Модифицированный террилитином декстран, обладающий фибринолитической активностью Советский патент 1980 года по МПК C08B37/02 

Изобретение относится к области производных декстрана, обладающих ферментативной активностью, в частности фибри нолитической, которые могут быть испол зованы в качестве лекарственных препаратов в медицине. Известны производные поливинилпирролидона, обладающие протеолитической активностью l . Однако указанные производные поливиниппирролидона при парэнтеральном вве дении Из-за отсутствия биосовместимости накапливаются в тканях и органах, приводя в дальнейшем к патологическим изменениям в НИХ. Наиболее близкими к изобретению являются производные декстранов, представдяющие собой продукты модификации декстранов низкомолекулярными физиол1 гически активными веществами - биологическими аминами, такими как норацрёналин обшей формулы ( ( ), (,), где Нор - норадреналин. X 20-80% - доля неокисленнь1х звеньев декстрана, 20 - 80% - доля окисленных звеньев декстрана. Производные декстранов получают обработкой декстранов физиологически активными веществами в водном растворе Однако Известные производные цекстранов не обладают энзиматической акгавностью. Цель изобретения - получение физиологически -активных водорастворимых производных декстранов, обладающих энзима тической, в частности фибринолити ческой активностью. Поставленная цель достигается получением протеолитического фермента террилитина, присоединенного к окисленномудекстрану азометиновой связью с последующим восстановлением этой связи и избытка альдегидных групп полимера-носителя. 37 Взаимоцействис лекстрана с (ол.кулярной массой от 20 тыс. по 11О тыс., окисленного до степогти окисления 6-48% с террилитином, осушестЕи1яют в ЕЮПНОМ буферном растворе при р1 7,5-10,О, те пературе 15-25 0, в течение 15-180 мин при соотношении реагентов в реакционной смеси (декстрана и фермента) от 10 : 1 до 1,2 : 1. Модифицированные террилитином производные декстрана после очистки диализом выделяют вместе с полимером или отделяют от избытка не вступившего в реакцию фермента с помощью гель-хроматографии и высушР1вают лиофильно известными способами, Oim имеют обшую фop fyлyS .ч (C.W.)x( Оз . - )у СЧ V где Тер - протеолнтический фермент тер р или тин; X 52 - - доля неокисленных звеньев декстрана; 6 - 48% - доля окисленных звеньев декстрана. П р и м е р, 165 мг декстрана с молекулярным весом 20 тыс., растворенного в 3,3 мл воды (концентрация 50 мг/мл) и окисленного до степени окисления 24%, смешивают с 4,9 мл раствора террилитина в 0,1 М боратном буфере с рН 8,5, содержащего 82 мг сухого фермента с удельной активностью 20 ПЕ/мг и обшей активностью 1640ПЕ Реакционную смесь перемешивают при 2lil°C в течение 2 ч при рН 8,5. Затем добавляют 1 мл 0,1 М раствора бо ратного буфера, содержащего 40 мг бор гидрида натрия, и перемешивание проводят при 2111 С в течение 40 мин. Полученный препарат модифицированного ферментом декстрана диализуют на холоду (4±2 С) против дистиллированно воцы в течение 48 ч и лиофильно высуживают. Получают 235 мг сухого пре парата с удельной активностью7,4ПЕ/м и общей активностью 174О ПЕ. Выход 4 пролукта соста1 ляет . от HW ar-nitnii энзиматической акти1М1ости. Под степенью окисления ( ) понимают число окисленных зпеиьев декстрана, приходящееся на 100 элементарных звеньев декстрана. В таблице приведены датпгые по фибринолитической активности и степени ингибнрования сывороткой крови человека дативных протеолитических ферментов (трипсина, террилитина) и модифипированиых п роте ОЛИ ти чески м ферментом (террилитином) производных декстрана. Предлагаемые физиологически активные водорастворимые производные декстранов, обладающие энзиматической, в том числе фибринолитической активностью, могут быть использованы в медицинской практике при лечении гнойных ран, ожогов, воспалительных заболеваний и в качестве тромболитических препаратов. Препараты могут также найти применение при разработке технологических процессов гидролиза белков под дерютвием модифицированных гидролитических ферментов, позволяющих )фективно прогзодить эти пропессь; в Mev6paHiU)ix реакторах. Модифицированные террилитином -производные декстранов являются физиологически активными препаратами, причем п процессе модификации протеолитическая активность террилитина практически не изменяется, в то время как увеличение молекулярного.веса получаемых препаратов в срав1тении с нативньгм (ферментом обуславливает меньшую скорость его выведения из организма. Модифицирован1 ые террилитином произвоа(пле декстранов ингибируются сывоpOTKOPi крови в значительно меньшей степени, чем нативные ферменты (трипсин, террилнтин), что яатяется их преимуществом. Для промышленного получения препаратов аппаратур юе о4)ормление процесса не требует каких-либо новых (в сравнении с известными способами) элементов оборудования.

Трипсин

Террилитнн

Лекстран мопифициРОЕИННЫЙ

террилитнном

ПЕ- количество сыворотки, необходгмое цпя ингибирования одной ед-шицы протеолчтической (казеинолитической) активностч на 5О%.

Формула изобретения

Модифицированный террилитином декстран обшей формулы ( C.oU(,NH-.ep)y(a,,, ,

где Тер - протеолитический фермент террилитин;

X 52%-94% - доля неокисленных звеньев декстрана;

0,061,0

0,254,2

17,0

1,02

V- Z 6%-48% - Доля окисленных звеньев декстрана; обладающий фибринолитической активностью.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Авторское свидетельство СССР

Ко 522198, кл. С 08 F 271/О2, 1975

2.Патент ГДР № 90197, кл.

кл. 30 Н 2/30, опублнк. 1973 (прототип).