(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНО-ХИРУРГИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения больных раневыми инфекциями. Известен способ лечения гнойнохирургических инфекций с помощью бак териофага 1 . Однако известный способ Лечения длителен (60,7 дней), а положительные результаты лечения лишь в 65% случаев. Целью изобретения является сокращение сроков лечения. Эта цель достигается тем, что используют монофаг с литической активностью, усиленной 2-3-х кратным пасс рованием на питательных средах, и адаптированный к микрофлоре больного Пример. От больных с абсцес;сами, флегмонами, маститами, карбункулами, остеомиелитами и др. хирургичесмими заболеваниями выделяют воз будителей из содержимого раны с помощью ватно-марлевого тампона. Среди испытуемых фагов (стафилофаг, стрептофаг, колифаг, синегнойный и протей ные фаги) отбирают наиболее активные клоны и затем литическая активность отобранных монофагов усиливается-путем пассажей на выделенных от дагнног больного возбудителях с применением, твердых и жидких питательных сред. Для этого исследуемую культуру бактерий, предварительно выделенную из раны при посеве ее содержимого с там.пона, засевгиот в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Эту культуру инкубируют 3-4 ч до концентрации микробных клеток, равной 1 млрд, микробных клеток в 1 мл стандарта. Затем бульонную культуру после инкубации засевают на мясо-пептонный агар в чашке Петри. Стекло дна чашки расчерчивают на клетки, количество которых соответствует, количеству фагов, имеющихся в наборе, а затем чашки подсушивают в термостате с открытой крышкой 20-30 мин.. Далее пастерЬвской пипеткой или петлей наносят различные фаги (стафилофаг, стрёптофаг, колифаг, синегнойный или протейный фаги) в зависимости от вида культуры на поверхности питательного агара в чашке Петри, засеянного испытуемой культурой. После подсыхания капель фагов 10-20 мин чашку переворачивают крынкой вниз и инкубируют не менее 5-6 ч при 37 С до появления зон просветления в местах нанесения фагов. После инкубации
производят отбор фага из на11более четко выраженных зон лизиса на по- ; верхности газона испытуемой культуры Для последующего получения соответствующих фаголизатов используют метод агаровых слоев по Грациа. В этом случае применяют 1,2%-ный мяco-пeптoн вый агар, на поверхности которого разливают О,7%-ный предварительно растопленный и охлажденный до 45-48° мясо-пептонный агар с предварительно внесенной в него тщательно перемешанной смесью 0,1 мл бульонной культуры и 0,5 мл специфического Для данной культуры фага.После застывания ВерхHeiro сЙОя ага:рача1Йку Петри, перевернутую крышкой вниз инкубируют при 37°С, йрйчем для оценки результата опыта обр ащакгт внимание либо нa.pёразбванйё зон лизиса на поверхности агара, либо на отсутствие |)оста Культуры в этом же агаре. ПосЛе 1820 ч инкубаций пЬследова- ейЁШ снимают и переносят в стерильный флакон trHa4anaверхний слой агара,, а затем смыв с поверхности нийнехй елбй агара в объеме 5 мл мясо-пептонного бульона. Полученную смесь агара в стерильном флаконе периодически встряхивают в течение 30 мин. Эту смесь затем центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в стерильный флакон. Затем фаголизат очищают от бактериальных клеток. Для этого производят фильтрацию фаголизата при помощи вакуумного насоса через бактериальные свечи (лучше всего использовать свечи Шамберлена)..
Бактериальные свечи предварительно стерилиз тот вместе с приемником в автоклаве текучим паром.
