Способ получения волокнистого гемостатического материала Советский патент 1977 года по МПК A61L15/00 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1ВОЛОКНИСГОГО ГЕМОСГАТИЧЕСКОГО

(54)

МАТЕРИАЛА

отжимают и отделяют от частчно набухших влажных волокон.

После этого органический растворитель удаляют посредством центрифугирования и отжатый от нее коллагеновый проду1ст подвергают окончательному высушиванию в специальном сушильном шкафу с обогревом, либо посредством сушки в вакууме.

Коллагеновые волокна высушивают 16ч при температуре 40° С и в вакууме порядка 736 мм рт.ст.

Перед заключительным измель 1е1шем на составляющие его волокна (операции пушения), волокнистый материал доводят до соде|)жания в нем летучих веществ -до 8-15вес.%, сштая воду и органический растноритель.

Это достигают тем, что коллагеновый продукт выдер)К)шают 8-24 ч при атмосферном давлении и комштной темцерат 1)е.

Заключительную оперящпо дезагрегащга или пушення производят в аппарате типа Waring Вlendor или в молот1совой мельнице колеминуциошюго птя. Получшот продукт необходимой насыпной плотносШ к удельной площади поверхности.

Для полу юи-ш неполной соли колшгена, требуемое количество способной к ионпапдаи кислоты вводят в водную лшдкосгъ, в которой диспершруется иолокш1С1Ь Й коллаген. Кол1гчество кислоты, вводимой 3 вогагую жидкость должно быть достатошыь ,пя получе1ги.я про/лукта с содержанием связанной киаюгы50-9Шо от теорететески устаноплошгого содержагмя стехиометрическй свя аНной кпслоП).

После того, крк кислота прореагирует с диспергнроваштыли в водной жндкостн коллагеном, реаквдонн ю Ktaccy суспс Щ руют и пром1 шают в смешивающемся с водой оргатшческом растворителе.

Полученную образом соль коллагена обрабптьюашт так, как описано выше.

П р и рд е р 1. Сырую бычью ко;«у нарезают на полоски длиной 78мм, которые затем замораживают и хрмшт холодилыпасе. Для опытов необходимое часко полосок извлекают из холодйлышка и оттаивают их в течешю Д11Я, затем промывают несколько раз водой при температуре 10-11C. Избыток воды стекает и влажные полоски нарезают ма кусочки размером 6-13 мм.

Нарезанный таким образом материал с 1ешивают с мелко раздробленна льдом и пропускают через мельницы Урчелла с целью фибриллизации коллагена. Содержание трердого вещества в фибрилизоввиной массе составляег 25 вес.%. Затем полученную Mtuzvy подвергают центрифугированию, содержание твердого вещества составляет до 30 вес.% в массе.

Получают смесь, содержащую примерно 49 кг иэопронилового спирта и 373 мм 12 и. соляной кислоты. К этой смесч прибавляют 23,15кг фибрнллизованной массы, содержащей 16,33 кг воды., Ilocne добаяпения этой массы к смеси воды, соляной кислоты и изонронано ш содержа ше ашрта в среде равно 7 5 вес.%. Содержание твердого вещества (коллагена) в реакционной суспензии составляет 9,7 %. Полученный шламм перемешивают в миксере Ляйтншю в течение 3 ч при скорости вращения мешалки 115 об/мин, носле чего реакционную массу центрифугируют до 40 вес.% твердого вещества в массе. Получают осадок весом 17,69кг.

Этот осадок вводят в миксер Ляйтнина, содержащий 52,16 кг изслропилового спирта, из которых 0,68 кг приходится на содержащуюся в изонропаноле воду. В этой системе волокнистый материал перемешивают |В течение 2 ч. Затем массу цеитрифугируют и по1нижают в ней содержание жидкости до такого уровня, чтобы в отжатой на центрифуге массе около 40 вес.% приходилось на жидкую фазу. Отжатую массу суспендируют в 53,07 kr изопропанола и центрифугиру1йт. Все эти операции по обработке волокшютого коллаге)ового материала в различных исидких средах проиодот при 25-28°С. Полученный после цечтрифугироппнмя осадок сушат в вакууме порядка 711-749 мм рт.ст. при 60° С в течение 22ч. Получают 6,91 кг относительно сухого коллагенрвого волокнистого продукт, которьп кондиционируют путем выдерживания на воздухе при комнайюй темлср.пур(% впажности и ач-мосфсрном гявлен ;Л в течение трех ;1исй. Получешшй продукт содержщ 11% вя-пч.

