Способ культивирования костного мозга больных лейкозом Советский патент 1979 года по МПК A61B10/00 

(54) СПОСОБ КУЛБТИВИРОВАНИЯ КОСТНОГО МОЗГА БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики по клинико-морфологическим данным труднодифференцируемых случаев лейкоза. Известен способ культивирования костного мозга больных лейкозом путе.м помещения клеток в гель, отстаивания, отделения надосадочного слоя, добавления плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом и выращивания 1. Недостатком известного способа является краткосрочность культивирования, а именно гранулопоэза (7-10 суток), что не позволяет изучать процессы дальнейшей дифференциации и созревания клеток in vitro. Цель изобретения является удлинение гранулопоэза. Эта цель достигается тем, что костный мозг помещают в 7-13°/о-ную желатину, к надосадочноиу слою после его отстаивания добавляют 0,2-0,75 мл плазмы крови больных хроническим лимфолейкозо.м и после ее свертывания добавляют 1,5-2,5 мл питательной среды, содержащей 30-50% несовместимой по группе сыворотки крови донора. Способ осуществляют следующим образом. Костный мозг, взятый у больных путем трепанобиопсии, помещают в количестве 2 .мл в Ю /о-ной желатине, отстаивают при комнатной те.мпературе 1 час, отделяют пипеткой надосадочный слой, разливают на ряд пенициллиновых склянок или каррелевских чащек, добавляют сначала 0,5 мл плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом, а после ее свертывания добавляют 2,0 мл 40%-ной несовместимой по АВО системе сыворотки крови донора, разведенной средой № 199, продувают воздухом, содержащи.м 5% СОг, не взбалтывая, герметически закупоривают, ставят в обычный термостат при 37°С. Желатина в концентрации ниже 7 % для осаждения клеток требует много времени, что вызывает гибель клеток, большие кондентрации, выще 13%, убивают миелокариоцитов. Добавление плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ) ниже 0,2 мл или в разведенном виде не оказывает in vitro ростстимулирующего эффекта, а добавление больше 0,7 мл убивает клетки костного мозга.

Добавление сыворотки крови донора несовместимой по АВО системе ниже 30% не обеспечивает питания клеток In vitro до 1,0-1,5 месяцев, концентрация же выше 50% нарушают водно-солевой баланс клеток в эксплантатах и вызывают скорую их гибель.

Культуры перед фиксацией взбалтывают, выливают в центрифужные пробирки, центрифугируют при 1000 об/мин в продолжении 3 мин, сливают надосадочную жидкость, осадок взбалтывают, пастеровской пипеткой переносят на предметные стекла для приготовления мазков, высушивают мазки на воздухе и красят по методу КрюковаПаппенгейма для изучения морфологии, а также для ряда цитохимических реакций с целью выявления тех или иных ингредиентов.

Полученные из культур препараты не отличаются по качеству от приготовленных из нативного костного мозга.

Предлагаемый способ обеспечивает удлинение гранулопоэза до 1,0-1,5 месяцев, позволяет выявить характерные изменения

при различных вариантах острого лейкоза, хронических миело- и лимфолейкозов, что особенно важно для их диагностики.

Формула изобретения

Способ культивирования костного мозга больных лейкозом путем помещения клеток в гель, отстаивания, отделения надосадочного слоя, добавления плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом и выращивания, отличающийся тем, что, с целью удлинения гранулопоэза, костный мозг помещают в 7-13% желатину, к надосадочному слою после его отстаивания добавляют

0,2-0,75 мл плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом и после ее свертывания добавляют 1,5-2,5 мл питательной среды, содержащей 30-50% несовместимой по группе сыворотки крови донора. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Проблемы гематологии, 1975, т. 20, с. 49-53.