С целью усиления литическрй активности монофагов проводят не менее 2-/ 3 пассажей на плотной питательной ёрВДё й 1ашках , засеяннызГ с- пытуемой культурой с вноВь поЛу 1енным монофагом по указанному способу. Кроме твердых питательных сред можно использовать и жидкие питательные среды. В этом случае в 4,51Шйясбпептонного буЛьона вносят 0,5 мл то- го или иного фага (стафилофаг, стрептофаг, колифаг,. синёгнойный и протейный фаги) и 0,1 мл выделенной от ; больного бульонной культуры, инкубированный до 3-4 ч в;термостате. Эту смесь выдерживают при и сравнивают со степенью мутност Контроль- ; ного бульона, зараженного испытуемыми бактериями без добавления в йего фага. В результате сравнения опытной и контрольной пробирок устанавливают наличие лизиса куЛьтур. Подобный процесс повторяют 2-3 раза самым пассируют фаг в жидкой питатель-, ной среде, повйиая его литяческую активность путем пассажей на вЬщелен ных от данного больного возбудйте745524
лях. Полученные адаптированные моно фаги после усиления литической активности проверяют на стерильность и активность. Титрование фага проводят с целью определения количества зрелых фаговых частиц в единице объема (титр фага) . Для этого использьтот либо плотные питательные среды, либо жидкие питательные среды. Наиболее распространенным и точным явЛяёг ся метод агаровых слоев, предложенный Грациа. Этот метод основан на допущении, что каждая частица вируса да:ет потомство, определяемое визуально по наличию на газоне чувствительной культуры бактерий зон лизиса, полу чивьоих;название негативных колоний. 1Благодар1Я данному методу устанавливают количество фаговых частиц, способных образовывать Негативные колонии. При титрованйи методом агаровых слое следует параллельно засевать не мене чашек фагом из одного и того же разведения. Титр фага определяют путем подсчета числа негативных, колоШй на параллельных чашках. Титр мо.нофагов (их;активность по Аппельману) обычно соответствует для стафилококков 10 /для стрептококков 10 для протея 10 , Для синегнойных палочек , для энтеропатргенных кишечных палрчек 10.
Предлагаемый способ лечения предусматривает применение препаратов монофага либо местно в виде орошения, примочек или тампонирования, либо парэнтерально (подкожно или внутримышечно) . В первом случае сначала промывают рану перекисью водорода и высушивают раневую поверхность, а затем удаляют пинцетом из раны рыхлую некротическую ткань. Края раны при этом обрабатывают настойкой йода, после смоченным монофагом в количестве 7-8 мл тампоном рыхло тампонируют рану. При абсцессах монофаги применяются местно после вскртия и дрегирования гнойника путем смачивания тампонов, вводимых в рану илипутем промывания монофагом гнойной полости. В другом случае, например при карбункулах, эти препараты можно вводить непосредственно В очаг под основанием инфильтрата путем рбкаЛЫВания. Продолжительность лечения адаптированными монофагами зависит от тяжести заболевания, специфики возбудителя и своевременности лечения. При раневых инфекциях средней тяжести курс Лечения монофагами не превышает 2-3 недель.
Предлагаемый способ лечения приводит к более быстрому течению раневого процесса. Как показали клинические испытания, все больные (30 чел.), леченные с применением монофагов, провели в клинике 1123 койкрдня, что на одногр больного составляет 30,7 дней, а такое же количество Вольных, леченных с применением производственных фагов (полифагов) , находились в стационаре 1823 койкодня, что составляет экономию в 700 койко-дней при госпитализации указанного количества больных хирургическими инфекциями (За еп.). Кроме того, у больных, леченных монофагами, гладкое заживление раны после наложения ранних вторичных швов наступало у 10-ти чел.,.а в другой группе больных, леченных полифагами, такого результата удалось добиться лишь у двух больных. Из группы больных, леченных адаптированными монофагами, лишь двое выписано на амбулаторное лечение с незажившими ранами, в то время как в группе больных, леченных полифагами, таких больных оказалось 11. Способ лечения монофагами прост и дает возможность быстрого приготовления специфического антибактериального препарата. Все это позволяет широко использовать предлагаетй зпдсоб лечения условиях многих хирургическйх стационар6в.
Формула изобретения
Способ лечения гнойно-хирургических инфекций с помощью бактериофага, отличающийся тем, , с
0 целью сокращения сроков лечения, используют монофаг с литической активностью, усиленной 2-3-х кратным пассированием на: питательных средах, и адаптированный к Микрофлоре, больного.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Казанский медицинский журнал, 1972, 2, с. 25-27.
0
