Способ определения вилтоустойчивостиХлОпчАТНиКА Советский патент 1981 года по МПК A01H1/04 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЛТОУСТОЙЧИВОСТИ ХЛОПЧАТНИКА

. Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции хлопчатника,, и может быть использовано для отбора вилтоустойчивых сортов и форм хло чатника. Известен способ определения устойчивости растений хлопчатника к вилту, при котором проводят гибридизацию молеку-лярной ДНК, выделенной из хлопчатника с меченой ДНК-С, вьщепенной из гриба вертиаиллозного вилта, и по степени гибридизации судят о степени вилтоуотойчивости flj и 2. Недостатком этого способа является то, что выделение ДНК прдаодят из проростков в раннем возрасте, когда устойчивость всех исследованных хлопчатвик(Ж не проявляется должным образом-. Генетически детерминированным признаком ви тоустойчивости обладают все сорта хлопчатника, проявление же свойств устойчивости зависит от условий окружаюшей среды и от фазы развития растений. В связи с этим уменьшается дост(жерн6сть определения устойчивости хлопчатника по данному способу. Известен также способ определения устойчивости хлопчатника к вилту, основанный на подсчете микросклероциальных скоплений в сосудисто-волокнистых пучках ксилемы, иноку ли рсканных суспензий , проростков хлопчатника З. Недостатком способа является то, что при инокуляции не учитывается доза гриба, т.е. инфекционная нагрузка вилта от которого прямым образом зависит количество микросклероциальных скоплений, принятое за показатель степени устойчив вости. Следовательно, достоверное определение вилтоустойчивости данным способом должно производиться 3-5 раз, что замедляет процесс установления и отбора вилтоустойчивых сортов хлопчатника. Цель изобретения - ускорение определения вилтоустойчивости хлопчатника и потвышёние достоверности способа в целом. Поставленная цель достигается тем, что готовят микротомные срезы стеблей измеряют их оптическую плотность в каждой точке и по величине оптической ппот ности судят о виптоустойчивости хлопчат ника. Способ осужествпяется следующим образом. Из стеблей хлопчатников в зоне корневой шейки приготавтгавают микротомные срезы толщиной в 1ОО мкм и проводят общую окраску водным раствором сафра,ниао, затем их наклеивают на предметное стекло смесью глицерин-желатин. Приготрвпенные таким образом препараты сканируют под микроскопом ПРОТВА, на котором можно измерить оптическую плотность в каждой точке исследуемого образца. Полученные данные усредняют и строят гистограммы, распределений оптических плотностей. , Расположению этих гистограмм по оси абсцисс, т.е. степени уменьшения оптических nnoTi костей, соответствует у еньшение степени вилтоустойчивости. Следовательно, при построении гистограмм распределения оптических плотностей исследуемых хлопчатников можно выделить три зоны : зону больших, средних и малых плотностей; которые отражают соответсгв ющие степени вилтоустойчивости. Таким образом, строят гистограммы исследуемых хлопчатников и по расположению юс в какой-либо из трех вышеукаэанньГх зон судят о степени устойчтюости хпопчат ника к вилту. П р и м е р . В фазе бутоннааиик цве тения, когда признак устойчивости всех хлопчатников проявляется максималь но, готовят срезы из стеблей следующих хлопчатников :Q.nursuium ssp mexican VOir. nervosurn - дикая высокоустойчивая форма; Ташкент - относительно устойчивый (средняя устойчивость) промышлен ный сорт; Узбекистан-3 - новый перспек тивный сорт , устойчивость к винту окон чательно не установлена;С дикий вид из пустынь Австралии, изучается Btiefffibie; С-4727 неустойчивый сорт, Готовят по три среза с одного растения, а с каждого сорта и вида берут по три растения. У всех полученных срезов на установке ПРОгеА измеряют оптическио плотности и по усредненным результатам строят гистограммы распределения оптических плот;ностей каждого из исследу емых хлопч атн икон. Оп тич ее ки е плотности измеряют при следующем режи ме : диаметр зонда d г - О,5 мкм; шаг О,3 мкм; сканирсюания ft у - 2О отсчетов колидлина строки П х 8 0 отсчете ; чество строк , окуляр - Ю Полученные тив - 60 гистограммь хлопчатнике отличают ся не только по их значению оптических плотностей, но и по виду распределения. На графике представлены гистограммы исследованных хлопчатников, которые для удобства строились не по значениям оптических плотностей, а по значениям коэффициентов пропускания. В зону больших плотностей (аб), т.е. в зону высокой устойчивости, вошла гистограмма высокоустойчивой формы хлопчатника гпех сачит. Гистограммы относительно устойчивого сорта Ташкент-1 и неустойчивого сорта С-4727 вошли соответственно в зоны средних (бв) и малых (вг) плотностей. Судя по графику устойчивость нового сорта Узбекистан-3 .близка к устойчивости сорта Ташкент -, а дикий вид QaustrosBe является неустойчивымкак и сорт С-4727. Результаты подтверждаются и экспериментами на вилтовом фоне. Использование предлагаемого способа для оценки степени вилтоустойчивости хлопчатника обеспечивает следующие пре- кмугаества по сравнению с другими способами. Псвышается точность и достоверность оценки устойчивости хлопчатника к вилту за счет определения устойчивости в фазе бутонизации-цветения, когда устойчивость всех хлопчатников проявляется максимально, что значительно ускоряет отбор вилтоустойчивых сортов хлопчатника для промышленного сева. Кроме того, дает возможность определить устойчивость диких форм хлопчатника, что в свою очередь ускоряет вовлечение диких вилтоустойчивых хлопчатников в практику селекционной работы. Формула изобретения Способ определения вилтоустойчивости хлопчатника, включающий выращивание проростков хлопчатника и отбор исследуемых образцов, отличающийся тем, что, с целью ускорения определения и повышения точности, готовят микротомные срезы стеблей, измеряют их оптическую плотность в каждой точке и по величине оптической плотности судят о вилтоустойчивости.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

го 40 ео

а

ш т ко 180 ffг ч