Затем волоютстую ко11Д1н;иошфо анн-ую массу подве угаю дезагрегазии и пущению путем обработки на. молотковой мельнице и просеиванию через cirra онределе1шого размера. Потгученный распушеюшй и измельченн1.ш волокш1стый продукт содержит 0,658 мг зкв ПС1 на 1 г коллагена, что соответствует 84% теоретически возможного стехиометрического количества связанной кислоты. Насьтная плотность продукта 40,05 кг/м, удельная площадь поверхности различных образцов зтого материала 18,1-23м/г. Величина гемостатического адгезивного зффекта (ГА эффекта) полученного волокнистого продукта при использовании АВ + крови составляет 799, а при использовании А + крови около 850.

При измельчении продукта в воде путем обработки водной суспензии, содержащей 0,52 вес.% распущенного,; тонко измельченного волокнистого материала в дезинтеграторе в течение 30 мин получают стабильную дишерсию с рН 3,30.

П р и м е р 2. Продукт используют в каэдстве этанола при проведении испытаний in vivo. Этот продукт получают из конечного волокнистого материала по примеру 1 путем просеивания его через набор сит. Насьшная плотность отсеянной фракции продукта составляет 40,05 кг/м, удельная площадь поверхности равна 24м/г. а величина ГА эффекта составляет при использовании А-крови 700.

