Способ хранения культуры тнIовасILLUS FeRRooxIDaNS Советский патент 1981 года по МПК C12N1/00 

1

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и касается, длительного хранения промьшшенных штаммов микроорганизмов,в частности Thiobacillus ferrooxidans.

Тионовые бактерии-автотрофные микроорганизмы, способные существовать на минеральной среде за счет энергии, вьщеляющейся при окислении серы и железа, Thiobacillus ferrooxidans является строгим автотрофом с оптимумом развития рН около 2-2,5. Культура вьщерживает высокие концентрации металлов, мьшьяка и серной кислоты, что дает возможность использовать ее для въпделачивания металлов и мышьяка из руд и конщентратов.

Хранить штамм для промьпшенных нужд только методом периодического пересева на жидких питательных средах затруднительно и чревато его потерей.

Известный способ хранения тионовых бактерий в лиОфильно высушенном

СОСТОЯНИИ также не пригоден, так как культура не переносит органических защитных сред LlJ.

Наиболее близким к предлагаемому является способ хранения культуры Thlobacinus ferrooxidans в, жидком азоте. Капли культуры объемом 0,03 мл вносят в стеклянный стакан, содержащий жидкий азот, затем застывшие капли культуры переносят в стеклянные

10 колбочки, которые помещают в сосуд с жидким азотом {температура 120180 С) С2.

Однако этот способ трудоемкий, дорогостоящий и не всегда приемлем

15 для заводских и лабораторных условий.

Цель изобретения - упрощение способа и его удешевление.

Поставленная цель достигается тем, что в способе хранения культуры

20 Thiobacnius ferrooxidans, вьфащенный на жидкой питательной среде с последующей ее консервацией, культу- ру помещают в пробирку . или ампулу СО смесью песка и пирита, взятых в .соотношении 1:3, с последующей герметизацией пробирки или ампулы, при этом смесь песка и пирита вносят в количестве 2-3 г на 1-2 мп культуры плотностью 10 клеток/мл, Г Сущность способа заключается в следующем. Тионовые бактерии выращивают на жидкой среде 9К до уровня плотности 10 клеток/МП, затем вносят в стерильные пробирки или ампулы со смесЬю песка и пирита в соотношении 1:3 в количестве 1-2 мл, песок и пирит предр арительно промывают и высушивают. Смесь тщательно перемешивают, jjH в культуре 2-2,5 гН2350-370, количество окисленного железа f,5-, 7 г/л. Ампулы запаивают, пробирки парафинируют. В таком виде культуру хранят при комнатных температурах 2,5-3 f. Пример . Культуру Thiobaci 1 us ferrooxidans выращивают на жидкой среде 9К 48 ч. Состав среды 9К. 1-й раствор: в 700 мл дистиллированной воды растворяют сернокислый аммоний (NH4.) Зг; хлористьй калий (KCl) 0,1 г 5 фосфорнокислый калий двухзамещенный (КЛ.НР04.) 0,5 г; серно кисльй магний (MgSO.-7Hij 0) 0,5 г; азо ною слый кальций (Са(МО«)/) 0,01 г, 2-й раствор: в 300 мл дистиллированной воды растворяют 44,2 г РеЗОд 7HjO и добавляют 1 мл 10 N серной ки лоты. Растворы стерилизуют отдельно: 1-й раствор при 1 атм и 2-й раствор при 0,5 атм, перед употреблением оба раствора смешивают. Пробирки с культ рой тщательно встряхивают, закрывают резиновыми пробками, которые обрезают по краю пробирки, парафинируют ил же запаивают в большие ампулы. После 2,5 лет хранения титр культ ры равнялся 10 клеток/мл, рН 1,9 rHfj 315, количество окисленного железа 4,3 г/л. Регенерацию культуры осуществляют следующим образом. Содержимое пробирки или ампулы переносят в качалочные колбы с питаг тельной средой 9К. После определенного срока инкубации, который зависит от состояния культуры, ее можно использовать для работы. Хранение культуры в запарафинированных пробирках и запаянных ампулах в течение 3 лет обеспечивает жизнеспособность клеток Thiobacillus ferfooxidans. Таким образом, предлагаемое техниче кое решение позволяет упростить и удешевить способ хранения культуры Thiobaci 11 us ferrooxidans. Формула изобретения 1.Способ хранения культуры Thlobacillus ferrooxidans, вьфащенной на жидкой питательной среде с последующей ее консервацией,, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и его удешевления, культуру помещают в пробирку или ампулу со смесью песка и пирита, взятых в соотношении 1:3, с последующей герметизацией пробирки или ампулы. 2.Способ ПОП.1, отличающийся тем, что смесь песка и пирита вносят в количестве 2-3 г на -2 мл культуры плотностью 10 клеток/мл. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Соколов Г.А., Каравайко Г.И. Физиология и геохимическая деятельность тиононых бактерий. М., Наука, 1964. 2.Manchee R.I. Journal of Upplied bacteriology, volum. 38, № 2, p.191-192, 1975 (прототип).