1
Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной и клинической кардиологии.
Известен способ определения курсовой лечебной дозы лекарственных средств анаболического дерктвия путем исследования мышечной ткани до и после введения гфепарата 1 .
Однако известный способ обладает невысокой точностью.
Целью изобретения является повышение точ- ... нести способа. Эта цель достигается тем, что измеряют объем митохондрий или миофибрияп в единице объема мышечных клеток микарда и по наименьшей дозе препарата, приводяшей эти значения к эталонным, характерным для данной,j возрастной группы, определяют эффективную курсовую лечебную дозу.
Способ осуществляют следующим образом.
У животных с моделью заболевания миокарда в процессе лечения лекарственными средствами у анаболического действия берут биопсию мышечной ткани миокарда одним из известных способов, подготавливают образцы для электронномикросколического изучения. По полученным негативам
1электроннограмм точечным методом Глаголева |Щ)оводят стереометрический анализ прямоугольной тесттсистемой с постоянной 0,9 (одна точка на 0,9 мкм) с целью определения в единице объема клетки исследуемых биоптатов величин относительных объемов митохондрий или миофибршш (т. е. объемную плотность указа1шых органелл).
Стереометрический анализ проводят на негативах, полученных при прямом злектронномикроскопическом увеличении в 3300 раз, путем подсчета точек при наложении на негатив тест- системы, вьшолненной на прозрачном материале. Полученные числовые значения откладывают на графике, и продолжают стереометрический анализ до получения стабилизированного значения признака, что контролируется по приближению кривой к асимптоте, и гфекращают анализ при получении значений признака с оишбкой измерения 1%.
Проведенный анализ показал, что введение лекарственных средств анаболичесого действия изменяет числовые значения объемной плотности доминирующих органелл мышечных клеток в нащ аяпеют значе1шй, характерных для здорового органа данной возрастной группы эксперимен тальных животных. После введения различным группам животных раз1шх курсовых доз исследуемых лекарственных средств и измерения объемной плотности митохондрий или миофибршш за эффектюзную курсовую лечебную дозу принимают наименьшую ИЗ доз, приводящую измененные экспериментальной патологией величины объемов указанных органелл к эталонным значениям, характерным для данной возрастной группы. П р и м е р. С целью максимального прибли жения модели заболевания (сердечной недостаточ ной атеросклеротического генеза) к патологии человека определение оптимальной курсовой дозы лекарственного средства анаболического действия -- ретаболила, проводили на кроликах самцах породы шиншилла в возрасте 18 мес. Возраст кролей 18 мес эквивалентен возрасту человека 50 лет. С данного возраста, как известно, начинается развитие этеросклеротических гораженйй, в том числе и миокарда. Эксперимент проведен на 40 кроликах массой 2,6-3,0 кг, разделе гаых на четыре равные rpynnb Первую группу составили интактные животные, спузюшшие возрастным контролем. У 30 остальных кроликов с целью создания модели близкой к патологии человека - хронической сердечной недостаючйости атеросклеротического генеза - вызывали атеросклероз по Аничкову Н. Н. пу тем введения холестерина по 0,3 г/кг веса с овощами ежедяевно в течение 3-х последних месяцев жизни животных. За 1,5 мес. до окончания опыта производили сужение брюшного отдела аорты (коарктадию) на 50% исходного диаметра по Меерсону. Через 15 дней после операции и до окончания опыта животные Ml и V групп получат лекарственное средство анаболического действия - ретаболил, путем внутримышечного введения. Кролики II группы лекарственных средств не получада и служили контролем модели. Кролики Ш группы получали ретаболил по 10 MI/кг веса два раза в месяц (курсовая доза 20 мг/кг веса). Кролики IV группы получили ретаболил в курсовой дозе 15 мг/кг веса животного. После проведенного курса лечения экспериментальных животных с созданной на них моделью сердечной недостатошости атеросклеротического генеза у них брали кусочки мышцы сердца (биопсию) для электронномикроскопического исследования. Фиксацию и проводку материала проводили по стандартным методикам. Срезы получали на ультратоме УМПТ-2, просмотр и фотографирование осуществляли с помощью электронного микроскопа УЭМВ-ЮОк при напряжении 75 кВ и прямом электронномккроскопическом увеличении в 3300 раз. |Пол}ченные негативы подвергали стереометри ческому анализу. Результаты экспериментальной проверки влиятм различных доз ретаболила на объемную плотность митохондрий и миофибрилл в мышечных клетках сердца кроликов в возрасте 18 мес. приведены в таблице. Из приведенных в таблице данных следует, что объемная плотность митохондрий и миофибршш в мышечных клетках сердца кроликов 11 грутты значительно отличается от этих показателей в возрастной норме (1 группе) - 40, 60 и 35, 20 для митохондрий и 39, 60 и 44, 70 для миофибршш, что свидетельствует о значительном изменении условий функционирования миокарда при указанной экспериментальной модели патологии человека. Введение кроликами III и IV групп курсо«вых доз ретаболила з 20 и 15 мг/кг веса соответственно изменяет объемную плотность митохондрий и миофибрилл в направлении возрастной нормы. Месячный курс лечения ретаболилом приводит значения объемов этих органелл к близким между собой велич1шам: мт - 36, 20 в Ш и 36,00 в (V группах; мф - 43,90 и 44,20 соответственно. Результаты показьшают. что курсовая доза ретаболила, установленная известным способом (20 мг/кг веса), не является оптимальной, так как аналогичный лечебньгй эффект может бьггь получен при применении установленной по предлагаемому способу дозы (15 мг/кг веса), составляющей 75% дозы известного способа. Как следует из полученных данных, для кроликов 18 мес. с вышеописанной моделью сердечной недостаточности, оптимальной, т.е. наиболее эффегагивной курсовой дозой ретаболила является доза в 15 мг/кг веса вместо 20 мг/кг веса по известному способу. Применение меньших доз при равном терапевтическом эффекте имеет предпочтение в клинической практике, так как уменьшает возможность проявления нежелательных побочтгых влияНИИ лекарственнь1х средств и имеет несомкенньп эффект при массовом их 1фименении.
Использование предлагаемого способа определения курсовой лечебной дозы лекарственных средств анаболического действия позволяет значительно повысить точность определения эффекпшиой курсовой лечебной дозы в экспериментальной кардиологии; обеспечивает возмо)( определения истиниой индивидуальной курсовой лечебной дозы, строго адекватной морфофункииональиому состоянию миокарда в условиях клиники.
Формула изобретения Способ определения курсовой лечебной дозы лекарственных средств анаболического действия
,гутем исследования мышечной ткани до и после введения препарата, отлвчаюшийс я тем, что с целью повьшкния точности способа, измеряют объем митохондрий шш- миофйбрилл в единице объемо(ъолшечных клеток миокарда и по наименьшей дозе препарата, приводящей эти зиачепяя к эталонным, характерным для данной возрастной грушш, определяют эффективную курсовую лечебную дозу.
Источники ииформации, принятые во внимание при экспертизе I. Бюллетень экспериментальной биология. 1977, N И, с. 613-616.
