Вирус-инсектицидный состав и способ его получения Советский патент 1978 года по МПК A01N9/00 C12K7/00 

(54) ВИРУС-ИНСЕКТИЦИДНЫЙ СОСТАВ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

слеиуюшне вирозы: попиэарозы ядра, ntrroплазмвт(1Ческве полиэарозы, гравулезы и инсектные вирусы оспы.

Предпочтительно используют инсектициды, содержащие вирусы полиэдрозов яцра (нуклеиновый полиэдрозный вирус-НПВ), для Hettoth.Cs eeoL/HitCotKCs vtiescens, Trtditoptuuci nt. Uaplxye-ma f rug-lperda и LapKyiy Yna entdna.

Интерес представляет также вирус гранулезы (ГВ) при Lc &peyt esici pOTno-neltoi, A chicep o-rQ-yrofipttui и Afg yrdtatntq

Под названием вирус-инсектицид подразумевается йй только само замкнутое тело, но также и другие разрушенные органические материалы ее; иогут быть отделены от замкнутог р теяа, но и не оказывахуг отрицательного Вследствие этого отдельная частица и состав как це- лое могут иметь относительно низкое содержание патогенного вируса.

Нижняя граница эквивалента активности состава соответствует по меныией мере LB 50 - f /мл. Активность может измен ься в пределах О,ОО1 - 1,0 V /мл, предпочтительно О.ООЗ - О,4 Г/мл.

Предлагаемый вирус- инсектицидвый состав приготавливают путем распылительного высушивания ВОШ1ОЙ смеси, содержащей 0,1 - 35 вес. % вирус-инсектицида и 6599,5 вес. % матричного материала, состоящего из инертного белкового материала и/или глины. Температура водной смеси, которую вводет в распылительную сушилку, может колебаться от 12 до 38°С при температуре вывода 49 - 138°С. Смесь можно подавать в распылительную сушилку под оавлением 0,34 -. 3,0 атм, предпочтительно 0,64 - 2,5 атм.

Процесс распылительного высушивания проходит быстрее при низких температурах. Температура в распыл1в тельной; зоне не должна превышать , Перепад температур между j $iBp BO;yi является относ HipehibBonepeiM« w p мо жет составйять lOSoC ;

Тепло для : процесса р;8спылительн1яго высушивания обычно обеспечивают подачей нагретого инертного газа, который не оказывает вредного влияния на составные части вирус-инсекцида; можно использовать и воздух.

Продолжительность процесса высушивания при 49°С и выше не должна превышать 15 с , предпочтительно 10 с.

Водная смесь, подаваемая в распылительную сушилку, представляет собой водную суспензию твердых составных частей (рус-иксектицида и матричного материвла), содержание которых не должно превышать 3 - 38% от обшего веса водной смеси. Все твердьге составные части нахсдятс в смеси в тонхонзмельченном состоянии, а матричный материал в возможные добавки в пылеобразном, способны проходить через сито 2ОО меш и имеют величину частиц О,1 - 5О мкм, предпочтительно О,2 2О мкм.

Препараты, полученные из ацетона, являются очень тонкозернистыми порошками с величиной частиц 0,5 - 18О мкм. Вирус-инсектициды, полученные не по ацетонному способу, измельчают в присутствии определенного количества воды, чтобы получ ть препарат, который проходит через сита 50- 15О меш, предпочтительно too мевд, И у. koTOJspr o замкнутое тело освобождено от материала-носителя или же материал-носитель очень тонко измельчен (0,5 - 1ОО мкм, предпочтительно О, 515 мкм).

Личинки насекомых, содержащие вирусинсектицид, переводят в водно-дисперсное состояние обычными методами. рН водной дисперсии вирус-инсектицида 2,0 - 5,0, оптимальное 5,5 - 8,0.

рН водной смеси 5,5 - S,0 поддерживают добавлением 1-12 вес.% (считая ва вес вирус-инсектициаа) любого известного водорастворимого неорганического ({юсфата, например моно- и дигисфофосфата натр яя или мл ия.

