1.
Изобретение относится к способам определения жизнеспособности зародышей гельминтов, в частности адолескарии парамфистоматид, и может быть использовано в диагностике гельминтозпых заболеваний животных, имеющих широкое распространение и наносяш,их ощутимый экономический ущерб животноводству, а также изобретение может быть использовано в биологии в лабораторной практике при проведении гельминтологических исследований.
Известен способ определения жизнеспособности зародышей гельминтов, в частности адолескариев, заключающийся в скармливании проверяемых адолескарии лабораторным животным - белым мышам с последующим подсчетом в их фекалиях или содержимом кишечника количества жизнеспособных адолескарии 1. Однако такой способ трудоемок, требует наличия лабораторных животных, затраты времени составляют 2,5-24 и более час. Кроме того, способ не обеспечивает точности в связи с возможными потерями адолескарии и цист во время их скармливания мышам и последующим сбором.
Известен также способ определения жизнеспособности адолескарии, заключаюшийся в ипкубировании их в смеси растворов трипсина, пищевой соды, хлорида натрия и желчи
крупного рогатого скота в термостате 5-6 час с последующим выявлением под микроскопом жизнеспособных адолескарии по их движению в цисте 2.
Недостатками этого способа являются также длительность процесса определения и необходимость внимательного напряженного наблюдения за адолескариями под микроскопом.
Наиболее близким по технической сущности к предложенному способу является способ определения жизнеспособности зародышей гельминтов, например яиц тениид, заключающийся в помещении их в 1%-иый раствор сернистого натрия 3. Зрелые и живые зародыши тениид освобождаются от нарул ных оболочек, и жизнеспособность их определяют по сохранению их естественной формы и устойчивости к 1%-пому раствору сернистого натрия.
Однако известный способ пе эффективен для определения жизнеспособности адолескарии ларамфистоматид, так -как применение 1%-ного раствора сернистого натрия приводит к гибели адолескарии. Кроме того, дополнительно с определением указанной выше естественной формы зародышей в яйце необходимо определять и другие морфологические признаки, например степень развития у зародышей крючьев и их расположение.
Целью изобретения является повышение эффективности способа при определении жизнеспособности адолескарий парамфистоматид.
Для этого по предлагаемому способу адолескарий помещают в 0,4-0,67о-ный раствор сернистого натрия, предварительно приготовленный на 0,5-0,85%-ном растворе хлорида натрия, и жизнеспособными считают адолескарий, из которых эксцистировались личинки парамфистоматид. Раствор сернистого натрия быстро проникает через цисту адолескарий парамфистоматид и оказывает раздражающее действие на личинку, что приводит их к эксцистированию.
Способ осуществляется следующим обра30 М.
Адолескарий парамфистоматид по 10-20 экземпляров, инцистировавшиеся на полиэтиленовой пленке, листьях растений или собранные отдельно, помещают в чашки Петри и заливают 0,4-0,6%-ным раствором сернистого натрия (Na2S), приготовленным на 0,5- 0,85%-ном водном растворе хлорида натрия (iMaCl). Адолескарий должны быть погружены в раствор. Чашки Петри с адолескариями помещают на 30 мин в термостат при температуре о/-б9 С или содержат при комнатной температуре 18-24 С в течение часа. Жизнеспосооные личинки трематод за эти промежутки времени эксцистируются. Начало эксцистации личинок парамфистоматид можно наблюдать через 15-20 мин при температуре раствора 37-39°С и через 30-40 мин при комнатпой температуре 18-24°С. Личинки трематод эксцистируются активно со стороны плоской поверхности адолескарий. Цисты адолескарий, из которых вышли личинки трематод, становятся прозрачными с приоткрытой крышечкой на плоской поверхности. Исследования проводят под малым увеличением микроскопа (лучше МБС-1). К жизнеспособным относят адолескарий, из которых эксцистировались личинки парамфистоматид. Личинки подвилсны, отделяются от цисты или удерживают ее брюшной присоской.
Нежизнеспособные адолескарий не эксцистируются. Личинки парамфистоматид остаются в цисте, неподвижны или деформированы.
Часть нежизнеспособных личинок под действием раствора разбухает, выпячивается из цисты в виде серого мешка и растворяется в течение 2-3 час.
Процент жизнеспособных адолескарий определяют по формуле:
Y A.IOO л -,
п
где X- процент жизнеспособных адолескарий,
А - количество жизнеспособных адолескарий,
п - общее количество адолескарий, взятых для исследования.
Из партии полученных (собранных) адолескарий или адолескарий, предназначенных для искусственного заражения животных, на жизнеспособность определяют не менее 100 экземпляров.
Предлагаемый способ определения жизнеспособности адолескарий отличается простотой, экономичностью, быстротой исполнения и быть применен в полевых условиях.
Формула изобретения
Способ определения жизнеспособности зародышей гельминтов, включающий воздействие на них раствора сернистого натрия, отличающийся тем, что, с целью новышения эффективности способа при определении жизнеспособности адолескарий парамфистоматид, последние помещают в 0,4-0,6% раствор сернистого натрия, предварительно приготовлеиный на 0,5-0,85% растворе хлорида натрия, и жизнеспособными считают адолескарий, из которых эксцистировались личинки парамфистоматид.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:
1.Авторское свидетельство № 390808, М. Кл. А 61Ь 10/00, 1973.
2.Глузман И. Я- «О сроках сохранения жизнеснособности адолескарий в лабораторных и природных условиях. Труды Всесоюзного института гельминтологии им. К- И. Скрябина, 1968, т. 14, .с. 176-180.
3.Котельников Г. А. «Диагностика гельмиптозов животных, М., «Колос, 1974. с. 190.
