Способ определения общей фосфатазной активности почв Советский патент 1979 года по МПК G01N33/24 

Метод громоздок и мало 1фигоден дпя массовых определений. Кроме того, он может feiTb использован только дпя тор- фяно-болотных почв.

Цепью изобретения является упрощение известного способа и егю унификация дпя почв с разной биопогической активностью.

Сущность изобретения состоит в том что дпя инактивации фосфатаз в почве контрольного варианта и дпя остановки

Использование различных концентраций качестве ингибитора фосфатаэ на каштановой почве

ферментативной реакции в опытном варианте использован метод одновременного высаливания фермента и осажде{шя органаческого субстрата из реакционной смеси с помощью ЮМ раствора CaCCg 2 мл ЮМ раствора СеСёп добавляет ся к 1 г почвы при времени его взав модействия с почвой 15 мин. Это позволяет инактивировать действие фосфатаз в основных т1шах минеральных почв.

Т а б л и Ц а

Контроль (без )

5 10 Последующее извлечение продукта гидролиза органического субстрата.-- иона РО4 производится с помощью О,02 н. НС г которая вносится непосредствешю в реакционную смесь. Использование раствора СаСЕ честве ингибитора почвенных фосфатаз и 0,02 н.раствора НС6 в качестве растворителя яона ортофосфата обеспечивает получение бесцветных и прозрачных почвенных фильтратов, не м ешающих после™ дующему колориметрическому определению фосфора ( которое проводится непосредст венно в аликвоте прозрачного фильтрата). В предлагаемом сп особ§ для измерения фосфатаз в почвах с различной биологической акт1авностью,ьремя настаивания органического субстрата с почвой увеличено с 1 ч до 2 ч. Это дает возможность выявлять фосфатазную активность и в почвах с малой биологической активностью, Опытный вариант. 1 г воздушно«су хой почвы (сито 0,25 мм) помещают в плоскодонные колбы емкостью в 100 мл, смачивают 1 мл диет, воды н приливают

34 19 16 10

46 53 70 82 раствор органического субстрата - 1 мл раствора фенолфтапеинфосфата натрия. Полученную смесь помещают в термо стат при 27 С и инкубируют с органическим субстратом. Затем в колбы приливают 2мл 10 М CaCi для остановки фермег тативной реакции, смесь перемешивают в добавлшот 10 мл 0,О2 н.;НСе для извлечения продукта ферментативной реакции - иона ортофосфата. Полученную суспензию встряхивают от руки 1 мин, настаивают 15 мин, отфильтровывают в мерные колбы на 80 мл, доливают диет. водой до метки н перемешивают ( А). мл раствора А переносят в мерные копбы на 50 МП, разбавляют водой и пригашают реактивы дпя окрашивания ({юсфора по методу Труога-Мейера. Контрольный вариант. 1 г воздушносухой почвы (сито 0,25 мм) помещают в плоскодонные колбы на 100 мп и для инактивашш фосфатаз приливают 2 мл

10 М раствора СаСб , смесь настаивают 15 мин. Затем сюда добавляют раствор органического субстрата в тех же количествах, как и в опытном варианте. Колбы ставят в термостат на 2 ч при 27 С. Затем приливают 10 мл 0,02 н. раствора НСЕ и далее извлекают и определяют фосфор точно так же, как описано выше в опытном варианте.

Активность фосфатазы вычнсляют по разности между содержанием фосфора в опытном и контрольном вариантах. 1олумгченные результаты выражают в на 100 г почвы.

Результаты определения активности почвенных фосфатаз : предложенным м&тодом приведены в табл. 2.

Таблица 2