (96-120 ч) до 50% общей биомассы гриба (воздущно-сухой вес) Физиологические свойства. Из источников углерода усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу, фруктозу, галактозу, арабинозу, лактозу, маннозу, хуже - рамнозу, ксилозу; скудный рост отмечается

на средах с сорбозой, сорбитом, маннитом, инозитом. Гидролизует крахмал, целлобиозу. Из источников азота использует нитраты, аммонийные соли (при поддержании рН среды не ниже 6,0) и различные органические соединения азота.

Вирулентные свойства.

Штамм обладает повыщенной вирулентностью как к старым восприимчивым сортам средневолокнистого хлопчатника типа 108-ф, так и к новым возделываемым сортам группы «Ташкент.

Пример. Исходный щтамм Verticillium dahliae Kleb 214 (ВИЗ) выращивают в пробирках иа агаризоваиной среде Чапека 7--10 сзток и используют для инокуляции посевных колб со 100 мл питательной среды, содержащей 2% мезги картофельной сухой (крахмал 1-2%), 0,3% NaNOs, 0,1% КН2РО4 и по 0,05% КС1 и MgS04-7H2O, рН 6,5-6,8. Посевной материал выращивают 48 ч на (18-220 об/мин при 24-26° С. При необходимости получения инокулома в больших количествах посевной материал выращивают на аналогичной среде в бутылях емкостью 5 л. Производственное выращивание гриба ведут в ферментерах емкостью 0,1-3 м с рабочей средой- 2% мезга картофельная (крахмал 1-2%), 0,3%NaNOs, 0,1% КН2РО4, по 0,05% КС1 и MgSO4 7Н2О. Культивируют при 24- 26° С с непрерывным перемешиванием и аэрацией в течение 96-120 ч. Образование микросклероциев начинается на 72 ч роста культуры.

Биомассу отделяют одним из известных способов и сущат при температуре не выще 50° С. Выход сухого препарата 15-16 кг с I уиз питательной среды. В 1 г стандартного препарата содержится 8-10 млн. инфекционных единиц (микросклероциев). Препарат сохраняет инфекционность не менее 6 месяцев.

Полученный на основе предлагаемого щтамма 214 препарат «Вертокс испытывался в различных научно-исследовательских институтах Средней Азии для создания искусственных инфекционных фонов при выведении вилтоустойчивых сортов хлопчатника. При внесении препарата «Вертокс в количестве 30-40 кг/га перед посевом поражение вилтом сортов группы «Тащкент-1 достигало 73-78%.

Формула изобретения

Штамм возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника Verticillium dahliae Kleb 214 (ВИЗР) хранится в коллекции чистых культур лаборатории почвенных патогенов и вилта хлопчатника (ВИЗР), предназначен для производства препарата «Вертокс методом глубинного культивирования.

Используется для создания искусственного инфекционного фона при селекции хлопчатника на вилтоустойчивость. Морфолого-культуральные свойства. Конидиеносцы преимущественно мутовчато-разветвленные, содержат 1-3 мутовки, состоящие из 2-5 фиалид с заостренными вершинами. Конидии продолговатоэллипсоидальные, 3,5-8,0 X 2-4 мкм, бесцветные, собраны на концах фиалид в головки. Характерно наличие меланизированных покоящихся структур - микросклероциев. На агаризованной среде Чапека (рН 6,0-6,5) образует округлые, плотные, с ровным краем колонии, плоские или со слегка поднимающимся центром. Воздушный мицелий сероватый, слабо развитый, колонии приобретают черную окраску вследствие образования сплошного слоя микросклероциев. Штамм отличается интенсивным и быстрым образованием микросклероциев. В глубинной культуре на регламентной среде - мезга картофельная сухая - 2% (крахмал 1-2%), NaNOs,-0,3%, КН2Р04- 0,1%, КС1 и MgSO4 - ТНзО по 0,05% - гриб образует все характерные для него морфологические структуры: конидии, мутовчатые или моноподиальные конидиеносцы, микросклероции. Микросклероции начинают формироваться через 60-72 ч роста гриба и к концу технологического цикла, составляют до 50% общей биомассы гриба (воздушносухой вес). Физиологические свойства. Из источников углерода усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу, фруктозу, галактозу, арабинозу, лактозу, маннозу, целлобиозу, крахмал, хуже - рамнозу, ксилозу; скудный рост отмечается на средах с сорбозой, сорбитом, маннитом, инозитом. Из источников азота использует нитраты, аммонийные соли {при поддержании рН среды не ниже 6,0) и различные органические соединения азота. Вирулентные свойства. Обладает повышенной вирулентностью как к старым восприимчивым сортам средневолокнистого хлопчатника типа 108-ф, так и к возделываемым сортам группы «Ташкент, т. е. относится к расе 2. Стабилен по морфологическим и вирулентным свойствам в условиях глубинной культуры. Выход сухого препарата микросклероциев составляет 15-16 кг с 1 м питательной среды. Титр препарата 8-10 млн, микросклероциев на 1 г. I Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1.Соловьева А. И. Вредители и болезш: хлопчатника и других культур и борьба с ними. В сб. научных работ СоюзНИХИ. Ташкент, 1951. 2.Авторское свидетельство СССР № 430154, кл. С 12 К 1/06, 1973.