Способ получения анатоксина Советский патент 1979 года по МПК C12D7/00 

I

Изобретение относится к области ми робиологии и может быть использовано в медицине при получении очшиенного анатоксина.

Известен способ получения анатокси- 5 на путем выращивания культуры СЕвь1гНйИ- , urn p r f ingens на питательной среде, отделения биомассы и стерилизации полученного фильтрата культурал ьной жидкости с последующим осаждением целевого продукта, ю его элюцией, очисткой, обезвреживанием формалином в присутствии U - лизину f сорбцией на гидроокиси алюминия ij.

Однако такой способ не обеспечивает высокой иммуногенной. активности анаток- 15 сина.

Целью изобретения является повышение иммунногенной активности айатоксина.

Это достигается тем, что культуру вырашивают на казеиново.41анкреатической то среде, целевой продукт осаждают из фипы рат кУйьТ Шьной жидкое тк coiiaM« jaio рис того натрия и цинка и обезвреживание ведут 0,07 ,1253 ным раствором формалина в присутствии О,О125-О,05 М раствора L - лизина.

Способ осуществляют следуж шим o6U разом.

К стерильному фильтрату культурчы )оегЧmng ensдобавляют 2О% сухого химически чистого хлористого натрия при непдерывном перемешивании раствора. Послеполного растворения соли добавляют хлористый цинк в виде насыщенного раствора для того, чтобы конечная концентрация хлористого цинка в центрнфугате со5тавл5й1а 0,4-1%. Осажденный токсин оставляют на 16-18 час при температуре 4- 1О С. Образовавшийся осадок отделяют сепарнрованием от маточного раст- Ьора и элюируют 3-4%-ным раствором двухзамевденного фосфата натрия. Смесь снова сепарируют, нерастворившуюся часть отбрасывают и елюат фильтруют через колонки с гелем сефааекса Г-75, уравновешен нЬт:-6борно-боратным буфером рН7,1, элюцию активного белка с колонок проводят этим же буфером.

После этого активные фракции объеци няпог, добавляют L - лизшг в количестве 0,0125 М, формалин в концентрации .0,1%, коррегируют рИ до 7,2-7,3 и проводят обезвреживание при 37°С в течение 20-25 суток. После обезвреживания анатоксин сорбируют на гидроокиси anioминия и используют по известным схемам. Использование предлагаемого способа обеспечивает получение высоксиммуноген ных препаратов, обладающих высокой удель ной активностью. Полученные препараты в 2-3 раза превосходят по удельной и иммуногенной активностям анатоксины, полученные известным способом.

ФopVyлa изобретения

Способ получения анатоксина путем вырашивания культуры CEnStrid-iurn |oerfiHfl fns на питательной среде, отделения биомассы и стерилизации полученного фильтрата культуральной жидкости с .последующим осаждением целевого продукта, , его элюпией, очисткой, обезвреживанием формалином в присутствии Ь -лизина и сорбцией на гидроокиси алюминия, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенной активности анатоксина, культуру выращивают на казеиновопанкреатической среде, целевой продукт осажда1Ьт из фильтрата культуральной жид-, кости солями хлористого натрия и цинка и обезвреживание ведут 0,075-0,125%ным раствором формалина в присутствии 0,0125-0,005 М раствора L - лизина.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 20 1. дьрап з.месИЫпе бвепсе 21, 1968, с. 379-391.