Способ выявления аутоаллергического компонента при увеитах Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 A61K39/00 

Изобретение относится к медицине,

к офтальмологии, и предназначено для иммунодиагиостики аутоа/ыергии при увеитах.

1.1,елыо изобретения является повышение

точности диагностики.

Способ осуществляется следующим образом.

Забор слезной жидкости проводят с по- меланжера, перед постановкой ции пассивной гемагглготинации эритроцитов (РПГА) слезную жидкость инактивиругот I водяной бане в течение 30 мин при 56°С и затем абсорбируют бараньими эритроцитами R течение 18 ч.

Г еакцию пассивной гемагглютинации эритроцитов проводят в микротитраторе Так- качи но оби1епринятой методике; диагпости- кум используют в виде 1%-ной взвеси сен- спбилизирораных эритроцитов в объеме 0,025 мл на 0,5 мл каждого разведения исследуемо) слезной жидкости, начиная с 1:16.

Приготовление стойкого эритроцитарното диагпостикума: 1/ в качестве сенситина используют 5-антиген - очищенную от при- месрй водорастворимую фракцию белков наружных сегментов палочек (НСП) сетчатки, полученную из глаз крупного .рогатого скота. НСП выделяют из сетчаток и очищают от примесей путем нескольких последовательных центрифугирований в растворах сахарозы, содержащих 0,1 М KCI и буфер (0,05М трис-ПС, рН 7,4). Затем НСП подвергают осмотическому шоку в 10-кратном объеме дистиллированной воды и центрифугируют при 100 000 я; надосадочную жидкость концентрируют диализом против 50% раствора полиэтиленгликоля (м. в. 15 000). Полученный раствор, содержащий водорастворимую фракцию белков (1.мг/мл) ПСП - S антиген используют для сенсибилизации эритроцитов; 2/ бараньи эритроциты, стабилйзирова1 пые ацетатальдегидом по Чиеп (в течение ) и танизирован- ные в течение 15 мип при 37°С, сенсибилизируют S-антигеном в дозе 68 мкг/мл в течение 60 мин/рН среды 6,4; температура 45-48°С/; 3) сенсибилизированные эритроциты консервируют 0,3%-ным раствором, формалина.

Высокая специфичность и чувствительность диагностикума подтверждена в опытах исследования гипериммунных кроличьих сывороток (нарастание титров в процессе иммунизации от О до (1:512) -(), контрольных гетерологичных сывороток (от кроликов, иммунизированных экстрактами увеальной ткани и роговицы, титры --О- -1:8) и сывороток от контрольных интакт- ных животных) положительных РПГА не наблюдалось).

Анализ соотношения содержания S-анти- тел и клинических особенностей увеита показал, что S-антитела обнаруживаются в слезной жидкости больного глаза чаще (,01) и в значительно более высоких титрах

(,6), чем в сыворотке кропи больных увеитами. У здоровых доноров и больных каратитами.и канъюктивитами S-антитела в сыворотке и слезе практически пе выявляются.

Таким образом, наиболее информативными в плане выявления аутоаллергических реакций при увеитах является исследования слезной жидкости.

Частота обнаружения и уровень S-антител в слезной жидкости достоверно связаны с активностью увеита и тяжестью поражения сетчатки. Повыщепие содержания S-ан- тител в слезной жидкости больного глаза выше (1:64) - () свидетельствует об активности аутоаллергического процесса при увеитах.

Определение антител предлагаемым методом позволяет выявить аутоаллергические реакции как в период индукции увеита, так и в период нарастания дистрофизических

0 изменений в сетчатке. Наиболее вероятным периодом для выявления S-антител в слезной жидкости являются первые 5-7 дней от начала обострения хронического увеита. У больных с подострым течением увеита, при

5 нарастающем снижении остроты зрения и

помутнении преломляюп,их сред, определе ние S-антител може служить признаком

аутоаллергического поражения сетчатки.

