Способ производства зернового бактероденцида Советский патент 1979 года по МПК C12K3/00 A01N15/00 

1.Стерилизация и сушка зерна нагретым воздухом (100° С) в течение 30 лшн; остужение зерна воздухом (40° С) в течение 30 мин.

2.Получение посевного материала нз культуры бактерий; рабочая ферментация в течение 14-16 ч при 37° С.

3.Заражение зерна и замачивание с г.акуум-гтерепадом (1 ч с перемешиванием); сушха зерна воздухом (40° С) в течение 1 (; расфасовка готовой продукции.

Благодаря использованию вакуум-переиада процессы заоажения и замачивания, стерилизации п остужения зериа, сушк| зараженного зерна длятся по , поэтому представ.ляется возможность обеспечить непрерывность технологического цик,U: и оборачиваемость оборудования.

При этом осуществляется дозирование

культуральной жг;дкости бактерий, подаваемой каждый час на заражение новой партии зерна в соотношении 0,3 : 1. Разгрузка и расфасовка новой партии готовой иродукци также осуществляются ежечасно.

Таким образом, технологический цикл выработки бактороденцида по предлагаемому способу длится 1 ч, а наличие необходимого количества культуральпой жидкости бактерий псзвол т обеспечить непрерывный процесс производства препарата.

Данные опытов по определению влияния продолжительности вакуумирования с иоследуюшим перепадом давления на интенсивность замочки и бактериального пелетирования зерна представлены в таблиие. Исходная влажность зерна 12%, исходный титр суспензии бактерий 1 .

Длительность вакуукк|К31::и: :.

19

Ги;еницы

;без вакуумперепада)

20

Как видно из таблицы, кратковремен1 ый вакууы-перепад в 2-3 раза интенснфицирует процессы, заражения и замачивания зерна.

Для a3roTOBJ7eH H зернового бактородснцкда по предлагаемому способу применялись близко родственные культуры бактерий - возбудителей тифа мышевидных грызунов Salmonella enteritidis Var. clssatchenko, Saimonella enleritidis var. Prochorovt (штаммы ЛЬ 5170 и № 5170/28) и Sainionella enteritidis var, cissatchenko штаммы ИХ и Кдп-1. Условия поддержания культур бактерий, их вырашиваипя и процессы изготовления препарата аналогичны при использовании указанных штаммов.

Пример. Культура бактерий тифа грызунов - штамм ° 5170, - храняш,аяся в лиофилизированном состоянии в ампуле, оживляется после вскрытия ампулы внесением в нее нескольких капель среды Мережковского (10%-ный отвар белка к риных яиц) и )зысезом на ту же агаризованну-ю среду в проЗирках. После никубаt,

22

3i

12

ет

22

16

0,3

цин в термостате в течение 1 сут. при 37° С из выросшей культуры делается пересев жидкую среду Мережковского и выдерживается вновь npit этой температуре 1 сут.

Выросшая ка среде Мережковского культура пересевается в пробнркп, кото эые после выдерживания при той же температуре в течение суток переносятся в холодильник при + 8° С и маточной культурой для заражения.

Посевной материал готовится в колбах на жидкой среде, содержащей, г :

Кормовые дрожжи (белково-витаминпый концентрат, БВК) 20.0

Хлористь5Й натрий 5,0

ВодаДо 1 л.

Изготовленная п ательная среда после доведения ее реакции с помошью 40%-ного раствора едкого натрия до рН 7,2-7,4 разливается по 2 л в круглодонные колбы емкостью 5 л и стерилизуется в автоклаве при дополнительном давлении 2 атм в течснпе I ч. Для заражения используют смыв агаровых косяков суточной культуры бактерий тифа грызунов на физиологическом растворе или в стерильной --дистиллированной воде. Суспензия бактерий вносится в колбы со средой из расчета 5%. Выращивание проводят при 37° С в течение 16-20 ч и после проверки на отсутствие заражения и фага используют для засева ферментера.

Рабочая ферментация проводится в ферментаторах емкостью 1 м на среде (рЙ 7,2-7,4), содержащей %:

Кормовые дрожжи (БВ1)2,0

Хлористый натрий0,5

Среда указанного состава стерилизуется в течение 1,5 ч подачей острого пара Р 3,0 атм при 130-135° С. Коэффициент заполнения ферментара 0,5. После стерилизации и остужения питательной среды в ферментер вносится 10 л посевного материала. Ферментация проводится при 35-37° С с постоянной аэрацией 0,5 : 1 об/об воздуха на среду в мин при избыточном давлении 0,3-0,5 атм. Мешалка (200 об/мин) включается каждый час два раза в течение 3 мин.

По истечении 14 час ферментация прекрапхается, проверяется титр клеток и отсутствие фаголизиса. Титр культуральной жидкости обычно бывает в пределах 3-5 млрд, бактерий в 1 мл. Поскольку культуральная жидкость ферментатора используется для заражения зерна порционном, то нолачей холодной воды в рубашку ферментатора достигается замедление развития культуры бактерий.

Перед заражением зерно ячменя (или нщеницы) предварительно подвергается частичной стерилизации иутем продувки нагретого до 90° С воздуха в течение 30 мин с последующим остужением его стерильным воздухо.м. После этого зерно подается в вакуум-сушильный барабан в количестве около 200 кг, куда через разбрызгиватель вносится 60-70 л культуральной жидкости бактерий. Браи1ая в течение 20-30 мин барабан, осуществляют замачивание и заражение зерна. Затем в барабане создается вакуум до 0,8 агл:, который держится в течение около получаса. После этого открытием вентиля сбрасывается вакуум, благодаря чему достигается интенсификация пелетировани.я зерна бактериями и процесса его замачивания.

Сушка заран-сенного зерна производится продуванием теплого воздуха (35- 40° С) в сушильных шкафах на противнях. Сушка завершается после достижения 12-

0 14% влал ности зерна. К концу сушки титр бактерий на зерне находится в пределах 1,0 млрд, клеток бактерий на I г зерна. Расфасовка готового препарата зернового

5 бактороденцида производ 1тся в бумажные мешки с соответствуюш;ей этикетировкой.

При произв одстве зернового препарата бактороденцида по козой технологии достигается значительное снижение себестоимости продукции (ориентировочно на

0 30%) за счет упрощек :я технологической схемы, исключения по сравнению с существующей технологией трудоемких и энергоемких процессов (стерилизации зерна в автоклаве, наращ {Бак:;е бактерий на зер5не) н резкого сокращения отдельных стадий производственного никла.

Фор м у л а 3 с б р е т е н и я

0

Способ ироизводства зернового бактороденцида, включающий ириготовление маточной культуры, замачивание, стерилизацию известными способами и заражение

5 зерна бактериям ;, доращивание клето;; бактерий на зерне и высушиваиие бактороденцнда, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощенпя i удешевления производства зернового бактороденцида, после приготовления маточной культуры проводят стерилизаиию зерна сухим горячим возл хом при 100-120° С. а заражение и замачивание зерна Be.iyi под вакуумол; до 0,8 агм 3 течение -1.0 ч при25-30°С. после чего сбрасывают сакуум з течение 5-15 мин.