ДобаЬка неорганического фосфата в виРЯ -инсектццидаый состав делает его более устойчивым к твииу и {фугим вли5шиям окружающей среды. .

В качестве матриц, целесообразнее применять обез жиренный 6|е11ковый матер вал, такой как обезжиренная Myka соевых бобов (К -соя), обезжиренную, муку .Из. семян хлопчатника (профло); об ажв е1н:ну1Ь муку из семян поосолненникл- я экстракты различвого:нро схоЛйввшя, |фвдаочтвтелько обезжвфёнвый соевый. б.еаок. Из животных белков ;можно исполъ овату снятое молоко, казеин и яичный альбумин (пой бепкдвьш материалом .пощух у лвъвется. вещество, содержащее не более 25 вес. % протеина).: ..:

Глина, применяемая в составе, может быть тонкоизмельченной или порошкообразЛюй. Пригодны, например, каолиновые глины (каолин jeong -a ), строительные глины, аттапульгиты и бентониты.

Весовое соотношение белка к глине составляет от О,1 до 10 : 1, предпочтительно от 0,5 до 3:1,

Как показали опыты, предлагаемый состав характеризуется повышенной стабильностью, смачиваемостью, твердостью и/или адгезионной способностью. Опыт 1. Испытание на УФ-стабильность Пробу состава суспендируют в кратном количестве воды, помещают в чашку Петри выдерживают 5с под УФ-светом и затем з меряют инсектицидную активность. Сравнение результирующей активности с первоначальной показывает меру УФ-чзтабнльности состава. OnbJT 2. Испытание на смачиваемость. Пирексный стеклянный стакан (10,5x8,5 № ЮОО устанавливают у колы1ввого уровнемера, наливают в него ЮОО мл вооы, Нагретой по 23 С, над стаканом помешают пластиковую воронку (внешний диаметр В(ронки Ю см, внутренний циаметр трубки 1,6 см)- таким образом, чтобы конец трубки воронки нахоанпся на 1О см выше поверхности вооы. В воронку помешают О,5г преолагаемого состава и измеряют время до момента полного увлажнения .плавающего материала. Время 6О с характеризует хорошую смачиваемость состава. Опыт 3. Испытание на адгезионную способность :Две капли 0,5 вес. %-и6й суспензии :вирус-инсектицидного. состава наносят на носитель объекта и ocrasmocrT на 2. ч при комнатной температуре ао об{М1завайня сухого покрытия. Тонкий слой визуально вы гляиит хорошо. Носитель объекта выперживают затем под утлом 45 на глубине Юсм в воде, текущей Ъо скоростью 1О мл аа 15с. Глубина, на которую слой призывается протекающей воаой, может быть опрев делена без труда..Относительное количеств видимого омытого протекающей воаой и ещ склеенного у:поверхности материала приниЦ мают за меру. авге зйоЦврй-способности.

Т а б лиц

а 1 Опыт 4. Испытание на твердость частиц. Диаметр частиц в водной суспензии определяют при помощи Петров-Нансён-пзмерительного прибора для бактерий под фазовым 11ликроскопом. Твердость частиц в одной суспензии измеряют, еле дующим образом: О,5%-ную суспе| эию вводят в цилиндр емкостью 100 мл и 30 раз в течение 6О с переворачивают иилинцр вверх и вниз. Целостность частиц наблюдают поц JcTepeoMnKpocKonoM.. Мягкие частицы распадаются с образованием тонких квазиаморфных частиц, а твердые частицы сохраняют шарообразную форму. П.р и м е р 1. Дважды разделенные пор дни йо 8О г погошкообразного технического концентрата HeCLOtKCs exi , пйлученного по ацетонному способу, с биологической активностью, вычисленной как L05o,0,OO30,О6 . Г /мл HetCotKts гвл , пер- вой стадии личинок переносят с помощью wartnor часового стекла в порции по БОО мл воды .в течение 1 мин. Различные ксмтичест ва составов (см. табл.1) суспендируют в II л воаы и перемешивают с одной из вирус-суспенаий. Объем каждой отдельной сме- си оовоцят водой до 15 л-и перемешивают до получения гомогенной суспензии. Вируссуспензий высушивают распылением при пературе ввода 160 С и температуре вывода 71 С, поддерживая давление 1,5-2,5атм. Размер отверстия сопла на выходе (влияет на размер частиц) N SA 0,044. Каждый из полученных вирус-инсектицидных составов j испытывают на активность, смачиваемость, адгезионную способность и прочность частиц. Результаты приведены в табл.1.

