Адъювант Советский патент 1978 года по МПК A61K35/78 

(54) АДЪЮВАНТ

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в биологической промышленности и научно-исследовательской -работе при производстве и разработке инактивированных противоящурных вакцин, а также диагностических сывороток.

Иммуногенность и эффективность инактивированных иротивоящурных вакцин в значительной стеиени увеличивается с использованием в технологии их изготовпе1шя несцецифических стимуляторов иммунитета - адъювантов.

Известно применение в качестве адъювантов при изготовлении ящурных антигенов гидроокиси алюминия АЕ(ОН)2, которая является слабым адъювантом в кo пшeкce с ящурными антигенами. Масляные адъюванты (типа ацъюванта Фрейда и др.), которые, обладая выраженными иммуностимулирующими .свойствами,имеют повышенную реактогенность и требуют создания стойких сложных эмульсий. Известны отдельные вещества из группы сапонинов, широко применяемых в настоящее время в качестве адъювантов при производстве протиБОЯщурных вакцин i1.

В СССР при юготовлеции противояшурных вакцин используют иглпоргный сапонин, изготовленный ф111рмой Merckf (ФРГ) из растения Nn.inbUHHKH пекарегвенной -SoiPOHani Q oW Cinoi bi s.

Однако все известиые Сйпоинны с адъювантным действием (описппш е в литературе, и импортируемые из ФРГ и Англии) иэготавли1 аю1ся из растений, не произрастающих ia территории нашей страны. Высокая стоимость импорТ1Гп х препаратов и ежего(ное увеличение потребг1яемого п биопромышлешюсти и научпо-исспецоватеиьской рабо1е сапонина, увеличивают затргпы на его закупку за границей.

Целью изобрететиш является расширение ассортимента апъюБинтов. облаишощих высокими им.нocтим. свойствами и способных заменить импортный препарат сапонин при производстве ищур1плх ант и-еноБ, используемых для получения протипоящурных вакцин и диaгнocтичecкILx сывороток. Поставленная цель .досгигле: ся б71:1годаря применению известного препарата гипсог ипина в качестве е пъквпптй п гтротзподстве яшур3ных антигенов для получения протквоящзфных вакцин, и диагностических сывороток Известно применение гипеофилика уопьк для гемолиза эритроцитов при автоматическом счете лейкоцитов .Гипсофипин, получаемый из корней колючепистника (мыльного кортш зуркестанского)AcQrtihoBbvH.4Jwi g.pbophigoideb используется для раб-оты в автоматических счетчиках кровив виде 2%-ного раствора 0,9%-ном растворе хлористого натрия,, Гипсофилин состоит из три.терпенового гликозида и опигосахаридов Агпиконом арит пенового гликозида является гипсогениНд а углеводородными остатками : Д-гпюкозааДгалактоза, Ц-гпюкороновая кислота. Ц, -ар биноза, iJ. -рамноза, Д-фукоза и Д ксилоза, ГипсофилиНз, выпускаемый медицинской промышленностью, представляет собой аморф ный порошок от желтоватого до кремового цвета, растворимый в воде. Порядок использования гипсофил-ина в пр тивояшурной вакцине, следующий. 1ОО л вакцины содержат: Вирусосодержаший материал, кг6-12 Гидроокись алюминия (3%-ная), %4О IViHROitonoBHE буфэр %. Os5 Хлороформ, %5 Тиомерсал(1:1ОООО)(1-20000) Формалин ( 5%-ный раствор), %1 ГлицериН} %10 Хинозоп ( раствор), %1 Гипсо()илин (10%-ный раствор), %OjS-l Антибиотики (пенициллин и стрептомицин),ЕД/МП 2ОО Готовят 10%-ный раствор гипсофипина на дистиллированной воде, стерилизуют кипячением в течение ЗО мин или автоклавированием при 1,5 атм, в течение одного часа. . По окончании /ипактивапии вируса ящура в реактор добавляют под давлением димое количество глицеринадхинопоза и гип софипина, Eice компоненты перемешивают ЗО мин оН вакцины устанавливают в преде лах 7,6-7,8 путем давления 1Н или 5%-но го раствора химически чистой сопяной киспоты. Вакцину охлаждают до и подверг ют контролю на стерильностьа безвредность и иммунбгешюсть, после чего ее выпускают дпя практического применения Препарат гипсофшшн используют также в качества ар.ъюванта для получения гшгур 4ног-о ангигэна при изготовлении пиагноо.тических сывороток,В этом случав гипсофипин (кошентршия Os5%) добавляют в 1О%-ную вируссодерлшщую. афтоз№/ю суспензию, ггредназначенкую для гиперимл/г/низации морскта свинок. При использовании . гипсофилина в качест-ве адъюванта для получения цнагносгнчеСких. сывороток А, О и С установлено, что их титр с гомологичным вирусом раван 1:80. При получении диагностических сывороток с использованием импортногэ сапонина их титр превышает 1:407-1;30, а без .добавления ацьювантов составляет 1;2О. В лабораторных опытах определяли адью вантные свойства гипсофилина для мышей весом 2О-22 г и морских свинок весом 450500 г. На мышах и морских свинках определяли вакцинальную дозу () лапинизирсванной ГОА-формолвакцины из вируса А22 без добавления ацьюванта, а также при введении гипсофилина и контрольного сапонина. Через 21 день после иммунизации мышей и морских свинок заражали патогенным цля них гомологичным штаммом вируса ящура и по количеству выживших животных рассчитывали ДУ;. Уменьшение ДУ при добавлении адъювантов в сравнении с ДУ препарата без них свидетельствовало об усилении иммунитета, т.е. об увеличении иммуногЕнной активности вакцины. Отношение препарата с а.дъювантом к препарата без стимулятора иммунитета показывало во сколько раз сравниваемые пшсофилин и сапонин увеличивали нммуногенность вдкцины. В табл. 1 приаецены результаты 10 опытов, пооведеннь Х на мышах с использованием гипсофипина в 2, мг на 1ОО г веса животного и средние результаты 5 опытов с контрольным сапонином в дозе 2,5 мг на 100 г веса животного. Данные табл. S. свидетельствуют о s.opoшем адьювантЕом действии гипсофилина для мышей. В табл. 2 представлены результаты излучения адъювантньгх свойств гипсофилина для морских свянок весом г. Гипсофилин к контрольный сапонин 1906179 применял в дозах 1 и 0,5мг на 100 г гкивого веса животного. Таким ооразом, гипсофилин для морских; свинок является таким же хорошим адъювантом, как и сапонин фирмы Mefck В табл. 3 представлены результаты опыта, проведенного на крупном рогатом скоте. Гипсофилин и контрольный сапонин применились в количестве 2,5 и 10 мг на прививную цозу. О напряженности иммунитета судили по титрам вируснейтрализующик антител

