Устройство для получения сухого обезжиренного вещества фрагментов ткани и клеток Советский патент 1979 года по МПК G01N33/15 B01D11/02 

pa. Вакуумная камера (фиг. 1) имеет корпус 1 с краном 2 и крышкой 3, снабженной наружным штуцером 4 с краном 5 и внутренним штуцером 6. К внутреннему штуцеру 6 крышки 3 с помош ью вакуумной трубки 7 подсоединен своим штуцером 8 экстрактор 9. Посредством наружного штуцера 4 крышки 3 вакуумная камера соединена с системой вакуумирования. Экстрактор 9 (фиг. 2) состоит из снабженного штуцером 8 корпуса 10 и вкладыша И, выполненных из прочного некоррозионного материала, и прозрачной крышки 12. Вкладыш

11разделяет экстрактор 9 на верхний 13 и нижний отдел 14 (жиросборник) и имеет отверстия, в которые вставлены изготовленные, например из стекла, ячейки 15. Дно 16 каждой ячейки 15 изготовлено из пористой пластинки, например стеклянной, имеющей поры диаметром, например 5-10 мк. Стенки ячеек 15 выступают за уровень дна 16 и входят в нижний отдел экстрактора 9 - жиросборник, сообш,аюш,ийся с каналом штуцера 9. Прозрачная крышка 12, которая закрывает экстрактор 9, прижимается к верхней поверхности вкладыша 11 и может быть сдвинута в горизонтальной плоскости в сторону штуцера 8, открывая доступ к ячейкам 15. После присоединения вакуумной камеры с помощью наружного штуцера 4 крышки 3 к системе вакуумирования с последней через наружный штуцер 4 и внутренний штуцер 6 крышки 3, штуцер 8, жиросборник, поры дна 16 ячеек 15 и верхний отдел 13 экстрактора 9 сообшается внутреннее пространство вакуумной камеры. Таким образом, находящийся в вакуумной камере экстрактор 9 так соединен с системой вакуумирования, что откачка воздуха из внутреннего пространства вакуумной камеры осуществляется только через верхний отдел 13 экстрактора 9 и норы дна 16 ячеек 15 экстрактора 9 и только по окончании фильтрования растворителя из ячеек 15.

Устройство работает следующим образом.

Пример получения обезжиренного сухого вещества отдельных фрагментов ткани - например, слоев коры мозжечка крысы, - выделенных из лиофилизированиых, толщиной 8 мк срезов мозжечка, и имеющих сухой вес 100-300 нг. Экстрактор 9 извлекают из вакуумной камеры, помещают под микроскоп типа МБС-2, сдвигают крышку

12экстрактора 9, открывая доступ к ячейкам-15, и каждый из фрагментов ткани помещают, контролируя процесс с помощью микроскопа, на дно 16 отдельной ячейки 15 экстрактора. Для экстракции липидов из тканевых фрагментов ячейки 15 заполняют органическим растворителем в количестве 25 микролитров, крышку 12 экстрактора, закрывая ячейки 15, задвигают до уиора и проводят экстракцию в течение 5 мин при

комнатной температуре. Во время экстракции липидов крышку 3 вакуумной камеры посредством наружного штуцера 4 соединяют с системой вакуумирования и при

открытом кране 5 крышки 3 и нормальном атмосферном давлении в системе вакуумирования к внутреннему штуцеру 6 крышки 3 с помощью вакуумной трубки 7 присоединяют экстрактор 9. Затем на экстрактор

9 и крышку 3 надвигают корпус 1 вакуумной камеры, оставляя открытым кран 2 корпуса 1, до плотного соединения крышки 3 и корпуса 1. Кран 2 корпуса 1 закрывают и по истечении времени экстракции в системе вакуумирования создают уменьшенное давление, под действием которого в жиросборник из ячеек 15 через поры их дна 16 фильтруется содержащий экстрагированные липиды растворитель. Обезжиренное

вещество ткани остается на дне 16 ячеек 15 экстрактора. В жиросборнике растворитель испаряется, а его пары удаляют из экстрактора при дальнейшем вакуумировании. По окончании фильтрования растворителя, продолжая вакуумирование под контролем вакзумметра типа ВИТ-1А, через поры дна 16 ячеек 15 отсасывают воздух из внутреннего пространства вакуумной камеры и в вакууме - условиях, исключающих

абсорбцию влаги воздуха, - проводят сушку обезжиренного вещества тканевых фрагментов до достижения вакуума, равного 0,05 мм рт. ст. После чего кран 5 крышки 3 закрывают, вакуумную камеру

отсоединяют от системы вакуумирования, открывают кран 2 корпуса 1, из корпуса 1 вакуумной камеры вынимают крыщку 3 с экстрактором 9 и экстрактор 9 отсоединяют от внутреннего штуцера 6 крышки 3. Экстрактор 9 помещают под микроскоп тина МБС-2, крышку 12 экстрактора 9 сдвигают, открывая доступ к ячейкам 15, и ячейки вновь заполняют, контролируя процесс с помощью микроскопа, органическим растворителем, затем крыщку 12 экстрактора задвигают, закрывая ячейки 15, и вновь проводят цикл операций. По окончании третьего цикла операций фрагменты ткани извлекают из ячеек экстрактора.

Устройство позволяет удалять из всех ячеек экстрактора одновременно экстрагированные лиииды вместе с растворителем в процессе получения обезжиренного сухого вещества, а не после его заверщения,

что дает возможность избежать после первого и второго цикла операций необходимости переноса фрагментов клеток и ткани из ячеек, содержащих экстрагированные лиииды, в чистые ячейки экстрактора и

тем снизить трудоемкость способа и повысить его надежность в результате отсутствия риска потери фрагментов клеток и ткаии во время процедуры их переноса, а также устранить необходимость удаления зкстрагированных липидов из ячеек экстрактора после завершения процесса получения обезжиренного сухого вещества, обеспечив этим возможность многократного использования устройства, что особенно важно при проведении количественного цито- и гистохимического анализа большого числа клеток и фрагментов ткани.

Формула изобретения

Устройство для получения сухого обезжиренного вещества фрагментов ткани и клеток, содержащее вакуумную камеру, экстрактор внутри вакуумной камеры, состоящий из корпуса с ячейками и крышки.

отличающееся тем, что с целью ускорения процесса получения сухого обезжиренного вещества и устранения его потерь, экстрактор снабжен вкладыщем с отверстиями, в которые вставлены ячейки с пористым дном, причем стенки ячеек выступают за уровень дна.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Шиммельт Г., Методика электронной микроскопии, «Мир, М., 1972, с. 162.

2.Краснов И. Б. Экстракция липидов из отдельных изолированных нервных клеток. Цитология, 1974, т. 15, № 12, с. 1535.

/.f

/3 iS ,6

fU2.1