Штамм продуцент глюкоамилазы Советский патент 1980 года по МПК C12N9/30 C12N13/00 

Изобретение относится к пищевой ttpc мышпенности, к получению нового штам ма RhiiOpus triticit продунента высокоактивной гпюкоамипаэы, используемой при гидролизе крахмала и крахмалсодержащего сырья в крахмалопатЬчной, спиртовой и пивоваренной промьшпенности,

Наиболее близким к изобретению является штамм Rhtxopus tritici. Культура гриба хранится в коллекции Института микробиологии АН СССР под номером ВКМ б19.

ферментативный комплекс исходного иггамма содержит глюкоамипазу с акти&. ностьго 80 ед/г воздушно- :ухой культуры и с(.-амилазу с активностью 15-20 ед/г воздушно-сухой культурам. RHizopus -t iiiCi ВКМ|619 - термотолерантный, с максимумом температуры роста 42-43°С 1 .

Недостатком этого штамма можно считать низкую активность глюкоамилазы и f -амкпвзы, что осложняет применение его в ферментной .промыишенности.

Цель изобретения - повышение активности ферментов амилолитического комплекса и, прежде всего, глюкоамилазы.

Поставленная цель достигается методом индукцирЬванной селбкции, а именно тем, что на споры исходного штамма действуют нитрозодиметилмочевпной и Уф-лучами в комплексе с этипенимином.

Полученный штамм обладает в 5,53,О раза большей глюкоамилазной актвв оЙОСТ1), в 2,2-2,5 раза более высокой активностью сС-амилазы.

иТтпМм UViiiopUS t ittci-1. обладает следующими свойствами.

М орфология.

15

Столоны слабо выражены. Ризоиды коротко и слаборазветвленные, немногочисленные. Спорангиеносды до 5ОО мкм и прямые извилистые, 1О-20 мкм в диаметре, простые, отходят по 1-3 от

