Способ выявления аллергического воспаления при увеите Советский патент 1980 года по МПК A61B10/00 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии.

Известен способ выявления аллергического воспаления при увейте путем определения в крови концентрации 5 иммуноглобулинов

Однако этот способ имеет невысокую степень специфичности при оценке аллергического компонента воспаления, Поэтому параллельно с использованием О названных показателей крови ставят внутрикожные пробы, не достигая при этом повышения степени специфичности адГлергического компонента воспаления..15

Для повышения специфичности способа выявления аллергического воспаления при увейте в крови дополнительно определяют концентрацию адреналину серотонина и 11-оксикортйкостероидов 20 и по Уровню концентрации исслеяуемлх веществ выявляют аллергическое воспаление при увейте.

Способ осуществляется следующим

образом.

250 кроликов (500 глаз) разделяют на две группы. Каждую группу иммунизируют отдельным.тканевым (хрусталик, сетчатая оболочка, сосудистая, оболочка, лошадиная, сы.врротка, йлчий аль- 30

бумин) или микробным (стафилококк, стрептококк,кишечная палочка) антигеном по схеме в течение одного месяца, Спустя 10 дн. после окончания иммунизации вводят в переднюю камеру глаза разрешающую дозу одноименного -гдатигв- на. У животных с полученной моделью увеита определяют клинико-офтальмологическую и морфо-химическую картину степени гшлергического воспаления в оболочках глаза (с использованием) метода Нисселя и выявления конфигурации ДНК и РНК по Браше, общего белка по Гейеру,гликоген по Монтгомери и активности цикла ферментов гликолиза по 14ильману с соавторами) .Одиовременно выполняют концентрацию абсолютного количества антител к провоцирующему увеит антигену и выделяют их в чистом виде с полющью белково-целлюяозны х комплексов (иммуиосорбентов), а также определяют концентргщию моиоаминов (серотонин,адреналин) по Оксенкругу и 11-оксикорхикостероидов по методу Панкова и Усватовой,При икмунизации тканевыми анти,генами с адьювантом Фрейнда токсичиоаллергический увеит выявляют тяжелее, чем без адъюванта Фрейнда, Тяжесть клинико-офтальмологических и структуро-химических изменений в глазу при увейте, характеризующаяся снижением концентрации ДНК, РНК, белков, гликогена и активности ферментов цикла гликолиза, имеет прямую связь с увеличением концентрации антитела к провсщирукяцему увеит антигену и сербтони на в крови с одновременным-уменьше,нием концентрации адреналина и IIоксикортикостероидов.

При иммунизации ткгшевыми и особенно микробными антигенами без адъюванта ФрейНда выявляют низкую концентрацию антител к про роцирующему увеит гштигену, Содёржешие серотонина,адрёНсшина и 11-оксикортикостероидов у объектов исследования &лло или незначйтеМбйр изменено или оставешо в пределах HOpN«, а клинико-морфологические проявления увеита были нечетко выражены. Отчетливую модель токсико-аллергического увеита получили только после реиммунизации. При этим определяли заметное повьпаение концентрации антител и серотонина в крови объекта исследования с одновременным снижением содержания адрен алии а . и -И-оксикортикостероидов .При иммунизации животных выявлены аИтйгенНые; свойства изучаемых веществ в уалвающейстепени хруст 1ик сет4агая оболочкат сосхдистая оболочка глаэг лсшадиная .сыворотка- бычий аль- бумин- микробные антигены,

Клинико-офтсшьмолозгические проявления токсико-аллергического увеита у животных с определеннымииммунобиохимическими изучаемыми показателями крови сопоставлены с проявлениями увеита у человека. Одновременно у человека исследована концентрация антител к предпалагае эму провоцирующему увеит антигену и определено содержание серотонина, адреналийа и II-оксикортикостероидов. Как правило, при наличии аллергического компонента воспаления- при увейте у человека, сопровождающимся наличием антител к провоцирующему увеит антигену, выявляют повышение концентрации серотонина и снижение содержания адре.налина и 11-оксикортикостероидов в .крови.

