Способ определения устойчивости растений хлопчатника к вилту Советский патент 1976 года по МПК A01K73/02 

3

Для выделения меченной ДНК грнба в 100 г культуральной массы вносят 2 мг предшественника биосинтеза нуклеиновых кислот - тимен и выращивают в культуральной среде путем встряхивания в 5%-ном растворе сахарозы в течение 24 час. Получают ДНК активностью 6000-7000 ими/мин на мг ДНК. Далее проводят молекулярную гибридизацию ДНК, выделенной нз хлопчатника с меченной ДНК-С - гриба. Для этого ДНК хлопчатника и меченную ДР1К-С гриба в соотношении 100: 1 растворяют в 0,12 М натрийфосфатном буфере с рН 6,8 и озвучивают при ПОМОШ.И ультразвукового диспергатора типа УЗДН-1 два раза в течение 3 мин (35 КГЦ, 0,8 а), денатурируют при 100°С в течение 10 мин и инкубируют в термостате при в течение 24 час. Затем смесь охлаждают льдом и разделяют на две равные части, одну из которых осаждают 5%-ной ТХУ (трихлоруксусной кислотой), а вторую часть доводят до 4 объемов ССР и наносят на миллнноровые фильтры размером 15 мм. Далее фильтры промывают под вакуумом 4-5 раз 10 мл раствора 0,ООЗМтрисбуфера, рН 9,2, до исчезновения радиоактивности в истекаюгцем растворе. После этого фильтры высушивают при комнатной температуре и измеряют их радиоактивность на счетчике типа ПСТ-100 с эффективностью 6-8%.

Расчет активности каждого фильтра проводят, принимая за 100% активность той части ДНК, которую осаждают 5%-ной ТХУ.

4

Полученные результаты

представлены в таблице.

Источники ДНК

Активность,

Uerticillium clahllae (гриб)

100 Sep. Mexicanum

5,1 Ташкент-1

32,0 108-Ф

58,0 С-4727

63,3

Как видно из таблицы, процент гибридизации ДНК хлопчатника с ДНК-С вирулентного гриба зависит от степени вилтоустойчивости растения, и по мере снижения вилтоустойчивости процент гибридизации увеличивается.

Формула изобретения

Сиособ определения устойчивости растений хлопчатника к вилту, включающий тестирование их на Verticiliium dahliae, отличающийся тем, что, с целью ускорення процесса определения и повышения его точности, из растений хлопчатника, взятых в фазе проростков, выделяют ДНК и проводят ее гибридизацию с ДНК-С, выделенной из Verticillium dahliae и по степени гибридизации судят об

их УСТОЙЧИВОСТИ.