Способ получения стафилококкового анатоксина Советский патент 1979 года по МПК C12D7/00 

I

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в медицине при получении очищенного сорбированного стафилококкового анатоксина.

Известен способ получения стафилококкового анатоксина путем выращивания продуцента токсина на питательной среде с последующим отделением культуральной жидкости, содержащей токсин, обезвреживанием его формалином и сорбцией целевого продукта на гель гидрата окиси алюминия 1.

Однако известный способ не позволяет получить препарат с вьтсокой удельной активностью.

,

Цель изобретения - повышение удельной активности анатоксина.

Это достигается тем, что культуральную жидкость перед обезвреживанием токсина обрабатывают солями хлористого натрия и цинка, полученный осадок элюируют раствором двузамешенного фосфата натрия, затем элюат фильтруют через гел

сефадекса, а обезвреживание токсина формалином ведут в присутствии L -лизина.

Кроме того, обезвреживание токсина ведут О,О5-.0, раствором формалина в присутствии О;О125 ML -лизина.

Способ осуществляют следующим образом.

К центрифугату культуры стафилококка добавляют 2О% сухого химически чистого хлористого натрия при непрерывном перемешивании раствора. После полного растворения соли добавляют хлористый цинк в виде насыщенного раствора с тем, что1бы конечная концентрация хлористого цинка в центрифугате составляла 0,4-1%. Осажденный токсин оставляют на 16- 8 ч при 4-10 С. Образовавшийся осадок отделяют сепарированием от маточного раствора и элюируют 3-4%-ным раствором двузамешенного фосфата натрия. Смесь снова сепарируют, нерастворившуюся часть отбрасывают и элюат фильтруют через колонки с гелем сефадекса 6-75, уравновешенного борно-боратным буфером

йИ 7,1, вяюянйэ активного белка с колонок ЕгроЕОДят 9ТНМ же буфером. После ssOi активные фракции обьединяют, добаш1эк т -Ь .-ЛИЗИН в количестве 0,0125М формалЕН в концёН1рации Oj05- 0,1%, в еависймостн от специфической активности очищевного токсйпа, коррегнруют рН ас -7j2-.7s4 и проводят обезвреживание при 37°С в течение 1О-20 cyroic.

После обезвреживания анагоксин сорШруюу на гидроокись алюмнния и исполь аушт ио известным схемам.

Использование предлагаемого способа обеспечивает получение высокоиммуноген йых препаратов, обладагрщих высокой

удельной активностью. Полученные препараты имеют среднюю удельную активность на 1 мг белкового аэота сред НИИ титр антитоксина в сыворотках иммунизированных кроликов составляет 7,

Формула изобретения

1, Способ получения стафилококкового анатоксина путем выращивания продуцента токсина на питательной среде с последующим отделением культуральной жидкости, содержащей токсин, обезвреживанием его формалином и сорбшей целевого ггродукта на гель гидрата окиси алюминия, отличающийся тем, что, с целью повышения удельной активности I анатоксина, культуральную жидкость перед обезвреживанием токсина обрабатывают солями хлористого натрия л цинка, полученный осадок элюируют раствором двузамещенного фосфата натрия, затем элкэат фильтруют через гель сефадекса, а обезвреживание токсина формалином ведут в присутствии L -лизина.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и-й с я тем, что обезвреживание токсина ведут 0,05-0,1%-ным раствором фopмa шнa в присутствии 0,0125MLлизина,

Источники информации, принятые во внимание при Экспертизе

1. Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов. Под ред. С, Г. Дзагурова и Ф. Ф. Резепоча М,, Медицина, 1975, с, 161-163.