20 шейки ризоида или столоновидных гиф; часто с раздвоенной или неправильно мутовча1Х)-развет в ленной верхушкой. Иногда спорангиеносцы являются продолжением 373 гиф и тогда более длинные. Спорангии до 250 мкм в диаметре, при достижении полной зрелости они раскрываются. Колонка чаше ширококонич.ескай, реже приплюснуто-шаровидная или слегка коническая, 50-120-150 50-110-140 .мкм. Споры 5,5-10 4-54-6-7 мкм в диаметре эллипгические, часто слегка неравнобокне, часто и неправильной формы, частично уро ливые и тогда до 30 мкм в диаметре коричневатые. Хламидоспоры многочидлен.ные до 30-40 мкм в диаметре. Купьтуральные признаки. Минеральная среда Чапека с 2% крахмала и 10%-ным водным экстрактом из солодовых ростков. Мицелий хорошо развит, войлокообразнь и, сначала белого цвета, затем буровато-темно-серый. Спорообразование начинается после 24 ч. Высота мицелия 2-2,5 мм. Органическая среда. Сусловый агар, Мицелий плотяо-войлочньтй, характеризуется врастанием в. агар, вначале белый, рыхлый, затем буровато-серый. Высота мицелия 3-5 мм. Агаризованная , среда из 5%-ной вытяжки пшеничный отрубей и 5%-ного водного экстракта из солодовых ростков. Мицелий воздушш 1й. вначале белый. После 2-3 суток рос та мицелий буров1ато-темно-серЫй. Высота мицелия 2-3 см. Отношение к углеводам. Ассимилирует глюкозу, рамнозу, араб нозу, галактозу, ксилозу, сахарозу, мальтозу, фруктозу. Ассимилирует слабо пакТозу, маннит, раффинозу. Не ассимилируе сорбит. Температурный интервал-роста 28-55 с,рН 3,0-8,0. Пример промышленного применения штамма. Предлагаемый штамм может быть использован в ферментной промышленности как продуцент глюкоамипазы при культивировании поверхностным и глубинным способами. Поверхностнре культивирование. Питательной средой для поверхностного кул тивярования плесневого гриба Rtiilopus i, служат отруби с влажность 62%, которые расклада ваются на кюветы слоем порядка 3 см. Температура выра.шивапия . Допустим разогрев кул1 туры в процессе роста до 50-.. Время вырашивания 34 ч. Состав отрубей пшеничных,%: Крахмал;13-15 Клетчатка8-12 Белок15-17 Опытное выр ащйвание поверхностной Культуры проводилось в условиях Тпраксинского ферментного завода. Глубинное культивирование, Питательная среда, %: картофельная мезга 9; 0,15; CciCe.20,05; Ксе 0,5; )2ИРОд 0,9. Выращивают в качалочных колбах емкостью О,75 л на круговой качалке, 200 об/мин. Обьем среды 100 мл. Время вырашивания 72 ч. Температура 34 С. Активность глюкоамилазы 15-20 ед/мл (глюкоксидазный метод). Пример применения в пивоваренной промышленности. Используется концентрированный ферментный препарат Глюксритицин ПЮХ полученный из поверхност ной культуры штамма КЫтори для приготовления пива с 40% несоложенного сырья. Затирание проводят по следующему режиму. Затирание (ячмень +10% солода +1/4 ферментного препарата) при температуре 4 5°С; белковая пауза 20 мин подогрев до 50 С; выдержка 30 мин; подогрев до температуры осахарйвания осахарявание 30 мин. Одновременно с выдержкой несоложенного затора при 50с затирают оставшиеся частиссшада. и ферментного препарата при 50-5 2С и выдерживают 30 мин. Затем температуру повышают до 6 1-63 С и выдерживают 30 мин. Отбирают густую часть солодового затора и присоединяют к несоложенному затору для совместного кипячения в течение 30 мин. Отварку соединяют с солодовым затвором, температуру устанавливают 67-7О С и выдерживают при этой температуре до полного осахарйвания по йодной пробе. Затем температуру повышают до 75-7вС и центрифугируют. В качестве контроля служат сусло и пиво, полученные с применением 15%-ногс несоложеннрго материала, такое количество применяется в промышленности без добавления ферментных препаратов. Затор готовят из того расчета, что зерном припасы и вол.а расходуются в соотношении 1:4. Сусло готовят по режиму Воронежского пивзавода следующим образом. Затирание ( ячменя+1/3 солода, темп атура 40 С); белковая пауза 30 мин; подогрев до Мальтозная пауза 40 миа подогрев до температуры осахарйвания; осахаривание 30 мин подогрев до кипения; кипячение 4О мин; затирание 5 73 основното затора 2-3 солода, температура 4 О С; белковая пауза 30 мин; смешиватше отварки и затора, температура 63 С; мальтозная лауза 40 мин; подогре до температуры осахаривания осахаривание подогрев до 75° С; центрифугирование. Суспо кипятят с хмелем в течение 2 ч, задают хмель в 3 приема. Состав и основные показатели свойст сусла приведены в табл. 1. Охмеленное сусло охлаждают до б С и засевают дрожжами. После главного брожения зеленое пиво снимают с осадка и ставят на дображивание при . По истечении 21 суток пиво подвергают фильтрации. Показатели готового пива представлены в . 2. По органолептической оценке опытное пиво аналогично контрольному. Методы определения активностей. Определение глюкоамилазной активнос ти проводят глюкозооксидазным методом по Далквисту, модифицированным лабораторией технохимконтроля института ВНИИсинтезбелок. 6 Активность с{ -амилазы определяется колориметрическим методом (Фертман Г.И. и Шойхет М. И.). Протеолитическую актив,ность определяют модифицированным методом Ансона. Предлагаемый штамм UhiiOpu tv-iticit может быть внедрен в производство как высокоактивный продуцент глюко милазы, устойчивый к повышенным температурам при культивировании в камерах без кондиционирования воздуха и не имеющий ферментов трансферазного де{йтвия. Наряду с глюкоамилазой: гриб синтезирует активную оС-амилазу ( 30-40 ед/г воздушно-сухой культуры), что выгодно отличает его от известньгх штаммов RVxizopus cleEewar BnRhi iopusP gt oiues P. аличие активной cL -амилазы в ферментативом комплексе продуцента позволяетоблегчить и ускорить процесс раскладки питательной среды при производственном выращивании. Использование комплексного, препарата Тлюкотритицина niOX в пивоваренной промышленности при переработке 40% несоложенного ячменя для завода производительностью. 7 млн.ад. в год обеспечивает экономический эффект 1О4 тыс.рублей. Т а б л и ц а 1

Содержание декстринов, г /100 мл2.252,45

в%

19,422,3

26,224,9

54,452,8

Т а б л и ц а 2

Продолжение табл, 2