в сыворотке крови животных с гомологичным вирусом ящура А ( ЮООЛД д). Средние титры вируснейтрализующих антител по группам выражали в логарифмах с основанием 2 (лог.2). При этом считали, что чем выше титры вируснейтрализующих антител, тем сильнее адъювантное действие, обусловленное гипсофилином или сапонином.

Из табл. 3 видно, -что введение в вирусный препарат гипсофилина способствует более раннему образованщо вируснейтрализую- щих антител. Так, вакцина с гипсофилином в прививной дозе в количестве 2,5 и ДОмг обуславливает образование вируснейтрализующих антител на 7 день в титрах 2,9 и 3,24 лог.2 соответственно. Контрольный caf понин в этот же срок и в таких же дозах вызывает образование антител в титрах 1,3 Результаты сравнительного изучения адъювантных и сапонина на мышах

2,0

10

2,5

Сравнительное изучение адъювантных свойств гипсофилина и сапонина на морских свинках

1,0 0,5 1,0 0,5

и 2,08 лог.. У животных, привитых: вакциной без сапонина, к этому времени антитела еще на образовались, а на 21 день они не превышали 2,65±О.57 лог .д. У жи вотньк, привитых препаратом,.содержащимгипсофилин, гитр антител был 4,85±О,52 лог.д, при дозе 2,5 мг и 4,4 ± 0,52 лог..прн дозе 1О мг, В зги же сроки титр антител у животных, привитых препаратом, содержащим контрольный сапонин 19О6179 в дозах 2,5 и 10 мг, был равен 4,32± to,54 и 4,66+0,46 лог.2. Таким образом, результаты табл. 3 свидетельствуют о хороших адъювантныхсвойствахгипсофилина при оценке на крупном рогатом скоте, при этом его иммуностимулирующая активность в отдельных опытах даже выше, чем у импортного сапонина фирмы Mefck.

0,001

±0,21

1,83

0,001

1,57+0,09

Таблица 2

1,95 1,50 1,97 1,50 Таблица 1 свойств гипсофилина

7S

Адъювантные свойства гипсофилина и сапонина в опытах на крупном рогатом скоте Формула изобретения Применение гипсофилина в качестве адъюванта, при изготовлении ящурных антигенов. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

Таблица 3 30 1. Воробьев А. А и Васильев Н. Н.Адъю- ванты (Неспецифические стимуляторы иммуногенеза), М., Медицина, 1969 г., с, 18. 2. ТУ-.64-4-6-75 на Типсофилин, ут вержденные Техническим управлением Миннетерства медицинской промышленности 17,01.75, с. 14,