Примерз. Полоски влажного зеленого кориума (кожи), содержащего около 30% коллагена, нарезают на ломтики и кусочки размером 6 13 мм. Отдельно получают обрабатывающую смесь, содержащую примерно 49 кг этилового спирта в виде водного раствора весом 200кг. В этот раствор вводят 23,15кг влажного измельченного кориума. Содержание твердого коллагена в полученной оиеси составляет около 9,7%. Смесь перемешивают в смесителе Ляйтнина при 115 об/мин в течение 1 ч, после чего центрифугируют, доводят содержание твердого вещества в отжатой массе примерно до 40 вес.%. После этого отжатую массу прибавляют к смеси примерно 52,16кг этилового ошрта и 373 мм 12 н. соляной кислоты и полученную суспензию перемешивают в смесителе ЛяйтииНа в течение 20 ч. Затем основную массу жидкости отделяют центрифугированием, отжи.1ая остаток до 40%-него содержания в нем таердого вещества. Отжатую на центрифуге массу вновь суспендируют в 53,07 кг этилового спирта, некоторое время перемешивают и снова центрифугируют. Все операции по жидкостной обработке коллагенового материала проводят при 25-28 С. Массу, отжатую при последнем центрифугировании, сушлг в вакууме порядка 711-749 мм рт.ст. при 60°С в течение 22 ч. Получают 6,91 кг сухого колл геиового продукта, который подвергают коидициони рованию путем выдерживания в атмосферных уелоВИЯХ при комнатной температуре в течение 24 ч. Содержание влаги в конд1шион11роваш1ом продукте составляет 11 рес.%. Полученную конр йоииррванную массу подвергают затем Дезагрега1(ии и. пушению путем пропускания через мельницу типа Fitz МН1 при вращении ротора 6250 об/мин, снабжеш ую ситом , имеющем отверстия шаметром 6,2 мм. Полученный продукт пропускают через мельницу второй раз, н&ютзуя при этомсито № 2 А с отверстиями диаметром 1,65 мм. Конечный распущенный продукт содержит в своем составе 0,65 мт экв хлористого водорода (HCI) на 1 г коллагена, что соответствует примерно 84% от теоретичеоки возможного стехнометричео кого количества кислоты, которое может бып связано аминогруппамя коллагена. Наоыпная плогность распушенного волокнистого продукта 24кг/м, а удальиая площадь его поверхносгн приблизительно 1.9м/г. Полученный продукт нопытьтают по методу ГАТ - теста, величина ГА эффекта у этого продукта при использовании дпя его см&чивання АВ крови равняется 4S3, в njffl использовании А - крови соотаетсгвет 477. При измельчении образца полученного продукта в воде путем обработки суспензии, содержащей 0,5вес.% раотущенных, тонкоизмельченных волокон в воде, в дезинтеграторе типа Waring Blender при высокой скорости вращения ротора в течение 30 мин получают стабильную дисперсию с рН 3,10. Пригодность полученного коллагёиового продукте Рролеря1пт с ппмгч 1ью in vitro. При проведешш испыгяшш каждый o6pa: ei( трижды подвергают воздействию пенефомегра в трех рааш1 шых точках ла поверхносш об))а. По резульгагам этих трех измерошй выводят cpeJUiюю величину, которая выражается в виде расстояшя, эквивалентного глубине пенетрации и изме{х;шго1о в десятых долях мм, которое умножают на 10 н обозначают как оценку ГА эффекта. Испытания на мишотшис показали, что величина ГА эффекта у продуктов не превышает 1500 и составляет предаочтитедано менее 900. Образф продуктов, которые одновременно обладают гемостатическикл и ад|езио1шыми свойствами, смешивают с человеческий кровью и иикубируют в течение 1 ч в гермостаге при температуре 36,7° С, эти продукты имеют цвет от темно KpacHoit) до черного, тогда как коллагеновые iipi дукты, у которых отсутствуюгадгезиоши.ге сьонства имеют цвет от красного до корнчнево -о.. Если пропорция коротких волокон (длиной не более 1 мм) в коллшеновом продукте соаавляет менее 5 вес.%, возможно грузщирование или агрегация более длинных волокон в пачки, что приводит к потере коллагеновым продуктом гемостатнческих и адгезионных свойств. Если нроиорцня коротких волокон является слишком высокой, возможна потеря адгезионных свойств. Критерием распределения волокон по длине в массе коллагеновых продуктов и мерой раагушениосш этих продуктов на отдельные волокна и небольшие пучки волокон является насьщная плотность. Продукты сжтают удовлетворительными и пригодными Для использоЕаш1я в том случае, если нх насьшная .1нртностг не превьпиает 128,5кг/м Коялагеновые продукты П вращают в. не тканые материалы и рогожи любой толщины, которые нарезают на кусочки требуемой величины и иотол зуют для покрытия мест сркза разлишых биологических тканей, з часткрв, с которых удалена, повреждана или обожжена кожа. Такие лнсточкк накладывают на то место селгзеики, с которого был взят поверхностный срез и равномерно прижимая его к ране добиваются остановки кровотечения. Волокнистый гемостатический материал стерилизуют путем обработки эпшеноксидсял. Волокнистый материал может быть смешан с различными антисептиками, бактергададньоли веществами, фунгицидами, лекарственными препаратами и ангибиотиками. Эти добавки растворяют в обрабатывающем растворе на последней стадии обработки, поэтому добавляемое вещество диффундирует внутрь волокон, пропитьгаая массу волокнистого гемостатяческого MaTeptiana, Формула нзобретеппя Способ получе шя волокнистого гемоствгикского материала путем фчб{)илш1за П н. иэметчеиив 7 коллагена и высушивания, от ли чающийся тем, что, с целью П{ждания ему адгезионных свойств, коллаген неред высуишванием обрабатымют органическим растворителем, смешивающимся с водой и высушенный коллаген или его не-5 . 8 noirayra кислую коль измельчают до тсыпногп веса 24-128,5 кг/м, со сбободной поверхностью не менее , с длиной волокон меньше 1 мм не менее 5 вес.%, с дгшной волокон больше 12 мм не более 10 вес.%.