Пример . Предварительно проводят иммунизацию 20 кроликов ЛОШат диной сывороткой в количестве 0,1 мл на 100 г Becai животного по схеме с адъю вантом фрейнда. После окончания иммунизации у животных при концентрации антител в крови 150-200 мкг/мл введение разрещающей дозы антигена в количестве 0,1 мл в переднюю камеру г;1а:за способствует, развитию экссудативно-альтернативной форил увеита с инволюцией токсико-аллергического воспаления в глазу на 35-40 день. На третий день после введения раэр&аающей дозы антигена при максимальной воспалительной реакции глаза берут

.пробу крови. Для исследования абсолютной концентрации антител к 0, 5 мл исследуемой сыворотки крови добавляю-т 0,2 мл иммуносорбента, содержащего иммобилизированную лошадиную сыворот5 ку. Через 30 мин инкубации иммуносорбент отмывают от исследованных белков. С помощью 0,5 мл глицин HCIбуфера рН 2,5 отделяют от иммуносорбента, связывавшиеся антител и их

Q абсолютную концентрацию определяют ИМмунодиффузионным способом или методом спектрофотометрии. Концентрация антител 160-200 мкг/мп.

Концетрация 11-оксикортикостероилов, определяемая по методу ТТанкова

и Уйватовой.

Концентрация серотонина, выявляемая по методу Оксенкруга и Шаталовой, была повышена до 5-10 мкг/мд, а адреналина снижена до 0,004 мкг/мл. 0У животных при концентрации антител в крови после иммунизации лсшадиНой сывороткой, в пределах 75-; 100 мкг/мл после введения разрешающей . дозы антигена, как правило, раэвива5 ется менее тяжелый .по клиническому

течению подострый экссудативный увеит. При этом в крови концентрация иммунных тел к провоцирующему увеит антигену в пределах 80-100 мкг/мл, серото- Q нина до 3 мкг/мл, адреналина до

0,009 мкг/мл, 11-оксикортикостероидов до 10 мкг на 100 мл крови.

Провидят параллельные иммунологические и биохимические исследования .

с у 120 больных с увеитами различной этиологии и доноров.

jGlля диагностики аллергического увеита проводят 350 иммунологических исследований по выявлению антител к бактериальным антигенам в реакциях

0 микропреципитации (метод нефелометрии) и бЯасттрансформации с бактериальными антигенами и фитогемагглютинином. Одновременно проводят исследования содержания 11-оксикортикостероидов в

5 плазме крови: гидрокортизона и кортикостерона, адреналина и серотонина, а также активности ферментов углеводо родного обмена.

Результаты исследований показыва0 ЮТ повышение иммунологической peeiKтивности у 10% больных и понижение ее более чем-в 50%,- у остальных больных выявлена нрр мальная реактивность. Установлен, что при повышенной

5 иммуноло|7ичее1кой реактивности значительно снижено содержание свободного .гидрокортизона по сравнению с нормальной реактивнЬстыо (4,2-5,5 при норме 6,2 мкг/100 мл плазмы) и повышено содержание кортикостерона (3,0-4,7

0 при-норме 2,9 мкг/lQO мп плазм 1) . Кромя того, при этом состоянии обнаруже:но также значительное повышение содержания белковосвязанных форм г гидрокортизона и кортикостерона. Со5 держание адреналина было повьвиено

до 50%, а серотонина в 1, раза т сравнению с контрольной группой (доноры), Активность ферментов сыворотки,крови больцых,с повышенной иммунологической реактивностью при этом быпа повышена по сравнению с нормальными показателями

При снижении иммунологической реактивности содержание гидрокортизона было снижено до 50%, а содержание свободного кортикостерона наоборот увеличено в 2 раза, показатели содер.жания адреналина и серотонина увеличены в 2-4 раза и значительно возрастала активность ферментов углеводного обмена.

Предлагаемлй способ диагностики в сочетании с офтальмологическими данными позволяет судить о нгшичии аллергического воспаления глаза и служит обоснованием при выборе .методов иммунотропной терапии у больных увеитами с различной иммунологической реактивностью.

Экономическая.эффективность данного способа состоит в сокращении сроков диагирстичейкого обследования с

10 до 5 дней и обосновании 1ыбора эффективной терапии. На основе применения метода сокреидаются сроки лечения, предупреждаются рецидивы и улучшаются функциональные исходы.

Формула изобретения

Способ выявления аллергического воспаления при увейте путем определения в крови концентрации иммуноглобулинов, о т л и ч а ю щ и и с я тем, 1что, с целью повышения специфичности способа, в крови дополнительно определяют концентрацию адреналина, серотонина и 11 оксикортикостероидов и по уровню концентрации исследуекых веществ выявляют аллергическое воспаление при увейте.

20Источники информации,

принйтые во внимание при экспертизе

1. Материалы 2-го Всероссийского съезда офтальмологов. 1968, с. 272294. .

25