Строительная

глина

Каолин

К-соя

Снятое молоко

Строительная

1500+8200,15 глина+каолин

Твердые

Хорошая

Хорошая

Мягкие

Твердые

Равномерная

Аморфные

Равномерная

Твердые

Хорошая

Строительная глина + К-Соя

150О+820

К-юоя строительЗнак йпюс означает, что состав склеивае«:5, П р и м е р 2. Смесь, состоящую из 80 г порошкообразного технического концентрата HettOth.ts неа , полученного ацетонным способом, 50 г дигидрофосфата /калия и 2,0 г гептагидрнта сульфата магнии, смешивают с указанными в табл.2 компонентами, добавляют 1 л воды, переме шивают до образования гомогенной суспензии, затем каждую из трех суспензий разСтроительная7100+4100 О,12 глина + К-чзоя Ц2ОО0,11 Профло , Строительная 71ОО+41ОО О,12 глина + профло Ворон/Н +технический концентрат порошка лактозы (ТКПЛ). 6(%)+94(%)

8 Продолжение таблицы 1

0,12

Хорошая

Твердые минус вымываетхзя. бавляют водой до 5,28 л и устанавливают значение рН 6,5, добавляя гидроокись калия. Далее суспензии высушивают распылением, как описано в примере 1, и определяют активность и физические характеристики полученных вирус-инсектицидных составов. Контролем служит вирус-инсектицид рирон/Н с добавлением измельченной лактозы. Результаты представлены в табл.2. Таблица2 45Хорошая Твердые5-25 50Хорошая Твердые5-25 35Хорошая Твердые5-25 90Равномерная Аморфные

h р и к е р 3, Две смеси, содержащие по 5рбб г замороженных пораженйых вирусом личинок Hetioth-Cs, гйа, суспендируют в 1,58 л воды, перемешивают 2 мин. Гомогенные смеси фил1/груют через снто (ЮОмеш) ОЛЯ удаления обломков клеток насекомых, К вирус-сырому препарату добавляют 6О г дигипрофосфата калия, 2,0 г сульфата магния, 7,0 г воцы а компоненты.

Строитепьная

6ООО+525О Твердые 5-25 35 глина + К-соя Каолин + профло 62ОО- -50ОО ввраые П р и м е р 4. Высушивают распылением составы, описанные в примерах 2 и 3, пендируют в кратном количестве воды, по-ЗО мешают в чашки Петри и выдерживают под

Замороженные личинки+

О,11 + глина + К-соя

Замороженные личинки +

0,13 + каолин + профло

указанные в табл.3, затем разбавляют во,дой до 5,284 л. Устанавливают рН 6,5 добавлением гидроокиси калия. Распылительное высушивание проводят при температуре ввода 93,3 С, вывода 6О С и давлении 10 -.1,3 атм (сопло А 027),

Результаты испытаний полученных вирусинсектицидных составов приведены в табл.3.

ТаблицаЗ

0,103

Хорошая

О,109

74

О,15

87

0,15 5-25 45Хорошая УФ-светом, Затем определяют УФ-стабильность вирус-инсектицидных составов. Для сравнения испытывают известный состав Вирон/Н, Р.езулыгаты приведены в табл.4, Т а б л и ц а 4

П р и м е р 5. BbicjrmeBHbie распылением препараты по примеру 2 и 3 хранят при 5О и при 38°С. затем через некоторый промежуток времени извлекают и определяют их термическую стабильность. Остаточная