Пример . Больная В, 13 лет. Диагноз: Q хронический рецидивирующий периферический увеит ОИ, предположительно герпетической (инфекционно-аллергичегкой) этиологии. Давность заболевания 5 лет.

Первое обследование проведено в начале обостроения хронического увеита, через 5 5 дней после выраженного усиления воспалительных симптомов на ОИ. Объективно: ОД - преципитаты, мелкоточечная запо- телость эндотелия, взвесь в стекловидном теле, глазное дно за густым флером; vi5us 0,2 с корр. 0,50 - прс цппитатов боль- ш е, взвесь в стекловидном теле более грубая; глазное дно за ф.лером, visus 0, с корр. 0,3-0,4.

Титры S-антител в слезной жидкости ОД 1:512; OS 1:128. В сыворотке крови с S-антитела не обнаружены.

В соответствии с клинико-иммунологичес- кими показателями больной назн з-чена патогенетически направленная терапия, включающая гипосенсибилизирующие препараты, преднизолон, ангиопротекторы. Q При обследовании спустя 4 дня на фоне лечения отмечено снижение титров S-аитител 9 слезной жидкости ОД до 1:32 и OS до 1:8.

Следующее обследование проведено через 6 месяцев в период стойкой ремиссии увеи- 55 та на ОИ (на фоне поддерживающей кортикостероидной терапии). Объективно: ОИ; единичные старые отложения на эндотелии роговицы, несвежие (тяжист1,1е) помутнения в стекловидном теле; гл;ки1оо лно доступно осмотру, вили1э1 ггргшатые очнжки с доволыю четкими границами. В слезной жил- костн ОД 5-ан7итела не выявляются; в OS -- титр 1:64. В сыворотке кропи антитела не обнаружены.

Контрольное иммунологическое обсле.-ю- вамие проведено через месяц при стойкой клинической ремиссии увеита на СИ. Титр S-антител в слезной жидкости . В слезной жидкости OS и в сыморотке крови S-антитела не обнаружены.

Способ позволяет диагностировать развитие аутоаллсрги ского компонента при увеитах. Точность диагностики повьииается в 2 раза, что позволяет своегзременпо

назначить патогенетически оОоспопаниос лечение, и у.пучшить CIO р(у.1Ьт;м 1.1.

Форм1/ла и:п1бр( гснпя

Способ (и явления аутоаллергпческого компонента при увеитах путем опре.аслс- имя тканеспепифических аитнтел к антигенам сетчатки, отличающийся тем. что, с целью новьпнения точности способа, определение антител осуществляют к 5-аптиген.у сетчатки в слезной жидкости и при титре антител выше (1:64)-(1:128) выявляют на- личи аутоаллергнческоро компонента гфи увеитагх.

Изобретение относится к медицине, предназначено в офтальмологии для иммунодиагностики аутоаллергии при увеитах. Цель изобретения - повыигение точности диагностики. Для этого перед постановкой реакции пассивной гемагглютинаини (РПГА) эритроцитов слезную жидкость инактивируют в водяной бане 30 мин при 56°С, затем абсорбируют бараньими эритроцитами 18 ч. РПГА эритроцНгов проводят в микротитраторе Таккачи. В качестве диагно стикума используют 1%-ную взвесь сенсиби- лизироваииых эритроцитов в объеме 0,025 мл каждого разведения исследуемой слезной жидкости, начиная с 1:16. Определяют ткане- специфические антитела к S-антигену сетчатки в слезной жидкости. Анализ соотношения содержания S-антнтел и клинических особенностей цвета показывает, что S-анти- тела обнаруживаются в слезной жидкости больного глаза чаще, чем в сыворотке крови больных увеитамн. Это связано с активностью увеита и тяжестью поражения сетчатки. При титре антител (1:64) - (1:128) делают вывод об активности аутоаллерги- ческого процесса при увеитах. lO (Л С mri. СО оэ nU