Замороженные личинки + глина + К«ч;оя

Замороженные лнчшкв «каолян + профло Питательная среда, в которой проводят испытания в вышеприведенных опытах, имее следующий состав мл: дистиллированная во да ЗДОО; метилпарасяссвбензоат (15% вес/ в 9 %-вом алкилалкоголе} 36; хлорид холи на конпонтрация (0,1 г/мл воды) 36; гийроок1юь калия (4М) 18f формалин(О,1 г/м 25; витаминный концентрат, состоявши из 6ОО мг ниаияна, 6ОО мг пантотената каль ция, ЗОО мг рибофлавина, по 15О мг 1ТИамина, пироаоксина и фолиевой КЕЮЛОТЫ, 12 мг биотина, 1,2 мг витамина В 1ОО мл дистсшлированкой воды, 6. I./ . HqjManbuae содержит, rr каеек ив 126 сукррза 3.26 рорткв BiiieHHm i 1О8, агер Вессова36,,апьФвцел 18, аскорбввовая кнспота также авгвбиотики (хлортетрацнклнв кавБМНпнв)| П р и м е р 6. Высушиваю распылеввем аналогично примеру 3 водную смесь из 8% вирус-сьфого препарата (Н. t), котЬрый содержит определенное количество разрушбввых клеток (прошедших через сито 1ОО меш), 56% , ЗО% атТаклбя (аттапулыит) и 60% дигидрофосфата калия. Общее содержание твердых веществ в водной смеси 20 вес. %. Частицы твердые, об

аютивйостн препаратов ; сохраняется дольше после хранения при 3S С (полуперион распада более длителен). Результаты представлены в табл. 5.

Таблвпа 5

38,5

10 28,О

9 ладают способностью смачиваться и необ хЬдвмымн адгезионными свойствам)« йимеют LD 5в Х)Д)1-Ь,1 Г/мл. Следует отметить, чтб Т рвготовлввшйв распылительным высушиванием водной смв си вирус-инсектицидные составы содержат от 3 до 1О вес. % влаги,- обычно .%. Формула изобретев-ия 1.Вирус-инсектицидвый состав с характервыми частицами вируса, о т л и ч а югш и и с я тем, что он содержит 0,1-35 вес.% вщ)ус-и0свкгицвда, предстшяшо шего собой полиэдроаный ядерный вирус, предпочтительно fie tOfchC&. ti, 6599,9 вес. % матрицы, состоящей из белкового материала и/или глины.. . 2.Состав по п. 1, отличают йс я тем, что величина частиц вируса составляет 3-150 мкм, преопочтительво 5-50 мкм. 3.Состав по П, 1, о т л и ч а ю щ « йс я тем, что он содержит 1-12 вес % любого известного во дрраствооимого неорганического фосфата. 4.Способ, прлуя0ния в ирус-инсектици дного состлба , о т л и ч а ющ и и с я тем, что -во иную смесь с соаержанием 0, вес,% вирус-йнсектииида я 65-99,9 вес. % матричвЬго материала, состоящего яэ инертного белкового материала я/илн глины, причем вирус-ярсект яо и матричный материал вместе ct ставляют 3-35 вес.% вопвой смеси, высушивают распылением. 5.Способ во п. 4, отличающий с я тем, что вводимую водную смесь вы сушявают распылением при температуре вво да 12-38 С и пря температуре вывода49138 С. 6,Способ по п. 4, отличающий t; я тем, что время выаерживания смеси в условиях распылительного высушивани соЬтавляет менее 15 с. 59 7, Способ по п. 4, о т л и ч а КЗ ш и йс я тем, что рН водной смеси составляет 5,5-8,0. Источники информации, приняты во внимание при экспертизе: 1.Орловская Е. В. Вирусы насекомых и (ИХ применение в защите растений. Обзор ли гературы, М., 197О, 2.Орловская Е. В, и Сефиханов Ш. С. Экономическая оценка применения препарата ририн-энщ. Лесное хозяйство , 1974, № 6, Ю.91-93. 3.Дикасова Е, Т. и Талипов К. А. Раа|)аботка способа изготовления вирусного пре.парата. - Узбекский биологический журнал , 1975, N 6, с. 60-61. . 4. JOurTiat of Anvertebrate athoWJy, 1965, , N 2, p. 217-226